血液样品采集方法的改进.樊福好

2010 年第 4 期投稿信箱：pigstoday@vip.163.com 17 PIGS TODAY 图 1 新方法采集血液样品的步骤 取保护液 开始采取血液 采集血液部位 1 ∶ 1 比例采取血液 血液样品采集方法的改进 ⊙ 樊福好 农业部种猪质量监督检验测试中心（广州） 广东广州 510500 猪场保健 采集血液进行抗体分析是现代医 学和现代兽医学的重要研究内容，抗体 分析可以用来疫苗的免疫效果以及 评价机体的免疫学反应。 在医学实践中，通常采用使血液凝 固分离血清的方法进行抗体检测。但由 于血液的易变性，分离血清对技术要求 较高，尤其对于地处偏远地区的农村和 农场更是如此。若样品经过长途运输， 血清容易被污染，容易腐败，未进行分 离的血液还容易发生溶血和脂血现象， 严重影响抗体检测结果的准确性。 为了探讨更加科学合理的血液样 品采集方法，拟提出对血液样品的采集 方法进行变革。本实验即探讨新方法的 合理性和科学性。 一、实验设计 第一组：新方法采血（见图 1）。 预先在注射器内加样品保护液，采集等 体积血液，混合，自然沉淀或离心沉淀， 取上清。采集猪血样 20份。样品保护 液为本实验室配制。 第二组：旧方法采血。采血后，使 血液自然凝固，离心后取血清。采集猪 血样 28份。 第三组：重复旧方法采血。采集猪 血样 17份。 每个样品均分 2份测试猪繁殖与 呼吸综合征（PRRS） 抗体。 抗体检测参照美 国 IDEXX 公司试剂 盒说明书进行，新方 法采集的样品稀释倍 数 20倍，旧方法采 集的样品稀释倍数依 然为 40倍。 二、实验结 果 见表 1~3，表中数值为 PRRS抗 体的 S/P值，每份样品重复 2次。 三、统计分析 第一组：相关系数 =99.8%，T检 验 P=0.0000041，差值差 =0.05， 最大差值 =0.18。 第二组：相关系数 =97.9%，T检 验 P=0.056668，差值标准差 =0.1，最 大差值 =0.25。 第三组：相关系数 =98.7%，T检 验 P=0.01675，差值标准差 =0.09，最 大差值 =0.32。 四、实验结论 采用新方法获得的血液由于进行 了生物学而非化学方法防腐，样品保 存的时间更长，加之不再采用肝素、 EDTA盐和柠檬酸盐抗凝，将影响抗体 检测结果的因素尽量减少到较低状态。 新方法采用专有技术去除了血液 表 1 第一组测试结果 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 S/P值 0.45 1.46 0.10 0.02 1.20 0.03 0.96 2.02 1.22 1.14 S/P值 0.40 1.34 0.08 0.00 1.13 0.029 0.95 1.96 1.14 1.03 编号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 S/P值 0.66 0.95 0.73 1.45 1.26 1.45 1.71 1.22 1.55 2.04 S/P值 0.57 0.91 0.70 1.41 1.20 1.40 1.59 1.13 1.41 1.87 2010 年第 4 期 网址：www.pigstoday.com18 PIGS TODAY 猪场保健 中的有色物质和抑制 ELISA反应的物 质，结果更准确。 从实验结果可见，第一组数据中 1 PCVAD：高水平管理和营养依然重要 ⊙ Michelle Sprent 英国北约克郡道尔顿市SCA营养科技公司 施飞 译 四川农业大学动物医学院药学系 四川雅安 625014 PCVAD（圆环病毒相关疾病）最 初被称为 PMWS（断奶仔猪多系统衰 竭综合征），但后来证实，PMWS只是 PCVAD的一种，此外还有 PDNS（猪 皮炎肾病综合征）、PRDC（猪呼吸道 疾病综合征）等。 PCVAD最早于 1991在加拿大出 现，然后逐渐传遍世界，1998年到 1999年间席卷了英国，现已经困扰全 球养猪业近 20年了。 虽然现在有了针对 PCVAD的疫 苗，但我们依然不能忽略高水平管理和 营养的重要性。众所周知，完善的管理 可以非常成功地使 PCVAD得到控制， 而最近的研究又表明基础营养在其中亦 起着非常重要的作用。 管理的重要性 BPEX（英国生猪管理委员会）的 回顾证实该病所引起的断奶仔猪和生长 猪死亡率在 2003年达到高峰，而商品 化的疫苗于 2006年才开始被应用，但 2003年到 2006年之间，英国猪场的 PCVAD就开始得到控制，之所以取得 如此成效，BPEX认为这主要归功于当 时采用的管理技术。 不仅英国，其他国家也证实了完 善的管理可以使死亡率得到控制。马代 克 ·弗朗克斯博士和他的团队拟定了一 个有助于控制 PCVAD的核心，通 过法国及其周边国家实施以后证明，这 是不接种疫苗时控制 PCVAD的最佳措 施。弗朗克斯博士提出的方案主要内容 如下： 1.产房：空栏，清洁，批次消毒（严 格的全进全出）；母猪产仔前清洗，驱 所得血液样品的优良特性；第二组数据 和第三组数据中，1次检测与 2次检测 的数值大小分布无规律性，一致性较差。 除此之外，采用新方法尚具有以下 优点： 1.采用新方法采集血液可以获得 更多的液体部分，避免了旧方法分离血 清量的不确定性。 2.采用新方法采集的血液，尚可 以进行机体的健康评价。 3.采用新方法采集的血液，尚可 以进行病原学和抗原的检测。 所以，用新方法采集血液样品进行 相关实验室检测是一种更为科学合理的 方法，值得推广。 表 2 第二组测试结果 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 S/P值 1.45 1.49 1.35 0.27 1.83 0.44 1.87 1.62 0.37 1.71 1.94 1.78 1.75 1.75 S/P值 1.69 1.61 1.37 0.26 2.01 0.47 1.73 1.67 0.32 1.69 1.96 1.87 2.00 1.94 编号 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 S/P值 1.36 1.40 2.06 2.05 1.67 1.95 0.97 1.82 1.35 1.36 1.40 2.06 2.05 1.67 S/P值 1.50 1.26 1.92 2.02 1.67 2.01 1.01 1.81 1.53 1.50 1.26 1.92 2.02 1.67 表 3 第三组测试结果 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 S/P值 1.30 0.36 0.22 0.05 1.32 1.96 2.03 0.65 S/P值 1.13 0.36 0.22 0.06 1.34 2.03 1.94 0.62 编号 9 10 11 12 13 14 15 16 17 S/P值 0.98 0.61 0.97 1.33 0.67 0.38 0.52 0.18 0.60 S/P值 0.89 0.63 0.82 1.01 0.53 0.34 0.53 0.13 0.51 次检测的数值均略大于 2次检测的数 值，与实验人员加样先后以及样品反应 时间先后有关，进一步说明新方法采集