气相色谱法检测盐酸氟西汀原料中氯仿和正己烷残留量

气相色谱法检测盐酸氟西汀原料中氯仿和正己烷残留量 李沿飞1 , 魏农农2 , 苏 　敏 Ξ3 (1. 重庆市计量质量检测研究院 , 重庆 400020 ; 2. 国家食品药品监督管理局药品审评中心 , 北京 100038 ; 3. 解放军第三军医大学药学院 , 重庆 400038) 摘　要 : 采用气相色谱法检测盐酸氟西汀原料中 CHCl3 和正己烷残留量。色谱 柱 : DB217 (50 %二苯基Π50 %甲基硅氧烷 , 0. 25 mm i. d. ×30 m , 0. 25μm) ; 载 气 : H2 (30 mLΠmin) , AIR (350 mLΠmin) , Make up + Const col (N2 ) : 35 mLΠmin ; 进 样口温度 : 250 ℃; 检测器温度 : 250 ℃; 柱温 : 60 ℃; 不分流模式 ; Split 柱流 速 : 2 mLΠmin ; 进样量 : 1μL。正己烷在 157. 2～393. 0 ng 范围内 , CHCl3 在 5. 88 ～117. 6 ng 范围内 , 峰面积与浓度之间线性性关系良好。检出限 : 信噪比 3∶1 时 , 正己烷LOD : 2. 62 ng ; CHCl3 LOD : 2. 94 ng。定量限 : 信噪比 10∶1 时 , 正己烷LOQ : 2. 62 ng ; CHCl3 LOQ : 5. 88 ng。正己烷、氯仿理论塔板数分别为 171513、206764。本 法可检测盐酸氟西汀原料中有机溶剂残留量 , 为其质量控制提供依据。 关键词 : 气相色谱法 ; 盐酸氟西汀 ; CHCl3 ; 正己烷 ; 溶剂残留 中图分类号 : O65 　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 100020720 (2008) 082045203 　　盐酸氟西汀 (百忧解) 是美国礼莱 ( Eli lilly) 公 司 1988 年研制上市的抗抑郁药[1 ] 。盐酸氟西汀是 中枢神经系统 (CNS) 突触前 52羟色胺再摄取强效 抑制剂 , 其在体内的代谢产物去甲氟西汀具有比 母体化合物更强的活性 , 因此具有较长的生物半 衰期 , 具有高效、安全、副作用小等特点。该药用 于治疗抑郁症不仅疗效确切 , 而且对抗胆碱能和 心血管系统方面的副作用明显减少。自 1988 年上 市以来 , 成为全球处方量最大的抗抑郁药[2 ] 。根据 ICH有机溶剂残留限量相关规定[3 ] , 并参照中国 药典 2005 年版二部附录 Ⅷ P 残留溶剂测定法[4 ] , 我们采用气相色谱法对所合成的盐酸氟西汀原料 中正己烷和 CHCl3 进行残留量检测。 1 　实验部分 1. 1 　仪器与试剂 Agilent 6890N 型气相色谱仪 , 7683 自动进样 器 , FID 检测器 , 数据管理系统 : ChemStation 色谱 工作站 ; 色谱柱 : DB217 (50 %二苯基Π50 %甲基硅 氧烷 , 0. 25 mm i. d. ×30 m , 0. 25μm) ; 盐酸氟西 汀原料药 (由太极集团西南药业合成并提供) 。 1. 2 　色谱系统 载气 : H2 ( 30 mLΠmin) , AIR ( 350 mLΠmin) , Make up + Const col (N2 ) : 35 mLΠmin ; 进样口温度 : 250 ℃; 检测器温度 : 250 ℃; 柱温 : 60 ℃; 不分流 模式 : Split ; 柱流速 : 2 mLΠmin ; 进样量 : 1μL。 1. 3 　样品溶液配制 1. 3. 1 　供试品溶液配制 　取适量正己烷和 CHCl3 , 置 10 mL 容量瓶中 , 分别用环己烷、甲醇、 水和体积分数 10 %甲醇水溶液定容 , 配制成 4 种 供试品溶液。 1. 3. 2 　对照品溶液的配制 　(1) 准确称取正己烷 适量 , 用 1 %甲醇稀释成质量浓度为 0. 060 mgΠmL 对照品溶液。(2) 准确称取 CHCl3 适量 , 用 1 %甲 醇稀释成 0. 012 mgΠmL 的对照品溶液。 2 　结果与讨论 2. 1 　溶剂考察 吸取 4 种供试品溶液各 1μL 注入液相色谱 仪 , 结果环己烷中杂质多 , 影响残留物的测定 ; 采 —54— 第 27 卷第 8 期 2008 年 8 月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室 Chinese Journal of Analysis Laboratory 　　　　　　　　　　　　 Vol. 27. No. 8 200828 Ξ 收稿日期 : 2008205220 ; 修订日期 : 2008207215 作者简介 : 李沿飞 (1956 - ) , 男 , 高级工程师 ; E2mail : sumin @yahoo. cn © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 用甲醇作为溶剂时 , 正己烷峰受到极大影响 ; 水 不能溶解正己烷和 CHCl3 ; 微量的正己烷和 CHCl3 经甲醇定容后 , 用水来稀释到刻度 , 能达到实验 要求。故选择甲醇和水作为溶剂。 2. 2 　色谱柱考察 吸取混合对照品溶液 1μL 注入液相色谱仪 , 分别用 DB217 和 HP25 两种色谱柱分离。结果表明 使用 DB217 , 正己烷和 CHCl3 的峰均能分离完全。 故采用 DB217 色谱柱。 2. 3 　空白试验 将空白样品按有机残留方法测定。结果表明 : 空白出现色谱峰 , 不干扰残留物测定。 2. 4 　线性范围的确定 2. 4. 1 　正己烷线性考察 　准确称取 131 mg (0. 2 mL)正己烷对照品 , 置 50 mL 量瓶中 , 色谱甲醇定 容后作为供试品溶液。分取供试品溶液 016、018、 110、112、115 mL 置 10 mL 容量瓶中 , 超纯水定 容 , 得对照品溶液浓度分别为 011572、012096、 012620、013144、01393 mgΠmL。进样后计算曲 线 , 结果表明 , 正己烷在 011572～013930μg 范围 内 , 正己烷峰面积与浓度之间线性关系良好。 2. 4. 2 　CHCl3 线性考察 　准确称取 29412 mg (012 mL) CHCl3 对照品 , 置 50 mL 容量瓶中 , 甲醇定容 后作为供试品溶液。分取供试品溶液 011 mL 分别 置 100、50、25、10、20 mL 容量瓶中 , 超纯水定容 , 得对照品溶液浓度分别为 0100588、0101176、 0102352、010588、011176 mgΠmL。进样后计算标准 曲线 , 结果表明 , CHCl3 在 0100588～011176μg 范 围内 , CHCl3 峰面积与浓度之间线性关系良好。 2. 5 　精密度实验 2. 5. 1 　正己烷精密度 　准确吸取对照品溶液 1 μL , 重复进样 5 次 , 测定 , 计算峰面积的相对标准 偏差 (表 1) 。 表 1 　正己烷精密度试验 Tab. 1 　Precision of hexane 试验次数 峰面积 平均峰面积 RSDΠ% 1 48. 283 2 48. 865 3 48. 283 48. 5444 0. 61 4 48. 865 5 48. 426 结果表明 , 各峰面积的相对标准偏差为 0161 % , 表明仪器精密度良好。 2. 5. 2 　CHCl3 精密度 　准确吸取对照品溶液 1 μL , 重复进样 5 次 , 测定 , 计算峰面积的相对标准 偏差 (表 2) 。结果表明 , 各峰面积的相对标准偏差 为 1112 %。 表 2 　CHCl3 精密度 Tab. 2 　Precision of chloroform 试验次数 峰面积 平均峰面积 RSDΠ% 1 1. 006 2 1. 235 3 1. 181 1. 1556 11. 2 4 1. 042 5 1. 314 2. 6 　理论塔板数 取正己烷、CHCl3 对照品溶液 , 进样量 1μL。 理论塔板数分别为 171513、206764。正己烷和 CHCl3 GC图见图 1、图 2。 图 1 　正己烷 GC图 Fig. 1 　Gas chromatogram of hexane 图 2 　CHCl3 GC图 Fig. 2 　Gas chromatogram of chloroform 2. 7 　检出限与定量限 2. 7. 1 　检出限 　信噪比 3∶1。正己烷 LOD : 2. 62 —64— 第 27 卷第 8 期 2008 年 8 月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室 Chinese Journal of Analysis Laboratory 　　　　　　　　　　　　 Vol. 27. No. 8 200828 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net ngΠmL ×1μL = 2. 62μg ; CHCl3 LOD : 2. 94μgΠmL ×1 μL = 2. 94 ng。 2. 7. 2 　定量限 　信噪比 10∶1。正己烷 LOQ : 2. 62 μgΠmL ×1μL = 2. 62 ng ; CHCl3 LOQ : 5. 88μgΠmL ×1 μL = 5. 88 ng。 2. 8 　样品测定 准确称取约 1. 0 g 盐酸氟西汀样品于 5 mL 容 量瓶中 , 加入甲醇溶解并定容。各供试溶液 , 每次 进样 1μL , 结果见图 3。 图 3 　盐酸氟西汀检测 GC图 Fig. 3 　Gas chromatogram of fluoxetine hydrochloride sample 　　结果表明 :《中国药典》2005 年版附录 ⅧP 残 留溶剂测定法中规定正己烷和 CHCl3 的限度分别 为 290、50μgΠg , 而三批号盐酸氟西汀样品中正己 烷和 CHCl3 均未见检出。 根据以上研究结果 , 原料药中正己烷和 CHCl3 均未检出。因此 , 在本品的质量标准中未将正己 烷和 CHCl3 列入溶媒残留量检查。气相色谱法简 便、灵敏、可靠 , 能够检查盐酸氟西汀原料中有机 溶剂残留 , 为其质量控制提供依据。 参考文献 [1 ] 　代大顺. 中国药物与临床 , 2005 , 5 (9) : 692 [2 ] 　程文红. 上海精神医学 , 1995 , 新 7 (2) : 117 [3 ] 　李 　眉 , 马玉楠. 中国药师 , 1998 , 1 (3) : 119 [4 ] 　中华人民共和国药典 (二部) , 2005 GC assay of hexane and chloroform residues in fluoxetine hydrochloride LI Yan2fei1 , WEI Nong2nong2 and SU Min 3 3 ( 1. Chongqing Academy of Metrology and Quality Inspection , Chongqing 400020 ; 2. Center of Drug Evaluation of SFDA , Beijing 100038 ; 3. School of Pharmacy , Third Military Medical University of PLA , Chongqing 400038) , Fenxi Shiyanshi , 2008 , 27 (8) : 45～47 Abstract : To detect organic solvent residues (hexane and chloroform) in fluoxetine hydrochloride. Methods detections of chloroform and hexane were performed by gas chromatography ( GC) with DB217 column (0. 25μm ×0. 25 mm ×30 m) and hydrogen as carrier gas at a flow rate of 2 mLΠmin. AIR (350 mLΠmin) . Make up + Const col (N2 ) : 35 mLΠ min. Inlet , detector and column temperatures were 250 , 250 and 60 ℃ respectively. Split mode. Injection volume was 1μL. The detection limits were 2. 62μgΠmL ×1μL = 2. 62 ng and 5. 88μgΠmL ×1μL = 5. 88 ng for hexane and chloroform respectively (SΠN = 3) . There were good linear relationships found at the concentrations of 157. 2～393. 0 ng for hexane and 5. 88～117. 6 ng for chloroform. Theoretical plate numbers were 171513 ( hexane) and 206764 (chloroform) . There were no residual hexane and chloroform detected in fluoxetine hydrochloride by the GC methods mentioned above. Conclusion Gas chromatography ( GC) was simple , convenient , sensitive and feasible for the detec2 tion of residual hexane and chloroform in fluoxetine hydrochloride and applicable for quality control of fluoxetine hydro2 chloride. Keywords : Gas chromatography ( GC) ; Fluoxetine hydrochloride ; Hexane ; Chloroform ; Solvent residue —74— 第 27 卷第 8 期 2008 年 8 月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室 Chinese Journal of Analysis Laboratory 　　　　　　　　　　　　 Vol. 27. No. 8 200828 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net