人参

美国、亚洲和西伯利亚人参中的微分抗氧化作用和醌还原酶诱导活性 奥利弗·陈 朱迪Ribaya-Mercado 黛安,l·麦凯Croom,爱德华lumberg四须鲃和杰弗里 抗氧化剂研究实验室,吉恩·梅耶USDA人类营养研究中心,塔夫斯大学,711,麻州波士顿至华盛顿,美国02111 Croomia,1509 Smallwood博士,牛津38655女士,美国 摘要 美国、亚洲和西伯利亚人参中的微分抗氧化作用和醌还原酶诱导活性已经有报道用各种植物原料、溶剂、化验过。直接建立比较生物活性,有效提取物从酸化的甲醇中获得(MeOH甲醇)、胃肠道模拟(GI), 己烷自由基的清除和醌还原酶（六角形）诱导活性进行了测试。西伯利亚人参甲醇总酚醛含量最高,含有52.6μmol没食子酸当量/克。GI释放 50%比来自美国和亚洲人参甲醇和六角多酚类多。西伯利亚人参六角酚类有最有效，因为在Hepa1c1c7细胞中诱导了苯醌还原酶的作用。 GI和甲醇的美国和亚洲人参提取物现出比较次氯酸的清除活性，但4.6倍以上西伯利亚人参有效。西伯利亚人参是最有效的ONOO -清道夫。西伯利亚人参甲醇提取物具有最高的抗氧化，还原铁的能力（FRAP）和美国人参地具有最高的氧自由基吸收能力（ORAC）。因此，在人参成分具有抗氧化和醌还原酶诱导活性，取决于剂量，提取方法，自由基种类和植物物种。 关键词：人参，抗氧化，自由基，醌还原酶，提取，苯酚 1。介绍 亚洲人参（(Panax ginseng C.A.Meyer)）的根一直作为传统的中药材，由于具有促进健康、活力、耐力，调节内稳态，恢复化学预防，促进伤口愈合，长寿，以及治疗（圣基茨和胡锦涛，2000）其他的作用而成为一般公认的最常见的补益药组成部分之一，。最近的美国成年人的调查发现，全国受赞誉的和替代医学疗法最常见的形式是天然产品的使用，在用户中，14％在过去的30天的服用人参（巴恩斯，布卢姆和Nahin，2008）。但是，调查没有具体说明的是哪种人参。在美国，“人参”可能是指亚洲人参，西洋参（(Panax quinquefolius L.），或西伯利亚人参[[Eleutherococcus senticosus (Rupr.andMaxim).]（麦吉芬，Kartesz，梁和塔克，2000年）。虽然通用名称是E. sentiosus但现在的名称是Eleuthero，往往出版文献被称为西伯利亚人参。所有3种人参是五加科植物家族的成员，主要用作为（麦吉芬等。，2000）在西方国家的替代性和互补性的药物，尤其是老年人（[加德纳等人。，2007]和[叶等人。，2006]）。各种各样的生物活性及临床治疗方法已经公布了人参，包括降低血脂，免疫刺激，抗发炎，血管扩张，抗应激，化学预防，抗氧化的生物活性。（[布埃特纳等。，2006]，[长谷川等人。，2002]，[金子和中西，2004]和[锦江等。，2000]）。在人参的有效成分不限于此，人参皂甙，多糖，多肽，聚乙炔，维生素，酚类，和酶。（湘，尚高，与张，2008）。 虽然每种人参对健康的促进和疾病预防有不同潜在的作用机制，需要更好地描述其相对的抗氧化活性，作为氧，氮，卤素（“自由基”）活性物质，是导致与年龄有关的慢性疾病的发病机制，包括动脉粥样硬化，癌症，神经退化疾病。事实上，越来越多的证据表明该种不同人参药用功效是通过他们的介导的抗氧化作用（ [达维多夫和克里科里安，2000]和[金等人。，2002]），例如，抑制脂质过氧化和氧化损伤脱氧核糖核酸（[李等人。，1998]，[李等人。，2008]和[海军等。，2007]）。几份报告表示不同种人参能有效清除自由基，诱导抗氧化酶的活性，刺激谷胱甘肽合成（[康等人。，2006]，[锦江等。，2000]，[刘等人。，2003]和[海军等。，2007]）。 西洋参和人参中含有的皂苷一般称为人参皂苷。西洋参已被用作类似人参的滋补品，但两种人参皂各自含有的具体数量不同（云，利，权，及财，1996）。西伯利亚人参已经被作为滋补品生或理调节剂广泛使用以增加耐力，但尚未发现含有人参皂苷（哈茨等。，2004）。 尽管这些人参种重叠治疗适应症，在他们的植物化学型材（Attele，吴和元，1999年）的显着变化表明了他们之间的直接比较值的提取和使用生物活性测试不同的方法。虽然这种努力可能有助于阐明其应用和效能，这已发表的报告类型没有差异。因此，本研究的主要目的是描述在体外对亚洲，美洲，和西伯利亚人参种同样的生物活性提取溶剂系统有三个：[1]酸化甲醇（甲醇），[2] 1胃肠模仿（地理标志），以及[3]己烷（十六进制）。对于每个提取物，生物活性相关的三项措施进行了测试：[1]的能力，淬火自由基反应生成的次氯酸（次氯酸），过氧亚硝基阴离子（ONOO -的），超氧阴离子（），和2,2 -二苯基- 1 -苦味（DPPH）自由基能力; [2]的潜力清除（原产地规则•）羟自由基产生的氧自由基吸收能力（ORAC）电子检测捐赠的潜力，并促进在铁还原抗氧化能力（FRAP还原的铁离子还原为Fe2 +的）测定;和[3]能够诱导小鼠肝细胞在体外培养醌还原酶。我们的目标是帮助生成关于不同种类人参的作用机制的新假说，并告知在体内研究的。 1。实验 2.1。化学制品 小鼠肝癌1c1c7（Hepa1c1c7）细胞（CRL的- 2026™）和Dubelco的改良伊格尔培养基（DMEM培养液），获得由美国典型培养物保藏菌（ATCC）马纳萨斯，弗吉尼亚州，从胎牛血清（洛根，犹他州）胎牛血清（FBS的）;的ONOO - 在0.3米，由开曼岛（安阿伯，MI）的氢氧化钠，2,2'偶氮（2 amidinopropane）盐酸盐（AAPH）由和光化工（里士满，弗吉尼亚州），氢氧化钠，甲醇，从尔科技（匹兹堡盐酸，巴勒斯坦权力机构）。所有其他化学品购自Sigma化工（圣路易斯，密苏里州）。 2.2。人参样本 认证的亚洲，美洲，西伯利亚人参根和粉末状的参考获得Chromadex（加利福尼亚州欧文）。基于宏观，微观和薄层色谱分析的结果，所有的人参产品认证作为符合由Chromadex为正确的物种和植物的一部分，标识标准。收据后，所有参种储存在-20 ° C的黑暗亚洲，美洲，和萨布丽娜人参粉的颜色是棕褐色，奶油，和米色，分别。生物质的Chromadex参考材料亚洲，美洲，和西伯利亚人参批号为30303-055，30676-120，并30688-139分别。 2.3。人参成分的提取 由甲醇和六角提取使用实现了加速溶剂萃取体系戴安200（桑尼维尔，加利福尼亚州），根据陈和布隆伯格（陈及布隆伯格，2008年的方法）。每个人参粉顺序提取90％，60％和30％甲醇水溶液（酸化5％醋酸的3每15分钟，分别周期）在1500 psi和100℃联合提取纯化的整除数干下氮气。六角提取是得到15分9个周期，每个周期。在干残留整除数储存在-20 ° C的 胃肠提取，这可能更多的水提取物的水溶性比甲醇或十六进制的化合物，以及模拟消化酶的影响，进行了由陈和布隆伯格（2008）描述的。简单地说，每人参粉遭到了模拟胃和小肠消化的胃蛋白酶和胰酶使用，胆汁的解决，分别为。作者：胃肠等分提取物是用甲醇等体积混合，以消除蛋白（与自由基清除实验干扰），在10分钟10,000下氮气干燥，克剥离，并储存在-20 ° C的由于二丁基羟基甲苯（BHT）加入防止在胃肠提取，人参成分的任何一个潜在的退化，包括胃肠道BHT的空白，但没有人参粉产生，并作为下述所有检测空白对照。 只要在使用前检测中，甲醇提取物进行了改组，干在60％含5％乙酸甲醇，而干地理标志的提取物在水中重组。干六角提取物溶解于丙酮，因为它完整solubilisation能力。在每个重建使用不干预（数据未显示）测定总酚的有机溶剂。 2.4。总酚 总酚含量每人参提取物充当确定其抗氧化活性和QR诱导的基础。酚类化合物，包括简单的酚类物质和多酚，似乎大大促进了植物药品和食品的生物活性植物，并经常聘请特别是在抗氧化能力（[作为其评价的参考标准，独生子女等。，1999] [唐等人。，2004]和[达瓦洛斯等。，2003]）。总酚含量的测定与福林- Ciocalteu试剂，根据独生子女等方法。 （1999年）。所有结果表示为μmol/ L的没食子酸当量（游戏）为没食子酸已被普遍用作在文学福林-乔卡尔泰乌检测标准聘用。在量化的总酚检测限为47.0μmol/ L的（80.6微克/毫升）。 游戏中甲醇，16进制，和GI提取物在0.1，1，10，和100μmol/ L的所有抗氧化实验选定以反映潜在的细胞中的浓度呈现琳琅满目，血浆及摄食后胃肠道。此外，相应的空白含有人参提取物中的有机溶剂数额目前列入调整的潜在贡献的检测。由于其毒性细胞，100μmol/ L的游戏剂量为不受聘于资历名册诱导法;没有Hepa1c1c7细胞存活率的影响是2％，甲醇，丙酮1％或5％，胃肠道空白观察。 2.5。醌还原酶活性的诱导 在活动中的QR调制Hepa1c1c7细胞在体外已被广泛用来研究植物化学物质的潜在化学预防活动。 Hepa1c1c7细胞进行培养，直到最低基本中等鹰融合α修订补充了10％热灭活，木炭处理胎牛血清，1％的青霉素/链霉素，并有5％在37 ° C的二氧化碳1％升中一纳科孵化器谷氨酰胺汇合后，细胞被镀在2 × 104个细胞的密度/良好，可以来台定居24小时吸入后培养基，细胞治疗与人参提取物中在0.1-10μmol/ L的游戏48小时的QR活性测定采用一NADPH的生成系统，耦合的甲萘醌的氧化还原染料3 - （4,5 -甲基偶氮- 2 -基）-2,5溴化据陈和布隆伯格（2008年二苯基四氮唑） 。在每口井是由二喹啉甲酸（简称BCA）蛋白试剂盒（皮尔斯，罗克福德，IL）的决定了细胞的蛋白质含量。由此产生的蓝色，褐色，测量在570 nm处用FLUOstar越酶标仪（BMG公司莱伯泰科有限公司，奥芬堡，德国）。调整后的蛋白质含量，对结果的QR诱导表达作为阴性对照的百分比。 β- Napthoflavone（的BNF）在1μmol/ L的浓度为受聘为阳性对照，增加了2.4 ± 0.5，与阴性对照（缺席人参提取物倍的QR活动）。 2.6。自由基清除活性 每个人参的抗氧化活性提取物对自由基有关的生理，ONOO -的，决心和次氯酸据陈和布隆伯格（2008）。简单地说，ONOO -的清除活性测定监测从氧化增加dihydrorhodamine 123能力485和530 nm的波长激发发射荧光强度在使用FLUOstar越酶标仪。区域内和跨变异天系数（CV）分别为4.7％和3.6％，分别为。针对次氯酸的清除活性评估通过的亚铁[铁（二）架CN）6次氯酸]在420 nm的岛津UV1601分光光度计使用（京都，日本）的氧化。区域内和跨天的变异系数分别为0.9％和2.9％，分别为。清除活性面临的是一个测量在560 nm的黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶与对硝基四氮唑还原产物光度法测定系统使用分光光度计。区域内和跨天的变异系数分别为1.93％和7.70％，分别为。黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用每个提取是由尿酸生产光度法测定监测。 DPPH自由基清除活性进行了按品牌，威廉姆斯，屈弗利耶和贝尔瑟（1995年）。简单来说，900 100μmol/ L的DPPH自由基微升乙醇混合100每个选定的浓度微升人参提取物，并在520 nm处测定吸光度，孵化后30分钟，在室温温度在黑暗中。区域内和跨天的变异系数分别为1.4％和7.6％，分别为。 清除自由基活性的结果表示为相应的阴性对照无人参提取物（百分比），其IC50（人参浓度必须清除自由基的50％）的提取物μmol/ L的比赛是用样条函数计算。 2.7。总抗氧化活性 “总抗氧化活性的每个人参”进行评估与ORAC和FRAP实验。该ORAC检验按区进行，Hampsch -伍德尔，并在此之前（2001年）。简言之，ORAC检验雇用未满的规模和时间对荧光由于由AAPH中添加抗氧化剂的存在除了自由基氧化产生的原产地规则曲线的地区。该法进行了一个FLUOstar最优酶标仪（BMG公司莱伯泰科有限公司，奥芬堡，德国）利用纳米与485和520 nm的激发发射荧光过滤器。人参提取物的ORAC值计算的基础上建立了基于Trolox的标准曲线在5-50μmol/ L的区域内和跨天的简历分别为3.0％和7.3％，分别为。 FRAP法的措施的能力，作为抗氧化剂在氧化还原相连的三价铁离子-2,4,6三-吡啶基均三嗪比色法反应减少到一个蓝色的亚铁离子在低pH值的复杂的还原剂分光光度计测量在593纳米（陈及布隆伯格，2008）。人参提取物在室温孵育与FRAP分析试剂温度和吸收后一小时记录FRAP还原值计算的基础上建立了基于Trolox的标准曲线在31.25-500μmol/ L的区域内和跨天的变异系数分别为0.7％和4.2％，分别为。 2.8。统计分析 所有的实验都进行一式三份。总酚，次氯酸，结果ONOO -的，FRAP测试，ORAC化验被作为液体提取物（μmol/ L的游戏）和人参提取给定体积的干重（克）的溶剂。由于抗氧化剂的检测进行了提取液中的总酚含量的基础上，结果表现为人参干重代表了抗氧化活性（商μmol/ L的游戏）的总酚含量（μmol/克）。所有的结果报告为手段±标准误。当使用的统计意义，得到一个2方差分析与人参型和溶剂作为独立变量的提取，杜克，克莱默诚实显着性差异（HSD）的试验中总酚，其结果表现的ONOO -，次氯酸，FRAP测试，和Orac化验。对人参的类型，提取统计意义，基于QR活动的集中地进行了评价采用多因素方差分析检验。学生t -检验是用来评估人参的提取物的QR诱导意义相对于阴性对照。 P <0.05被认为具有重要意义。为4统计软件包（SAS Institute公司，凯里，北卡罗来纳州）就业选配是用来执行所有统计分析。 3。结果和讨论 3.1。关于总酚提取的影响 植物性食物的总酚含量通常采用接近其抗氧化成分（[唐等浓度。，2004]和[吴等人。，2004]）。我们发现在人参粉产品的总酚含量为苹果相比报告的，浆果，洋葱，生姜，但10倍小于地面肉桂和丁香（吴等人。，2004）。每个人参总酚含量依赖于它的种类和萃取法性（P <0.0001）（图1A和B）。简单酚和多酚是典型的亲水性，这是毫不奇怪地发现，六角提取物> 4倍，总酚含量低于无论是甲醇或肠胃摘录。虽然正己烷可能不如在茶多酚提取酚和甲醇高效，木酚素（gomisins），三亚麻油酸，聚乙炔和酚酸都在报道的正己烷提取物人参（[平库等。，1992]和[许等基地。，1990]）。虽然有机溶剂，可在植物材料提取生物活性物质的效率，胃肠提取方法可能更好地反映了不同的人参植物干时，作为一个物种的成分消耗体内获取。因此，有趣的是，该地理标志法提取效率是在美国和亚洲人参酚类成分比甲醇大，而甲醇更适合西伯利亚人参有效。这一差异可能是由于在每个人参种酚的溶解度变化呈现不同。 全尺寸图片（32K的） 图。 1。共有美国，亚洲和西伯利亚人参苯酚含量。 （a）数据表示为没食子酸等值提取物（游戏）。 （b）数据表示为人参干重。没有相同的信件方式不同，由杜克的HSD的检验，P 0.05确定。 查看在第 3.2。关于人参品种总酚的影响 总酚含量测试的西洋参粉后甲醇萃取媲美，通过金等人报告。 （2007年）之前，谁蒸80％甲醇提取的根源。使用甲醇和GI，亚洲人参总酚含量> 21％，比西洋参较高，相比之下，康等人。 （2007年）谁发现可比价值为20毫克/克的游戏。总体而言，西伯利亚人参甲醇提取物的总酚提供最高金额。因此，在人参酚类抗氧化剂的浓度取决于品种及提取方法依赖使用。此外，在每个人参种，总酚含量也受影响修炼，生长季节和地理的起源。 3.3。醌还原酶活性的诱导 资历名册，第二阶段酶，起到解毒的途径均与抗氧化防御系统的重要作用。关于人参的QR诱导作用还没有得到很好的研究（李等人。，2008）。我们的结果表明，溶剂萃取，人参种，剂量各有一对的QR诱导性（P <0.0001）（表1）不同程度的影响。胃肠提取物在浓度测试10μmol/ L的影响不显着的QR亚洲和西洋参。然而，胃肠西伯利亚人参提取物，属于比亚洲和美国不同的属种，并促进在10μmol/ L的游戏的QR诱导。甲醇提取物诱导只在10μmol/ L的游戏剂量的QR每人参种。我们的结果具有可比性，以利等人。 （2008）谁发现有2毫克/毫升乙醇提取物西洋参一倍的QR活动。如前所述，六角，是不是一种有效的溶剂萃取酚，所以没想到，他们比甲醇和GI更有力的QR诱导。然而，10μmol/ L的游戏六角提取物对美国和西伯利亚人参导致细胞死亡。最近的一项研究表明，人参皂甙诱导的QR没有在活跃，而聚乙炔是最活跃（李等人。，2009）。由于六角主要提取物，疏水性化合物，如聚乙炔（平仓等。，1992年），它很可能对这些化合物在16进制的QR诱导负责摘录。当然，解释结果在体外实验，体内的行动总是需要诸如的生物有效性，生物有效性的因素和代谢缺席谨慎。 -------------------------------------------------- ------------------------------ 表1。 诱导醌还原酶（资历名册）由美国，亚洲和西伯利亚人参提取物在Hepa 1c1c7细胞活性。 人参浓度（μmol/ L的游戏）坝 0.1 1 10 醌还原酶活性（％控制感应） 美国的 甲醇102 ± 3 105 ± 3 203 ± 7 0.0001 肠胃98 ± 5 109 ± 102 ± 3 0.159 2 六角98 ± 5 180 ± 4 Toxicb 0.0001 亚洲的 甲醇99 ± 4 103 ± 4 183 ± 7 0.0001 肠胃91 ± 3 102 ± 5 106 ± 6 0.188 六角107 ± 4 147 ± 6 189 ± 5 0.0001 西伯利亚 甲醇98 ± 1 101 ± 3 146 ± 2 0.0001 胃肠道105 ± 2 101 ± 2 135 ± 2 0.0001 六角141 ± 3 381 ± 8毒性0.0001 全尺寸表 一个在同一行意味着P值分别为获得多因素方差分析。 B辐射的暴露在美国和西伯利亚人参的选民从六角导致72.9和49.3％的细胞死亡，分别为。 价值是显着的负面控制不同，磷<0.05，使用学生的t检验。 查看在第 3.4。自由基清除活性 而美国，亚洲和西伯利亚人参种，各报以清除自由基，螯合过渡矿物和/或增加脂蛋白抗氧化（[康等人。，2007]，[圣基茨等。，2000]和[麦吉芬等。，2000]），没有抗氧化活性之间的直接比较，这三个植物药已经出版。对于激进的淬火试验，我们选择了3种生理有关，次氯酸，和ONOO -的，以及合成氮，因为它在植物和食品中潜在的抗氧化剂清除DPPH自由基测试广泛的应用。 3.5。 DPPH自由基清除活性 金等人。 （2007）报道，在美国和亚洲人参清除DPPH酚类成分。康有为等人。 （2007）指出，一水提取西洋参粉2倍以上的淬火清除DPPH亚洲人参有力。相反，我们发现，美国和亚洲人参提取物并没有在这个测试有力。甲醇，胃肠道和六角西洋参提取物在100μmol/ L的游戏只清理37.2 ± 0.2％，0.0％和8.9 ± 0.1％的DPPH分别，同样，亚洲人参提取物清理同一只20.4 ± 1.8％ ，25.5 ± 0.2％和7.0 ± 0.6％的DPPH分别。然而，甲醇和六角西伯利亚人参提取物发现有一个更大的40.0 ± 0.2和35.2 ± 0.5μmol/ L的游戏，对DPPH自由基的IC50分别效力。一个无法生成的IC50为胃肠提取物对DPPH自由基西伯利亚人参，因为剂量25μmol/ L的游戏创建不透明，随着吸光度测定的干扰。 3.6。超氧自由基清除活性 类似的活动对DPPH自由基，美洲和亚洲人参提取物不产生由一个黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶反应烈性拾荒者。只有甲醇提取物对亚洲人参显示标有48.3 ± 1.8μmol/ L的游戏淬火50％的活性。西洋参提取物的IC50为100μmol/ L的游戏。相比之下，康等人。 （2007年）报告水提取都在50微克清理/毫升美洲和亚洲人参粉。甲醇的GI和西伯利亚人参提取物具有显着猝灭剂与7.0 ± 0.1和7.9 ± 0.3μmol/ L的游戏，其IC50分别。如在检测尿酸生产没有受到影响时，清除活性观察不是神器从抑制黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶反应引起的。六角提取物中发现干扰试验的所有测试人参种。 3.7。次氯酸的清除活性 甲醇的GI和美洲和亚洲人参提取物能抑制反对用次氯酸的IC50范围1.5-2.5μmol/ L的游戏（图2）。然而，胃肠道和甲醇西伯利亚人参提取物分别为4.6倍效果低于其他两个类似人参提取物物种。人参种类和溶剂萃取都是次氯酸清除活性（P <0.0001）的重要决定因素。亚洲人参是最有力的次氯酸清除剂或液体时，表示为提取物（μmol/ L的游戏）或人参干重（100 ml基本盐）。 -------------------------------------------------- ------------------------------ 全尺寸图像（29,000） 图。 1。次氯酸（次氯酸）清除美洲，亚洲和西伯利亚人参的活动。 （a）数据表示为没食子酸等值提取物（游戏）。 （b）数据表示为人参干重。六角提取物的IC50分别为100μmol/ L的游戏。没有相同的信件方式不同，由杜克的HSD的检验，P 0.05确定。 查看在第 3.8。过氧自由基清除活性 ONOO -的，形成了从一个一氧化氮，并能快速反应，硝化和氧化后，硫醇，脂类，碳水化合物，核酸和氨基酸。康有为等人。 （2007年）报告说，西洋参是一种ONOO -的比亚洲人参更有力的清道夫。我们发现ONOO -的清除活性，同时在人参种关系（P <0.0001）和萃取法（P 0.0003）（图3）。人参提取物西伯利亚分别为100％，强于美国和亚洲的人参淬火ONOO -的，与次氯酸我们的研究结果相反。奇怪的是，我们找到了六角提取物是有效的拾荒者的ONOO，尽管他们的总酚浓度相当低。十六进制提取物对亚洲和西伯利亚人参超过胃肠和甲醇提取物性（P 0.05）强大的。然而，由于相对较低的总酚含量在16进制比GI和甲醇提取物，前者的统计意义消失时，结果为人参干重（抗氧化剂量）表示。为1.0μmol/ L的游戏的六角对ONOO -的是优于甲醇提取物抗氧化和胃肠道的质量。重要的是，这样的排名并不能反映抗氧化剂的数量，一总抗氧化能力指数在一定量的人参。 -------------------------------------------------- ------------------------------ 全尺寸图片（3.3万） 图。 3。过氧亚硝基阴离子（ONOO -的）清除美国，亚洲和西伯利亚人参的活动。 （a）数据表示为没食子酸等值提取物（游戏）。 （b）数据表示为人参干重。没有相同的信件方式不同，由杜克的HSD的检验，P 0.05确定。 查看在第 3.9。总抗氧化活性 在“总抗氧化活性”体外试验已得到广泛应用，以评估潜在的植物抗氧化剂和粮食产品的整体价值。然而，这些检测之间的关系并不总是一致（[陈和布隆伯格，2008]和[欧等人。，2002]），并在我们的研究中，我们没有找到一间由FRAP分析和Orac的结果直接关系化验。从政府ORAC检验结果中的排名顺序是根据物种和人参萃取法（图4C）第依赖。无论溶剂萃取，西伯利亚人参提取物2倍FRAP测试值超过无论是美国或亚洲人参时，结果为总酚含量（调整后的1μmol/ L的游戏）（图4A）条。此外，胃肠提取西洋参具有最高的ORAC值，而甲醇提取西伯利亚人参具有最高FRAP分析的价值。出人意料的是，六角西伯利亚人参提取物显示出高ORAC值，表明烈性正己烷水溶性抗氧化剂对原产地规则•存在。吴等人。 （2004）建议，总抗氧化活性高的比例，总酚含量（如图。4A和丙）表示无论是反映非酚类化合物或检测是特别敏感，酚类重大贡献。因此，1.0μmol/ L的游戏的甲醇提取物西洋参可能比任何亚洲人参含有更多的非酚类抗氧化剂，或具备更强大的酚类抗氧化剂。此外，三方之间的协同相互作用的提取物可在背后的这些措施，总抗氧化活性的多样性一些。当结果为人参干重（抗氧化剂量），胃肠和甲醇提取物对美洲和亚洲人参有可比FRAP分析价值，但他们都是100％，比西伯利亚人参（图4B）条为低。胃肠西洋参甲醇提取物和人参提取物对西伯利亚有最高ORAC和FRAP值，分别对人参干重量。当我们比较数据的甲醇提取物进行测试，吴等植物食品。 （2004年），西洋参具有比苹果，葡萄高ORAC值，胡萝卜，但较低的值比山核桃和核桃;亚洲人参的ORAC值可比为腰果，土豆报道的，和花椰菜。 -------------------------------------------------- ------------------------------ 全尺寸图片（5.8万） 图。 4。共有美国，亚洲和西伯利亚人参的抗氧化活性。 （甲，丙）值表示为没食子酸等值提取物（游戏）。 （乙，D）的值是表示为人参干重。没有相同的信件方式不同，由杜克的HSD的检验，P 0.05确定。 查看在第 4。结论 美国，亚洲和西伯利亚人参根具备淬火自由基和上调的QR广泛的效力。这项活动是对植物物种，提取方法依赖性，剂量，以及清除自由基或抗氧化剂的含量就业。在这三个品种，地理标志物，更生理相关溶剂，已可比对次氯酸和ONOO -的总抗氧化活性和甲醇提取物的抗氧化活性，但对资历名册活动影响不大。虽然他们中酚类化合物少，更多的六角提取物在诱导有效的QR活性比无论是地理标志或甲醇提取物。亚洲人参是最有力的次氯酸清除剂，而西伯利亚人参是最有力的打击ONOO -的。西伯利亚和西洋参种具有最高的FRAP分析和Orac值分别。 鸣谢 参考资料 全文透过CrossRef |查看由在Scopus（8引用Scopus |记录） 全文透过CrossRef |查看由在Scopus（19引用Scopus |记录） 查看的纪录，在Scopus（26引用Scopus |） 全文透过CrossRef |查看由在Scopus（13引用Scopus |记录） 全文透过CrossRef |查看由在Scopus（1引用Scopus |记录） 全文透过CrossRef |查看由在Scopus（29引用Scopus |记录） 查看的纪录，在Scopus（45引用Scopus |） 李S.K. 全文透过CrossRef |查看由在Scopus（2引用Scopus |记录） （2009年）。 全文透过CrossRef |查看由在Scopus（42引用Scopus |记录） 全文透过CrossRef |查看由在Scopus（12引用Scopus |记录） 通讯作者。 -------------------------------------------------- ------------------------------ 食品化学 提供更好的翻译建议 感谢您为 Google 翻译提供翻译建议。 提供更好的翻译建议： 微分抗氧化剂和诱导醌还原酶美国，亚洲和西伯利亚人参活动
国立成功奥利弗切纳，，，朱迪四里瓦亚- Mercadoa，黛安属McKaya，爱德华Croomb和杰弗里乙Blumberga

aAntioxidants研究实验室，让梅耶人类营养研究中心美国农业部老化，塔夫茨大学，711华盛顿街，马萨诸塞州波士顿02111，美国

bCroomia，1509斯莫尔伍德博士，牛津大学，硕士38655，美国

收到2009年2月6日，经修订的2009年6月15日，接受2009年6月17日。在网上提供2009年6月28日。

抽象
抗氧化和醌还原酶（资历名册）诱导美国，亚洲和西伯利亚人参的活动报告了利用各种植物材料，溶剂，和实验。直接建立自己的比较生物活性，提取物的效果得到酸化甲醇（甲醇），1胃肠模仿道（GI），己烷自由基的清除和QR感应（十六进制）进行了测试。西伯利亚人参，具有最高的甲醇总没食子酸当量52.6μmol/克酚含量胃肠道解放50％，比甲醇和六角多酚类来自美国和亚洲人参。西伯利亚人参六角最Hepa1c1c7细胞在诱导有效的QR活动。 GI和甲醇的美国和亚洲人参提取物表现出比较次氯酸的清除活性，但分别为4.6倍以上西伯利亚人参有力。西伯利亚人参是最有效的清道夫ONOO -的。西伯利亚甲醇具有最高的抗氧化还原铁力能力（FRAP）和美国人参地理标志具有最高的氧自由基吸收能力（ORAC）。因此，在人参成分具有抗氧化和QR诱导活动，一经剂量依赖性，提取方法，激进的物种和植物物种。

关键词：人参，抗氧化，自由基;醌还原酶，提取，苯酚

文章概要
1。介绍
1。实验
2.1。化学制品
2.2。人参样本
2.3。人参成分的提取
2.4。总酚
2.5。醌还原酶活性的诱导
2.6。自由基清除活性
2.7。总抗氧化活性
2.8。统计分析
3。结果和讨论
3.1。关于总酚提取的影响
3.2。关于人参品种总酚的影响
3.3。醌还原酶活性的诱导
3.4。自由基清除活性
3.5。 DPPH自由基清除活性
3.6。超氧自由基清除活性
3.7。次氯酸的清除活性
3.8。过氧自由基清除活性
3.9。总抗氧化活性
4。结论
鸣谢
参考资料

1。介绍
亚洲人参（人参加州迈耶）的根一直在传统的中药材，由于采用全亚洲在促进健康，活力，耐力，内稳态，恢复他们的化学预防的好处一般公认的最常见的补药组成部分之一，伤口愈合，长寿，以及（圣基茨和胡锦涛，2000）其他迹象。最近的美国成年人的调查发现，全国免费和替代医学疗法最常见的形式是天然产品的使用，在用户中，14％的使用在过去的30天（巴恩斯，布卢姆和Nahin，2008）人参。但是，调查没有具体说明哪些人参种食用。在美国，“人参”可能是指亚洲人参，西洋参（西洋参），或西伯利亚人参[刺五加（Rupr.和Maxim。）美;植物的SYN。刺五加（Rupr.＆马克西姆。）危害]（麦吉芬，Kartesz，梁和塔克，2000年）。虽然首选的E. sentiosus共同的名字是现在Eleuthero，往往是在被称为西伯利亚人参的出版文献。所有3种人参是五加科植物家族的成员，主要用作适应原（麦吉芬等。，2000）在西方国家的替代性和互补性的药物，尤其是老年人（[加德纳等人。，2007]和[叶等人。，2006]）。各种各样的生物活性及临床治疗方法已经公布了人参，包括降低血脂，免疫刺激，抗发炎，血管扩张，抗应激，化学预防，抗氧化（[布埃特纳等。，2006]，[长谷川等人。，2002]，[金子和中西，2004]和[锦江等。，2000]）。在人参的有效成分包括但不限于，人参皂甙，多糖，多肽，聚乙炔，维生素，酚类，和酵素（湘，尚高，与张，2008）。

虽然每个人参种展品几个不同的行动机制可能与健康促进和疾病预防工作，需要更好地描述其相对的活性氧，氮抗氧化能力，与卤素（“自由基”）活性物种的发病机制作出贡献与年龄有关的慢性疾病，包括动脉粥样硬化，癌症，神经退化疾病。事实上，越来越多的证据表明该种不同人参药用功效是通过他们的中介（[达维多夫和克里科里安，2000]和[金等人。，2002]）抗氧化作用，例如，抑制脂质过氧化和氧化损伤脱氧核糖核酸（[李等人。，1998]，[李等人。，2008]和[海军等。，2007]）。几份报告表示不同种人参在有效清除自由基，诱导抗氧化酶的活性，刺激谷胱甘肽合成（[康等人。，2006]，[锦江等。，2000]，[刘等人。，2003]和[海军等。，2007]）。

美国和亚洲人参皂甙组包含一般称为人参皂甙。西洋参已被用作标志类似人参的滋补亚洲，但两个物种的（云，利，权，及财，1996）人参皂甙各自的具体数量不同。西伯利亚人参已经被广泛使用作为滋补品或adaptogen增加耐力，但尚未发现含有人参皂甙（哈茨等。，2004）。

尽管这些人参种重叠治疗适应症，在他们的植物化学型材（Attele，吴和元，1999年）的显着变化表明了他们之间的直接比较值的提取和使用生物活性测试不同的方法。虽然这种努力可能有助于阐明其应用和效能，这已发表的报告类型没有差异。因此，本研究的主要目的是描述在体外对亚洲，美洲，和西伯利亚人参种同样的生物活性提取溶剂系统有三个：[1]酸化甲醇（甲醇），[2] 1胃肠模仿（地理标志），以及[3]己烷（十六进制）。对于每个提取物，生物活性相关的三项措施进行了测试：[1]的能力，淬火自由基反应生成的次氯酸（次氯酸），过氧亚硝基阴离子（ONOO -的），超氧阴离子（），和2,2 -二苯基- 1 -苦味（DPPH）自由基能力; [2]的潜力清除（原产地规则•）羟自由基产生的氧自由基吸收能力（ORAC）电子检测捐赠的潜力，并促进在铁还原抗氧化能力（FRAP还原的铁离子还原为Fe2 +的）测定;和[3]能够诱导小鼠肝细胞在体外培养醌还原酶。我们的目标是帮助生成关于不同种类人参的作用机制的新假说，并告知在体内研究的设计。

1。实验
2.1。化学制品
小鼠肝癌1c1c7（Hepa1c1c7）细胞（CRL的- 2026™）和Dubelco的改良伊格尔培养基（DMEM培养液），获得由美国典型培养物保藏菌（ATCC）马纳萨斯，弗吉尼亚州，从胎牛血清（洛根，犹他州）胎牛血清（FBS的）;的ONOO - 在0.3米，由开曼岛（安阿伯，MI）的氢氧化钠，2,2'偶氮（2 amidinopropane）盐酸盐（AAPH）由和光化工（里士满，弗吉尼亚州），氢氧化钠，甲醇，从尔科技（匹兹堡盐酸，巴勒斯坦权力机构）。所有其他化学品购自Sigma化工（圣路易斯，密苏里州）。

2.2。人参样本
认证的亚洲，美洲，西伯利亚人参根和粉末状的参考材料获得Chromadex（加利福尼亚州欧文）。基于宏观，微观和薄层色谱分析的结果，所有的人参产品认证作为符合由Chromadex为正确的物种和植物的一部分，标识标准。收据后，所有参种储存在-20 ° C的黑暗亚洲，美洲，和萨布丽娜人参粉的颜色是棕褐色，奶油，和米色，分别。生物质的Chromadex参考材料亚洲，美洲，和西伯利亚人参批号为30303-055，30676-120，并30688-139分别。

2.3。人参成分的提取
由甲醇和六角提取使用实现了加速溶剂萃取体系戴安200（桑尼维尔，加利福尼亚州），根据陈和布隆伯格（陈及布隆伯格，2008年的方法）。每个人参粉顺序提取90％，60％和30％甲醇水溶液（酸化5％醋酸的3每15分钟，分别周期）在1500 psi和100℃联合提取纯化的整除数干下氮气。六角提取是得到15分9个周期，每个周期。在干残留整除数储存在-20 ° C的

胃肠提取，这可能更多的水提取物的水溶性比甲醇或十六进制的化合物，以及模拟消化酶的影响，进行了由陈和布隆伯格（2008）描述的。简单地说，每人参粉遭到了模拟胃和小肠消化的胃蛋白酶和胰酶使用，胆汁的解决方案，分别为。作者：胃肠等分提取物是用甲醇等体积混合，以消除蛋白（与自由基清除实验干扰），在10分钟10,000下氮气干燥，克剥离，并储存在-20 ° C的由于二丁基羟基甲苯（BHT）加入防止在胃肠提取，人参成分的任何一个潜在的退化，包括胃肠道BHT的空白，但没有人参粉产生，并作为下述所有检测空白对照。

只要在使用前检测中，甲醇提取物进行了改组，干在60％含5％乙酸甲醇，而干地理标志的提取物在水中重组。干六角提取物溶解于丙酮，因为它完整solubilisation能力。在每个重建使用不干预（数据未显示）测定总酚的有机溶剂。

2.4。总酚
总酚含量每人参提取物充当确定其抗氧化活性和QR诱导的基础。酚类化合物，包括简单的酚类物质和多酚，似乎大大促进了植物药品和食品的生物活性植物，并经常聘请特别是在抗氧化能力（[作为其评价的参考标准，独生子女等。，1999] [唐等人。，2004]和[达瓦洛斯等。，2003]）。总酚含量的测定与福林- Ciocalteu试剂，根据独生子女等方法。 （1999年）。所有结果表示为μmol/ L的没食子酸当量（游戏）为没食子酸已被普遍用作在文学福林-乔卡尔泰乌检测标准聘用。在量化的总酚检测限为47.0μmol/ L的（80.6微克/毫升）。

游戏中甲醇，16进制，和GI提取物在0.1，1，10，和100μmol/ L的所有抗氧化实验选定以反映潜在的细胞中的浓度呈现琳琅满目，血浆及摄食后胃肠道。此外，相应的空白含有人参提取物中的有机溶剂数额目前列入调整的潜在贡献的检测。由于其毒性细胞，100μmol/ L的游戏剂量为不受聘于资历名册诱导法;没有Hepa1c1c7细胞存活率的影响是2％，甲醇，丙酮1％或5％，胃肠道空白观察。

2.5。醌还原酶活性的诱导
在活动中的QR调制Hepa1c1c7细胞在体外已被广泛用来研究植物化学物质的潜在化学预防活动。 Hepa1c1c7细胞进行培养，直到最低基本中等鹰融合α修订补充了10％热灭活，木炭处理胎牛血清，1％的青霉素/链霉素，并有5％在37 ° C的二氧化碳1％升中一纳科孵化器谷氨酰胺汇合后，细胞被镀在2 × 104个细胞的密度/良好，可以来台定居24小时吸入后培养基，细胞治疗与人参提取物中在0.1-10μmol/ L的游戏48小时的QR活性测定采用一NADPH的生成系统，耦合的甲萘醌的氧化还原染料3 - （4,5 -甲基偶氮- 2 -基）-2,5溴化据陈和布隆伯格（2008年二苯基四氮唑） 。在每口井是由二喹啉甲酸（简称BCA）蛋白试剂盒（皮尔斯，罗克福德，IL）的决定了细胞的蛋白质含量。由此产生的蓝色，褐色，测量在570 nm处用FLUOstar越酶标仪（BMG公司莱伯泰科有限公司，奥芬堡，德国）。调整后的蛋白质含量，对结果的QR诱导表达作为阴性对照的百分比。 β- Napthoflavone（的BNF）在1μmol/ L的浓度为受聘为阳性对照，增加了2.4 ± 0.5，与阴性对照（缺席人参提取物倍的QR活动）。

2.6。自由基清除活性
每个人参的抗氧化活性提取物对自由基有关的生理，ONOO -的，决心和次氯酸据陈和布隆伯格（2008）。简单地说，ONOO -的清除活性测定监测从氧化增加dihydrorhodamine 123能力485和530 nm的波长激发发射荧光强度在使用FLUOstar越酶标仪。区域内和跨变异天系数（CV）分别为4.7％和3.6％，分别为。针对次氯酸的清除活性评估通过的亚铁[铁（二）架CN）6次氯酸]在420 nm的岛津UV1601分光光度计使用（京都，日本）的氧化。区域内和跨天的变异系数分别为0.9％和2.9％，分别为。清除活性面临的是一个测量在560 nm的黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶与对硝基四氮唑还原产物光度法测定系统使用分光光度计。区域内和跨天的变异系数分别为1.93％和7.70％，分别为。黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用每个提取是由尿酸生产光度法测定监测。 DPPH自由基清除活性进行了按品牌，威廉姆斯，屈弗利耶和贝尔瑟（1995年）。简单来说，900 100μmol/ L的DPPH自由基微升乙醇混合100每个选定的浓度微升人参提取物，并在520 nm处测定吸光度，孵化后30分钟，在室温温度在黑暗中。区域内和跨天的变异系数分别为1.4％和7.6％，分别为。

清除自由基活性的结果表示为相应的阴性对照无人参提取物（百分比），其IC50（人参浓度必须清除自由基的50％）的提取物μmol/ L的比赛是用样条函数计算。

2.7。总抗氧化活性
“总抗氧化活性的每个人参”进行评估与ORAC和FRAP实验。该ORAC检验按区进行，Hampsch -伍德尔，并在此之前（2001年）。简言之，ORAC检验雇用未满的规模和时间对荧光由于由AAPH中添加抗氧化剂的存在除了自由基氧化产生的原产地规则曲线的地区。该法进行了一个FLUOstar最优酶标仪（BMG公司莱伯泰科有限公司，奥芬堡，德国）利用纳米与485和520 nm的激发发射荧光过滤器。人参提取物的ORAC值计算的基础上建立了基于Trolox的标准曲线在5-50μmol/ L的区域内和跨天的简历分别为3.0％和7.3％，分别为。

FRAP法的措施的能力，作为抗氧化剂在氧化还原相连的三价铁离子-2,4,6三-吡啶基均三嗪比色法反应减少到一个蓝色的亚铁离子在低pH值的复杂的还原剂分光光度计测量在593纳米（陈及布隆伯格，2008）。人参提取物在室温孵育与FRAP分析试剂温度和吸收后一小时记录FRAP还原值计算的基础上建立了基于Trolox的标准曲线在31.25-500μmol/ L的区域内和跨天的变异系数分别为0.7％和4.2％，分别为。

2.8。统计分析
所有的实验都进行一式三份。总酚，次氯酸，结果ONOO -的，FRAP测试，ORAC化验被作为液体提取物（μmol/ L的游戏）和人参提取给定体积的干重（克）的溶剂。由于抗氧化剂的检测进行了提取液中的总酚含量的基础上，结果表现为人参干重代表了抗氧化活性（商μmol/ L的游戏）的总酚含量（μmol/克）。所有的结果报告为手段±标准误。当使用的统计意义，得到一个2方差分析与人参型和溶剂作为独立变量的提取，杜克，克莱默诚实显着性差异（HSD）的试验中总酚，其结果表现的ONOO -，次氯酸，FRAP测试，和Orac化验。对人参的类型，提取统计意义，基于QR活动的集中地进行了评价采用多因素方差分析检验。学生t -检验是用来评估人参的提取物的QR诱导意义相对于阴性对照。 P <0.05被认为具有重要意义。为4统计软件包（SAS Institute公司，凯里，北卡罗来纳州）就业选配计划是用来执行所有统计分析。

3。结果和讨论
3.1。关于总酚提取的影响
植物性食物的总酚含量通常采用接近其抗氧化成分（[唐等浓度。，2004]和[吴等人。，2004]）。我们发现在人参粉产品的总酚含量为苹果相比报告的，浆果，洋葱，生姜，但10倍小于地面肉桂和丁香（吴等人。，2004）。每个人参总酚含量依赖于它的种类和萃取法性（P <0.0001）（图1A和B）。简单酚和多酚是典型的亲水性，这是毫不奇怪地发现，六角提取物> 4倍，总酚含量低于无论是甲醇或肠胃摘录。虽然正己烷可能不如在茶多酚提取酚和甲醇高效，木酚素（gomisins），三亚麻油酸，聚乙炔和酚酸都在报道的正己烷提取物人参（[平库等。，1992]和[许等基地。，1990]）。虽然有机溶剂，可在植物材料提取生物活性物质的效率，胃肠提取方法可能更好地反映了不同的人参植物干时，作为一个物种的成分消耗体内获取。因此，有趣的是，该地理标志法提取效率是在美国和亚洲人参酚类成分比甲醇大，而甲醇更适合西伯利亚人参有效。这一差异可能是由于在每个人参种酚的溶解度变化呈现不同。



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图。 1。共有美国，亚洲和西伯利亚人参苯酚含量。 （a）数据表示为没食子酸等值提取物（游戏）。 （b）数据表示为人参干重。没有相同的信件方式不同，由杜克的HSD的检验，P 0.05确定。

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3.2。关于人参品种总酚的影响
总酚含量测试的西洋参粉后甲醇萃取媲美，通过金等人报告。 （2007年）之前，谁蒸80％甲醇提取的根源。使用甲醇和GI，亚洲人参总酚含量> 21％，比西洋参较高，相比之下，康等人。 （2007年）谁发现可比价值为20毫克/克的游戏。总体而言，西伯利亚人参甲醇提取物的总酚提供最高金额。因此，在人参酚类抗氧化剂的浓度取决于品种及提取方法依赖使用。此外，在每个人参种，总酚含量也受影响修炼，生长季节和地理的起源。

3.3。醌还原酶活性的诱导
资历名册，第二阶段酶，起到解毒的途径均与抗氧化防御系统的重要作用。关于人参的QR诱导作用还没有得到很好的研究（李等人。，2008）。我们的结果表明，溶剂萃取，人参种，剂量各有一对的QR诱导性（P <0.0001）（表1）不同程度的影响。胃肠提取物在浓度测试10μmol/ L的影响不显着的QR亚洲和西洋参。然而，胃肠西伯利亚人参提取物，属于比亚洲和美国不同的属种，并促进在10μmol/ L的游戏的QR诱导。甲醇提取物诱导只在10μmol/ L的游戏剂量的QR每人参种。我们的结果具有可比性，以利等人。 （2008）谁发现有2毫克/毫升乙醇提取物西洋参一倍的QR活动。如前所述，六角，是不是一种有效的溶剂萃取酚，所以没想到，他们比甲醇和GI更有力的QR诱导。然而，10μmol/ L的游戏六角提取物对美国和西伯利亚人参导致细胞死亡。最近的一项研究表明，人参皂甙诱导的QR没有在活跃，而聚乙炔是最活跃（李等人。，2009）。由于六角主要提取物，疏水性化合物，如聚乙炔（平仓等。，1992年），它很可能对这些化合物在16进制的QR诱导负责摘录。当然，解释结果在体外实验，体内的行动总是需要诸如的生物有效性，生物有效性的因素和代谢缺席谨慎。


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表1。
诱导醌还原酶（资历名册）由美国，亚洲和西伯利亚人参提取物在Hepa 1c1c7细胞活性。

人参浓度（μmol/ L的游戏）坝
0.1 1 10
醌还原酶活性（％控制感应）
美国的
甲醇102 ± 3 105 ± 3 203 ± 7 0.0001
肠胃98 ± 5 109 ± 102 ± 3 0.159 2
六角98 ± 5 180 ± 4 Toxicb 0.0001


亚洲的
甲醇99 ± 4 103 ± 4 183 ± 7 0.0001
肠胃91 ± 3 102 ± 5 106 ± 6 0.188
六角107 ± 4 147 ± 6 189 ± 5 0.0001


西伯利亚
甲醇98 ± 1 101 ± 3 146 ± 2 0.0001
胃肠道105 ± 2 101 ± 2 135 ± 2 0.0001
六角141 ± 3 381 ± 8毒性0.0001

全尺寸表
一个在同一行意味着P值分别为获得多因素方差分析。
B辐射的暴露在美国和西伯利亚人参的选民从六角导致72.9和49.3％的细胞死亡，分别为。
价值是显着的负面控制不同，磷<0.05，使用学生的t检验。

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3.4。自由基清除活性
而美国，亚洲和西伯利亚人参种，各报以清除自由基，螯合过渡矿物和/或增加脂蛋白抗氧化（[康等人。，2007]，[圣基茨等。，2000]和[麦吉芬等。，2000]），没有抗氧化活性之间的直接比较，这三个植物药已经