基因芯片问答

基因芯片操作答疑   1. 问：我该如何保存收到的试剂盒呢？ 答：收到基因芯片试剂盒后，请严格按照产品说明书的要求，置入相应温度的保温设施内。 2. 问：不按照说明书操作可以么？ 答：在具体操作过程中，我们发现有些用户不能严格按照操作说明书进行实验操作，这会导致操作出现问题甚至失败。所以，请严格按照说明书操作。 3. 问：有时候我发现，试剂盒中扩增液试剂量比标称的要少，请问这是怎么回事？ 答：这是因为在运输过程中，由于路途颠簸等原因，造成试剂散于管壁。开盖前请先离心，使试剂全部落入管底，不会影响正常使用。 如果离心后仍然出现试剂量明显少于标称量，请与供应商联系更换。 4. 问：请问，如果扩增液的名称和管号一样，是否可以通用？ 答：在心脑血管基因型检测芯片试剂盒系列中，只要试剂管名称和编号一致，即可通用和互换。但芯片不可通用。另外心脑血管芯片试剂盒与其它芯片试剂盒的试剂不能通用。 5. 问：我辛辛苦苦的做了一个心脑血管全套的基因芯片试剂盒，可是结果中ACE没有信号，这是为什么？我该怎么办？ 答：首先，ACE没有信号，可能是在操作过程中出现了纰漏造成的，比如漏加了样品等。这种情况，最好是用一个新的试剂盒重新操作一遍。如果重新操作后该点仍然没有信号，请与供应商联系。 6. 问：能告诉我如何做到精确的温度控制么？ 答：基因芯片的杂交过程对温度要求很高，因此，希望严格按照说明书的要求控温，也要特别注意室温的控制。如果由于设备原因，无法准确控制温度，请与我们联系，我们可以提供专用的温控设施，校准用户的温度。 7. 问：请问，你们提供的心脑血管芯片试剂盒的准确率有多少？ 答：我们的基因芯片产品基因型检测准确率能够达到95%以上，可以通过测序的方法对准确率进行复核。 8. 问：基因型检测是否存在假阳性和假阴性的问题？如果有，假阳性率和假阴性率是多少？ 答：基因型检测的对象是人的基因，因此，检测一定会有结果，检测结果存在是否准确的问题，不存在假阳性和假阴性的问题。我们提供的阳性对照和阴性对照主要是对产品本身和实验操作过程进行质控的内参照指标，具体为：阳性对照针对试剂本身的质量，阴性对照针对操作过程中是否出现污染。当然，如果由于操作失误而加错试剂，则另当别论。 9. 问：阴性对照的点全都看得很清楚，这样的结果可靠么？ 答：很有可能是操作中引入污染造成。应该仔细检查操作。特别是移液器应该用无菌水冲洗一下移液器管外部并干燥，换用消毒过的Tip头。结果不可用，应重新检测。 10. 问：为什么我们拿到的乙肝YMDD基因突变检测芯片试剂盒中没有阳性对照？ 答：以前，我们提供的乙型肝炎病毒YMDD基因突变检测芯片试剂盒的阳性对照为真实的乙肝DNA阳性样本。为了保证生产、运输过程中的安全，以后的产品中将不再提供阳性对照，请用户使用自有的乙肝DNA阳性样本（不考虑YMDD突变情况）作为阳性对照即可。 11. 问：我发现，以前保存的芯片结果与现在的扫描结果不一致，这是为什么？芯片显色结束后，多长时间之内进行数据扫描比较好？ 答：芯片的显色结果会随着时间的延长而发生变化，而且，其变化并不是线性的，即有些点的信号会变弱，而另外一些的信号反而可能增强，因此，我们要求在芯片显色结束后2个小时之内进行扫描并分析保存结果。 12. 问：为什么同一张芯片，我在2小时内第一次和第二次的扫描结果不一样？ 答：重复扫描时，偶尔可能出现第一次检测结果与第二次检测结果不一致的情况，这主要是因为检测时的杂交洗涤温度偏低，使得个别点的非特异杂交信号非常接近判读域值，重复扫描时由于设备的测量误差导致结果不一样。这种情况下，建议重新进行实验，并调高杂交洗涤温度0.5度，即可得到正确的结果。 13. 问：我发现在芯片分析软件的下方有一张#格#，每当分析结束后会有相应的数值，请问，这些数值的作用是什么？而且，这些数值每次扫描时都不一样，为什么？ 答：在结果检测时，在软件下方有一张数据表格，其中的数据为检测点的测量值，软件是根据这些测量值进行结果判读的。重复检测时，每次检测的数值都会有一点差异，这并不奇怪：任何设备检测时都存在一定的测量误差，该误差为偶然误差，符合正态分布。只要上述误差在10%以内，对最终的检测结果没有影响。 14. 现象：反应完成后芯片上只有标志列信号 可能的原因：①样品DNA 抽提失败 ②扩增反应失败； ③扩增液漏加； 解决： 重新抽提样品DNA 检查扩增反应条件，扩增程序，扩增设备； 若无法解决问题，请询问供货商。 15. 现象：阳性不合格 可能的原因：①扩增失败； ②阳性扩增液漏加 解决办法： 重新扩增阳性。但阳性结果不合格并不影响其他基因信息的判读结果 16. 现象：阴性不合格 可能的原因：扩增时发生污染； 解决办法： 重新扩增阴性样品，注意防止污染。 注意： 阴性结果不合格可能影响其他基因信息的判读结果 17. 现象：个别基因信号出不来 可能的原因：①这些基因扩增失败， ②杂交温度偏高， ③新的基因突变型。 解决办法： 电泳检查扩增产物，若为扩增失败，则重新扩增这些基因，重做； 若有扩增条带，将杂交温度降低0.5ºC，换一张芯片重做； 若还有问题，请询问供货商。 18. 现象：大多数基因型分辨不好 可能的原因：①杂交温度过低； ②洗液1反应时间过短； ③洗液1反应温度过低。 解决办法： 用温度计核对杂交温度，将温度设置为比原杂交温度高0.5ºC， 重做。 严格控制环境温度； 洗液1洗涤时间、洗涤温度严格按说明书进行。 19. 现象：芯片检测图片背景大，不干净 可能原因：①检测盖板上的一层保护膜未揭除，或盖板有划痕或太脏； ②芯片背面沾有脏物； ③反应液从杂交舱中吸除时不够彻底； ④显色液失效。 解决办法：揭除检测盖板上一层保护膜； 清洁检测盖板或更换检测盖板； 用吸水纸擦去芯片背面的污渍； 将每一步反应舱中残留液体吸除干净 显色反应时注意避光进行。 20. 现象：信号重现性不好 可能的原因：①杂交设备温度控制不好；； ②环境条件变化太大。 解决办法： 严格控制杂交温度； 严格控制洗液1速度； 稳定环境温度； 选择全自动芯片专用杂交仪。