风疹IgG抗体ELISA检测方法的建立和应用

中国生育学杂志 年第 期总第 期 出现率为 , 革兰氏阳性细菌为 , 革兰 氏 阴性菌及动弯杆菌为 。 说明包茎包皮过长患 者的细菌学感染是不容忽视的 。 由于长期包茎的影响 , 部分患者龟头呈尖长型 , 勃起功能受限 , 性敏感度降低 , 性刺激后疼痛的负反 馈作用及泌尿生殖系的慢性炎症刺激等致使部分患 者出现性功能障碍 , 夫妻生活不合谐 。 综上所述 , 包茎 、包皮过长影响男性生殖健康 , 有 必要采取干预 。 参考文献 韩振藩 , 师其智主编 男性生殖系外科 北京 人 民卫生 出版社 , , 叶顺章 , 张木有主编 现代性传播疾病实验室诊断技术 广州 广东 科技出版社 , , 张莉敏 , 张国昌 , 吕风文 , 等 念珠菌性龟头包皮炎 例 中华皮肤 科杂志 , ,四 徐晨 , 徐胜 , 王一飞 , 等 解脉支原体引起男性不育的机理研究 男 性学杂志 , , 风疹 抗体 检测方法的建立和应用 侯林蒲 江英涛 牛向兰 谷学英 高 英 刘志强 马 旭 摘 要 目的 建立血清风疹 抗体 一 酶联免疫测定 方法 , 初步探讨其应用价值 。 方法 采用 一 株感染 细胞制备风疹病毒 抗原 , 并经浓缩和纯化后 , 建立定量间接 方法 。 应用该方法对深圳 市宝安区 一 岁 例育龄妇女血清进行 一 检测 , 与 认证的意大利 公司生产的 一 方法检测试剂盒进行比较 。 结果 两种方法相关系数为 , 尸 , 呈显著相关 敏感性 、特异性和准确性 分别为 、 、 批间 、批内变异系数分别为 一 , 一 , 基本符合 方法的 一 巧 。 结论 该 方法敏感性高 、特异性强 , 且简便 、快速 , 重复 性好 , 具有实际应用价值 。 关键词 风疹 血清抗体 酶联免疫吸附测定 一 叩 , , 灭云口 , , 九 加 , , 叮 沮 而 叮 罗 一 勿 场 衡 即 场 二 , , , 击 以 , 科 , 碘 , 盯 伍 一 , 盯 · 一 · · 盯 , , , , 由 街 一 先天性风疹综合征是较为严重的出生缺陷 , 严重 影响出生人 口素质 。 对育龄妇女进行风疹抗体筛查 , 确定无保护力人群 , 并实施风疹疫苗接种可有效预 收稿 作者 日期 一 一 侯林蒲 国家计划生育委员会科学技术研究所 托 江英涛 国家计划生育委员会科学技术研究所 牛向兰 深圳市计划生育科学研究所 谷学英 深圳市计划生育科学研究所 高 英 国家计划生育委员会科学技术研究所 马 旭 吗家计划生育委员会科学技术研究所 防先天性风疹综合征 滋 , 。 因此 , 建立一种检测结果准确 、方法简便 、经 济实用的检测方法是非常必要的 。 目前国外部分已 通过美国食品与药品监督局 认证的试剂盒 , 虽然检测效果好 , 但价格 昂贵 , 难 以用于群体筛查 。 国内大部分实验室仍采用定性检测方法 , 本文首次在 国内建立以 为临界值的 一 抗体检测 方法 , 同时与相应 认证产品进行比较 , 初步探讨 国计划生育学杂志 年第 期兰丛第 旦旦期 其应用价值 。 材料和方法 一 、材料 标本来源 例血清标本来源于深圳市宝 安区 一 岁育龄妇女 。 主要试剂 ①样 品稀释液 、 洗涤液 , , · , , 一 , 叠氮钠 , 加 蒸馏水至 而 。 ②包被液 的 碳酸 盐缓 冲液 , , , 加 水 至 。 ③底物显色液 选用较敏感的四甲基联苯胺 和过氧化氢 作底物系统 。 ④终止液 溶液 。 ⑤酶标记抗体 过氧化物酶标记兔 抗人 抗体购 自丹麦 。 公司 。 ⑥对照试剂盒 意大利 丽 公司 一 检测试剂盒 。 ⑦ 一 值 用意大利 公司生产的风疹 试 剂盒进行血清测定 。 将风疹 抗体含量为 巧 时 的数份血清混合 , 标定仍为 巧 时 , 即以此血 清样品做为试剂盒的 一 值 。 将血清 稀释 后分装 , 每瓶 闪 , 冷冻干燥 , 一 ℃保存 。 用 时每 瓶加 标本稀释液 , 即相当于 稀释 。 ⑧阴性 对照 用上述试剂盒所测得的阴性血清用含 小 牛血清的 作 稀释制成应用液 , 以 林 瓶分装 , ℃保存 。 主 要仪器 培 养箱 、 超速离心机 、美国 一 分光 光度计 、 酶标仪 、 洗板机 、 冻干机等 。 二 、方法 抗原制备 一 株接种 细胞 , 收获 后基本按提取血凝素方法浓缩和纯化蛋白 , 测定其含 量 , 经滴定选出最佳包被浓度 。 用意大利 公司 生产的风疹 试剂盒中提供的阳性血清与阴性血 清鉴定 , 抗原免疫原性良好 。 抗原包被板的制作 选择 板 孔 做为包被板 。 将抗原用包被缓冲液稀释至 梦血 , 以每孔 闪加人反应包被板 , 室温 后 ℃过夜 。 次 日甩掉孔 内液体 , 加人封闭液 , 每孔 闪 , 室温 后 ℃过夜 。 甩掉孔内液体 , 用 洗一次 , 室温干燥 , 真空包装 , 封 口处印上封板 日期 , ℃保存 。 测定方法 将待测血清用样品稀释液作 稀释 , 然后每孔以 闪加人包被板孔内 , 阴 、 阳性对 照也以 闪加人包被板孔 内 , 封条覆盖 , ℃孵育 。 洗板机洗板 次 , 拍干 , 加人酶标记物 , ℃孵育 。 洗板 次 , 拍干 , 加人底物显色液 闪 , 室温显 色 , 加人终止液 林 , 酶标仪 上测出 值 。 结果判断 待测标本与 一 值的比值 判为阳性 , 判为阴性 , 在 一 之间判 为可疑 , 须重复一次 , 若 判为阴性 , 判为阳性 。 三 、统计学处理 采用 检验 。 结 果 一 、风疹 标准工作曲线 取含风疹 为 的混合血清 , 做 点 倍比稀释 , 测定 值 。 将浓度取对数后与其相应的 值计算相关性 丫 , 显示二者呈 良好的线 性关系 。 二 、灵敏度 与 测定 值有显著区别的最终浓度为 其灵敏度 。 从表 计算出当浓度为 耐 时 , 其 值为 , 显著区别于 时 值 的 倍 。 见表 。 表 方法敏感度试验 浓 度 值 ⋯ 值 二 东夕 · 几 柳 昼 鱼 竺丝马旦 旦 三 、精密性 任选不同浓度的 份标本 , 每份标本重复测定 次 每次测定 , 每份标本同时 孔 , 取均值做为一 个实验数据 , 风疹 批 内变异 系数 , 批间变异系数 一 。 见表 。 表 方法精确性试验 标本 批内 批间分析土 士 土 士 士 士 土 八‘, 四 、稳定性 将试剂盒置于 ℃孵育 相当于 ℃下贮存 半年 , 与置于 ℃的试剂盒同时用 巧 份阳性标本与 巧 份阴性标本进行检测 , 以其与 一 值的比值 进行比较 , 结果显示稳定性好 。 见表 。 五 、对比试验 本方法与意大利 公司 一 检测试 剂盒的比较 。 两种方法相关性研究 随机抽取 例血清样 品 , 分别用本研究建立的方法和 公司风疹 检测试剂盒测定抗体含量 。 两者测定结果比较 , ’ 。 ‘ · 中国计划生育学杂志 年第 期总第 期 呈显著相关性 , 。 表 方法稳定性试验 ℃弋价 阳性 标本 住 业 些 燮绷 代 性本阴标 表 两种方法相关性比较 耐 例数 本研究建立方法 士 试剂盒 士 对 例任选标本用两种试剂盒检测 比较阴 性与阳性结果 , 如表 所示 。 表 与 试剂盒检测结果比较 例 认证方法 合计产西 工下 本方法合计 士 土 合计 由表 可见 , 评价实验室检测方法的 项主要指 标 敏感性 真阳性 真阳性 假阴性 特异性 二 真阴性 真阴性 假阳性 准确性 真阳性 真阴性 所有被检样品数 讨 论 几乎所有的免疫血清学检测方法均可用于检测 一 抗体 , 如血凝抑制法 、单扩溶血法等常用 , 但 血凝抑制法因血清中有非特异抑制物及凝集物 , 必须 对待测标本作预处理 , 试验费时费力 , 而单扩溶血法 虽不用对标本作预处理 , 但要扩散 , 不能及时报 告结果 〔’〕。 具有敏感性高 、特异性强 , 以及简 便 、经济等优点 〔’ , 适于大量人群普查之用 , 故本研 究选择建立 一 抗体 检测方法 。 有关使 用 方法检测风疹病毒抗体的 , 近年国内也有 报道 , 但仅仅是以阳 阴 比值判断阳性或阴性氏 , 尚 无以国际单位为标准的定量 一 检测方法 , 更 无应以多少 一 含量为有保护的水平的 。 本研究引用了英国等国家提出的以 巧 为临界 值标准 , 不仅可以筛出无风疹病毒保护力人群 , 而且 可以检出虽然已经感染过风疹病毒 , 但因体内抗体含 量偏低而不足以保护不再感染的人群 , 这对实施风疹 疫苗接种 , 预防先天性风疹综合征有着重要意义 。 本文通过对抗原制备 、抗原包被浓度 、包被条件 、 酶结合物稳定条件 、底物稳定条件以及 一 。 值和 方法的质控等方面的细致研究 , 条件优化组合建立了 一 检测方法 。 该方法与 认证的 公司生产的检查试剂盒 比较 , 其相关系数 , 尸 , 显示两种方法呈 良好的线形关系 。 其敏感度可达 耐 , 敏感性 、特异性和准确性分别 为 、 、 。 批间 、 批 内变异系数分别为 , 一 , 基本符合 方法的 标准 一 巧 , 充分说明该检测系统具有 良好 的重复性 。 抗原包被后的稳定性分析 , 证实该系统具 有 良好的稳定性 , 按 国家药品监督局标准 , ℃ 相当于 ℃存放 天计算 , 至少可以在 ℃条件下存 放半年 。 目前进 口产品价格昂贵 , 限制了其在人群的推广 使用 , 国内尚无药品监督管理局认证的 一 抗 体检测定量试剂盒 。 本文建立的 方法 , 各项 技术指标 包括灵敏性 、准确性 、特异性和稳定性等 均已接近国际同类产品的质控标准 , 可适用于广大人 群风疹抗体的筛查 。 参考文献 纳塔莉 , 施蜜特 , 理查德 , 主编 顾方舟等译 病毒 、立克次 体及衣原体疾病诊断技术 北京 北京医科大学中国协和医科大 学联合出版社 , , 一 研 周铁群 , 李德富 风疹病毒及其感染的诊断研究进展 微生物免疫 学进展 , , 一 梁绍伶 , 陈基纯 , 陈杰 血清风疹抗体 艳 、坛 检测在风疹诊断上 的应用 广西预防医学 , , 一 卢关平 , 梅婉媚 , 谭舜琴 江门市区女性人口 风疹抗体水平调查 广 东卫生防疫 , , 上接 页 对象 , 耕地面积减少 , 将给农业增产带来困难 。 从现 在起 , 我们必须相应严格控制人 口 的增长速度 , 增强 稳定耕地面积的意识 。 必须加强对全民进行爱护耕 地的宣传教育工作 , 完善各级土地管理机构 , 依法管 理土地 , 严禁多种滥占耕地的现象 , 不论公家或私人 建设都应不占用耕地 。 同时 , 应摸清基建征用耕地的 使用情况 , 未用或 目前暂时没有建设的 , 应清退还耕 。 此外 , 还应大力推广科学种田 , 推广优 良品种 , 提高单 位面积产量 , 使在有限的耕地生产出更多的粮食 , 以 满足人们的物质生活需要 。