人工授精操作规程细则

人工授精#操作#细则 人工授精操作规程细则 一. 准备工作 二. 精液采集 三. 精液处理和质检 四. 精液稀释和保存 五. 精液的运输 2006年10月12日 一.准备工作 1.​ 将所用的人工受精器材在前一天进行消毒。（蒸煮消毒30分钟） 2.​ 在采精前一小时消毒、更衣进入化验室。 3.​ 打扫卫生，包括所有工作台、墙面和地面，保持室内清洁。启动空调，将实验室的温度控制在22-24℃之间。 4.​ 打开恒温水槽，预热到37℃，准备好足够的稀释液，放入恒温水槽中。 5.​ 把所有的采精器皿放在预热箱中，预热到37℃。 6.​ 准备好采精怀，放入预热箱中。 7.​ 准备好检测设备：恒温载物台、显微镜、恒温冰箱。 8.​ 准备好笔记本、、笔、采精保鲜袋（容量1L）、橡皮筋、过滤沙布等。 9.​ 稀释液要在使用前一小时配好放在预热箱中,预热到37℃. 10.​ 当采精员准备采精时，把预热好的采精杯放入保温运送箱中，通过传递窗口送到采精区域。 二、精液的采集 1.​ 把公猪赶到采精区，然后诱导公猪爬上假母猪台。 2.​ 把采精杯从窗口中取出，放在一个安全并且容易拿到的地方。 3.​ 用干净的纸巾、消毒液（无刺激性的）对公猪的包皮囊进行擦洗。若公猪的阴毛过长，要对其进行修剪，然后消毒。 4.​ 用手握住阴茎，引诱公猪把全部阴茎伸出。 5.​ 把第一次射出液体流在地上，然后用生理盐水（0.7%）冲洗干净阴茎头。 6.​ 当奶油状乳白色的液体开始流出来时，再用采精杯进行采集。在采集过程中，手握阴茎的力度要适当，避免损伤公猪的阴茎，直到公猪完全停止射精。 7.​ 迅速把采集好的采精杯传递至化验室，不能拿掉过滤纱布。 8.​ 让公猪自己从假母猪台上下来（不要强行驱赶）。把公猪放回原位，准备下一头猪的采精。 9.​ 需要注意：很多精液从一开始采集时就容易受污染，破坏了精液的质量，我们必须在采集的过程中保证精液免受外界不良因素的影响。 三、精液处理和质检 1.​ 对采集好的精液放进预热好的烧杯中进行检验。 2.​ 观察精子的颜色和味道：奶白色而不是粉红色，带咸腥味。 3.​ 精子的密度：用专用的精子计数器来计算出每亳升原浆精液中有多少亿个精子（每毫升8千万至8亿个精子）。 4.​ 精子的活力：一般用一百倍的显微镜来估算精子活力的百分比， 超过70 %以上有活力认为是正常的。 主要观察玻片的边缘有几层涟漪： A、​ “+ + +”表示精子灵活，活动时能产生涟漪。 B、​ “+ +”表示能看见精子的尾部。 C、​ “+” 表示精子能迟缓来回摆动。 D、​ “+ ”表示能动弹，但不能游动，就是原地打转。 E、​  “ ”表示精子已僵死。 备注：滴精液时要滴在圆鼓上，检查时看精子周围的情况，一般情况下边缘有三层涟漪，密度中等，那么活力就是70+ + + ，如果是4-5层，活力就是75+ + + ，如果是5层以上，活力就是80-85+ + + ，正常可用的精子不得少于两层涟漪。 5.​ 检查精子的畸形率：一般用400倍的显微镜来观察。畸开率不能超过20% 。 ⑴将稀释好的精液取1ml放入试管中，再用吸管吸取10%福尔马林1ml 放入试管中混合均匀。 ⑵从试管瓶中取1滴瓶中的精液滴在盖玻片上翻扣在载玻片上。 ⑶将做好的载玻片放置于载物台上卡住，先用100倍镜头确精子的所在位置，再放大400倍按照从左到右、从上到下数333 条精子同时异常精子。（精子的异常情况可分为：头冒 A、头部H、颈部N、中部M、尾部T、未成熟TM）从333条精子中看出各种异常的数目，每一条代表0.3(例如：“A”2条就是0.6) 四、精液的稀释与保存 (1)​ 盐水的配制：配种采精时所需要的盐水浓度为0．7% (2)​ 稀释精液 A：将准备装精子的精液瓶用稀释液刷一下然后把稀释液倒干净。精液瓶上放好纱布，将检查好的精液沿瓶壁缓缓倒入瓶中。 B：量取稀释液温度。先将温度记用冷水冲洗干净，再用稀释液冲洗。然后把冲洗好的温度计插入稀释液中量取加热后的温度。使稀释液的温度与精液的温度一致。 C：加入稀释液时要缓慢，沿瓶壁加入同时转动精液瓶，使精液与稀释液混合均匀。 D：根据精子的密度与活力情况稀释。一般呈1：1稀释，对精子稀的不宜加太多的稀释液。否则会影响受胎及产仔效果。例如：原浆精液是300ml，活力是70+ + + ，可加稀释液600ml，如果活力是75+ + + ，可加稀释液700-800ml；如果活力是80+ + + ，可加稀释液900-1000 ml。 E：把稀释好的精液放到磁力搅拌器上搅拌均匀，接种环在酒精灯上消毒冷却后,取一滴精液滴在盖玻片上翻扣放在显微镜下用100倍的镜头观察精子活力情况。再用400倍的显微镜观察精子尾部摆动情况。 F：保存：把稀释好的精液放入和水温相等的容器中，水的温度不能高于精液的温度，并且水位要刚刚盖过精液面。因为水 是良好的缓释介质，不会使精液温度变化过大。温度在15-18℃保存不能超过3天。 五、精液的运输 分装好的精液从恒温箱中取出后，要迅速放入保温箱内并盖好保温箱的盖子，在运输途中尽量避免阳光直射和强烈震动 。