null试验十一、抗心肌缺血药物作用研究 试验十一、抗心肌缺血药物作用研究 一、目的
一、目的
了解抗心肌缺血新药的评价原则。
学习心肌缺血动物模型建立
及评价指标。
观察受试化合物对心肌缺血大鼠的影响,判断其是否具有抗大鼠心肌失常的作用。 二、与试验相关的理论知识要点
二、与试验相关的理论知识要点
心肌缺血观察指标与方法
心肌缺血,是指心脏的血液灌注减少,导致心脏的供氧减少,心肌能量代谢不正常,不能支持心脏正常工作的一种病理状态。
(1)心电图指标观察:
皮下放置心电图肢体导联电极,测标准Ⅱ导心电图观察药物对S-T段、T波幅度的影响。(2)形态学观察:(2)形态学观察:1.摘取心脏,用生理盐水冲洗,除去血污,剔除血管脂肪等非心肌组织,用吸水纸吸去水分,称全心湿重。
2.沿冠状沟切除右心房和右心室,留下室间隔和左心室,称重。顺房室沟从心尖到心基部平行将狗心室切成1cm厚的心肌片,用生理盐水冲洗干净。
null3.将心肌片放在1%的氯化三苯基四氮唑(TTC,用pH7.4~7.8的0.2mol/L PBS配制)溶液中,在37℃温孵7min染色,染色过程中不时搅拌染色液使之与心肌有充分接触。
4.染色后立即用生理盐水冲洗多余的染料。
梗死区不着色,非梗死区被TTC染为红色。
5.剪去各心肌片被染色的非梗死区心肌,把未染色的梗死心肌称重,除以左心室重即得梗死范围占左心室重的%。
null(3)酶学测定:
测定血液、心肌组织中的肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)等指标反应心肌缺血情况。(4)心脏功能及血流动力学试验(4)心脏功能及血流动力学试验 观测指标应包括冠脉流量,心输出量、左室作功左室内压、左室舒张末期压、左室内压最大变化速率、动脉血压、外周阻力等,进行连续动态观测。
(5)心肌耗氧量试验
(5)心肌耗氧量试验
心肌代谢、特别是氧的供需矛盾,是冠心病的重要病理生理变化,而多数中药常通过降低心肌耗氧量、改善心肌代谢而达到治疗目的。因此,新药对心肌耗氧量的影响,应列为必做项目。
可供选择的试验方法如下
1.直接测定:心肌耗氧量测定,心肌组织氧分压 测定(可多部位、多层次测定),离体心脏、心肌片或心肌细胞耗氧量测定。
2.间接测定:张力时间指数,心肌耗氧指数,正性肌力作用。
3.耐缺氧试验:离体心脏或心肺灌流耐缺氧试验,心肌细胞培养耐缺氧试验及其他。
三、教学试验安排及内容三、教学试验安排及内容
(一)教学分组
在一个教学单元内,根据学生人数,将学生分为8组,每组2~5人,并分成上下两班,4组/班。
(二)试验
全班均采用异丙肾上腺素造模;
上半班采用A受试物,建议受试物为丹参酮ⅡA磺酸钠;
下半班采用B受试物,建议受试物为丹参注射液。四、试验方法及步骤四、试验方法及步骤(一)试验材料
试验药品:
乌拉坦(Urethane),生理盐水配制成20%溶液;
0.5%异丙肾上腺素(Isoprenaline);生理盐水,5%葡萄糖注射液。
阳性药:0.2%维拉帕米。
受试物:丹参酮ⅡA磺酸钠,配制成1%、0.2%溶液;
丹参注射液,50%葡萄糖配制成含生药
1.5g/ml、0.3g%溶液。
试验仪器:
生物机能试验系统、紫外、动物秤、大鼠手术台、眼科镊、1ml、5ml注射器、4#、6#针头。(二)试验方法(二)试验方法
取大鼠,称体重;
腹腔注射乌拉坦1~2g/kg(20%乌拉坦,5~6ml/kg)麻醉;
仰卧位固定于手术台上,针型电极插入大鼠皮下,打开生物机能试验系统,待心电图稳定后开始试验,先
一段正常的大鼠心电图;
分组及给药方案如下:上、下半班:上、下半班:
第1组、第5组:静脉注射生理盐水1ml/kg;
第2组、第6组:静脉注射0.2%维拉帕米1ml/kg;
第3组:静脉注射0.2%丹参酮ⅡA磺酸钠;
第7组:静脉注射0.3g/ml丹参注射液1ml/kg,
第4组:静脉注射1%丹参酮ⅡA磺酸钠;
第8组:静脉注射1.5g/ml丹参注射液1ml/kg,
5min后,静脉快速注射0.5%异丙肾上腺素溶液1ml/kg, 记录大鼠心电图。null注射异丙肾上腺素后,以心电图出现S-T段改变或T波变化为缺血标志。
每次给完一种药后,观察并记录正常、给Iso前和给Iso后1min、3min、5min、10min、15min、20min、30min和60min的T波和S-T段偏移。
将试验结果记录与#表格#中。(三)试验结果的原始记录 (三)试验结果的原始记录 表1 受试化合物对大鼠T波幅度的影响表2 受试化合物对大鼠S-T波幅度的影响表2 受试化合物对大鼠S-T波幅度的影响表3 受试化合物对大鼠心率的影响 表3 受试化合物对大鼠心率的影响 (四)结果分析与讨论
(四)结果分析与讨论
综合8个组的试验结果,判断受试物是否具有抗心肌缺血的作用 ;
分析中药单体与复方中药在抗心肌缺血中的特点。
(五)试验
内容及
要求
试验报告内容及格式同前,试验题目由学生自定。注意事项注意事项
动物个体较小,固定大鼠时尤其两前肢不宜过紧,以免影响呼吸;
心电图机的针型电极应向心插入皮下,不可插入肌肉内,以免肌电干扰,另外动物周围不要放置金属制品,以免干扰 。附:大鼠急性心肌缺血模型 附:大鼠急性心肌缺血模型 (1)将动物注射20%乌拉坦(0.5~0.6ml/100g)麻醉后
固定在手术台上
(2)用笔型静脉置留针进行气管插管(或切开气管插管),连接动物呼吸机,参数为:呼吸频率85;呼吸比1:1;潮气量为18ml。
null剪开气管插管 笔型静脉置留针气管插管 null(3)在胸部左侧3-4肋间剪开皮肤 (4)分离肌肉露出肋骨 (4)分离肌肉露出肋骨 (5)在第三根肋骨下用止血钳将肌肉分离开,然后左手用止血钳挑住肋骨,右手持剪刀剪开第三根肋骨 (5)在第三根肋骨下用止血钳将肌肉分离开,然后左手用止血钳挑住肋骨,右手持剪刀剪开第三根肋骨 (6)用止血钳将剪断的肋骨夹住掰开,放入开睑器,用止血钳剥离心包膜 (6)用止血钳将剪断的肋骨夹住掰开,放入开睑器,用止血钳剥离心包膜 (7)在左心耳与肺动脉圆锥间穿6-0号线,拉紧丝线,形成心肌缺血,观察线扎紧的部位上下大约2mm范围的心肌发白。(7)在左心耳与肺动脉圆锥间穿6-0号线,拉紧丝线,形成心肌缺血,观察线扎紧的部位上下大约2mm范围的心肌发白。(8)结扎术后取下心脏进行TTC染色 (8)结扎术后取下心脏进行TTC染色 null