高效液相色谱法测定清脑降压片中阿魏酸的含量

高效液相色谱法测定清脑降压片中阿魏酸的含量 【摘要】目的：建立清脑降压片的阿魏酸含量测定方法。方法：高效液相色谱法，色谱柱：C18（4.6mm×150mm， 5μm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸（17︰83）；柱温：35℃；检测波长：316nm；流速：1.0ml/min。结果： 方法稳定、重现性好、回收率高、准确可靠。结论：本方法可以作为清脑降压片含量测定的方法。 【本论文关键词】 阿魏酸 清脑降压片 高效液相色谱法 含量测定 清脑降压片收载于《中国药典》2005年版一部，是由黄芩、夏枯草、槐米、当归、丹参等13位中药组 成的中药复方制剂[1]。临床用于肝阳上亢所致的眩晕，症见头晕、头痛、项强、血压偏高。在标准中并未 制定含量测定方法，阿魏酸是当归药材中的有效成分之一，本文参照《中国药典》2005年版一部当归药材 项下的含量测定方法以及有关当归含量测定方法的文献[2～3]，通过高效液相色谱法测定样品中阿魏酸的 含量，希望以此控制终产品的质量。 1 仪器与试剂 仪器：岛津-10AtvP，浙江大学 N2000色谱工作站，色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，Diamonsil （钻石）-C18（200mm×4.6mm，5μm）（迪马公司提供）。试药；阿魏酸对照品，中国药品生物制品检定所 提供。乙腈为色谱纯；其他试剂均为纯。 2 色谱条件 色谱柱：C18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸（17︰83）；柱温：35℃；检测波长： 316nm；流 速 ：1.0ml/min。样品中阿魏酸峰与其他峰分离度大于1.5；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。 3 实验条件的选择 3.1 提取溶剂的选择 以不同浓度的乙醇、甲醇为溶剂，采用加热回流的提取方法，测定同批样品，结果采用70%甲醇为溶剂 ， 提取较安全。 3.2 提取方法及时间的选择 以70%甲醇为溶剂，分别加热回流15、30、60、120min，测定同批样品，结果采用加热回流30min 为宜 ， 提取较完全。 4 线性关系的考察 精密量取阿魏酸对照品溶液（10.15mg/50ml）1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置50ml 棕 色量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl注入液相色谱仪中，记录峰面积积分值。其进样 量（μg）与峰面积关系见表1。表1 阿魏酸对照品进样量与峰面积的关系 （略） 以阿魏酸对照品的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为： Y=2566022.47X－4009，r=0.99996。结果表明，阿魏酸在0.041～0.203μg 范围内线性关系良好。 5 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10μl，分别于配制后0、2、4、8、12h 依法测定，计算峰面积积分值，结果 见表2。平均值为243487.6，RSD=0.66%，表明供试品溶液在12h内基本稳定。表2稳定性试验（略） 6 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，进样10μl，重复进样5次，计算峰面积积分值，结果见表3。平均积分值为 243425.8，RSD=0.29%，表明精密度良好。表3 精密度试验结果（略） 7 重复性试验 取同一批样品5份进行测定，计算含量测定结果，结果见表4，平均值为0.05978，RSD=0.74%，表明重 现性良好。表4 重现性试验结果（略） 8 回收率试验 采用加样回收法，精密称取已知含量的同一批号的样品（0.1983mg/g）0.6g，精密加入70%甲醇20ml， 再分别精密加入阿魏酸对照品溶液（0.0203mg/ml）5ml，按供试品溶液制备方法制备及上述色谱条件测定， 结果见表5。表5 回收率试验结果（略） 9 样品测定 9.1 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品10mg，置50ml 棕色量瓶中，加70%甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量 取3ml，置50ml 棕色量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含阿魏酸12μg）。 9.2 供试品溶液的制备 取清脑降压片20片，除去包衣，精密称量，计算平均片重，研细，精密称取1.2g，置具塞锥形瓶中， 精密加入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量 ， 摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。 9.3 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，样品含量测定结果见表 6。表6 含量测定结果（略） 10 讨论 清脑降压片原标准中没有含量测定项，本研究制订的阿魏酸的含量测定方法简便易行、重现性好，为 清脑降压片质量标准的提高提供了可靠的依据，具有一定的参考价值。 【参考文献】 [1] 中华人民共和国药典，一部[S]．2005． [2] 傅欣彤，刘 颖，张小茜．当归质量标准的研究[J]．中国中医药信息杂志，2003，10（8）：43～44． [3] 郑末晶，杨 静，吴桂芝，等．高效液相色谱法测定当归寄生注射液中阿魏酸的含量[J]．中成药， 1999，21（4）： 178．