高效液相色谱法同时测定黄芎抗栓胶囊中5种大黄成分的含量

201 0年 6月第 17卷第 6期 中国中医药信息杂志 ·47· ● 质 量 标 准 研 究 ● 高效液相色谱法同时测定黄芎抗栓胶囊中 5种大黄成分的含量 韩燕全 ，洪 燕 ，夏伦祝 ，高家荣 ，汪永忠 ，陈 浩 (i．安徽中医学院第一附属医院，国家中医药管理局中药制剂三级实验室，安徽 合肥 230031； 2．安徽中医学院，安徽 合肥 230031) 摘要：目的 建立高效液相色谱法同时测定黄芎抗栓胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚 含量的方法。方法 采用 Kroma s¨ cl 柱 (250 film x 4．6 mm，5 um)，甲醇一0．1％磷酸(85：1 5)为流动相，流速 1．0 mL／min， 柱温25℃，检测波长254 rim。结果 芦荟大黄素在 0．230～3．68／Ig(，=0．999 8)、大黄酸在 0．224～3．584 lag(，= 0．999 9)、大黄素在0．22 3～3．568 lag(，=0．999 8)、大黄酚在0．25 7～4．11 2 ug(，=0．999 9)、大黄素甲醚在0．287～ 4．592 Pg(，=0．999 8)范围线性良好；平均回收率分别为 98．48％、98．1 O％、99．08％、1 O0．34％、97．52％；RSD分别为 1．39％、1．54％、1．44％、2．40％、2．03％。结论 该方法简便、可靠、准确，可作为黄芎抗栓胶囊的质量控制方法。 关键词：高效液相色谱法；黄芎抗栓胶囊；芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚；含量测定 D0I：1 0．3969／j．i s sn．1005—5304．2010．06．020 中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：1005—5304(2010)06—0047—03 Simultaneous Determination of Five Contents of Rhubarb in Huangxiong Kangshuan Capsule by HPLC HANYah，quan ，HONGYan。，XIALun—zhu ，et al r ．TheFirstAffiliatedHospital,AnhuiCollege ofTCM,Grade 3 Laboratory of TCM Preparation，State Administration of TCM,Hefei 230031，China~2．Anhui College of TCM,Hefei 23oo31．China) Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of Aloeemodin，Rhein， Chrysophanol，Em odin and Physcione in Huangxiong Kangshuan Capsule．Methods The determination was performed on Kromasil—ClS column (250 mm ×4．6 mm，5 pm)with mobile phase consisted of methanol一0．1％ phosphoric acid(85：1 5)at a flow rate of 1．0 mL／min．Column temperature was 25℃． The UV detection wavelength was set at 254 nm ．Results The calibration curves were linear in the ran ge of 0．230~3．68 lag(r：O．9998)for Aloeemodin，0．224~3．584／ag(r 0．9999)for Rhein，0．223~3．568／ag(r= 0．999 8)for Emodin，O．257~4．1 12 Pg(r=O．999 9)for Chrysophanol an d 0．287~4．592 ug(r：0．999 8)for Physcion．The average recovery was 98．48％ ，98．10％，99．08％，IOO．34％，97．52％ and RSD was 1．39％， 1．54％，1．44％，2．40％，2．03％ respectively．Conclusion The determination method is simple，reliable， accurate，and it can be used for quality control of Huangxiong Kangshuan Capsule． Key words：HPLC；Huan gxiong Kan gshuan Capsule；Aloeemodin；Pdaeim Chrysophan ol： Emodin Physcione；content determ ination [7]Reder AT，Antel JP，0ger JJ，et a1．Low T8 antigen density on lympbocytes in active multiple sc]erosis[．】]．Ann Neurol，l984， l6(2)：242． [8]Ionen J，Surcel HM，Jagerroos H，et a1．T-Lymphocyte subsets defined by double immunofluorescence in multiple sclerosis[J]． Acta Neurol Send，1990，81(2)：128． [9]Poser CM，Paty Dw，Scheinberg L，et a1．New diagnostic criteria for multiple sclerosis guidelines for research protocols[J]．Ann Neurol，1983，13(3)：227． [1O 高 敏，高 聪，杨 宁．地黄合剂对多发性硬化患者外周血及脑脊液中T 淋 巴细胞亚群 的影响 [J]．中国中医药科技，2005，12(4)：207--208． [11 Frequin ST，Lamers KJ，Borm GF，et a1．T-cel1 subsets in the cerebr0spinal fluid and peripheral blood of multiple sclerosis patients treated with high dose intravenous methylpredisdone[J]． Aeta Neuro1 Scand，1993，88(2)：80—86． [12．j 0’Garra A．Cytokines induce the deve1opment of funntionally hf}terogeneous T he]per cell subsets[J]．Immunity，1998，8：275—283． (收稿 日期：2009—11-1 0，编辑：华强) · 48· Chinese Journal Of Information on TCM lun．2010 Vo1．17 No．6 黄芎抗栓胶囊是安徽中医学院第一附属医院院内制剂，曾 用名为通脑精胶囊，该方由大黄、川芎等 4味中药组成，功能行 气化痰、活血解毒，主要用于治疗老年性中风⋯等疾病。前期 研究过程中曾对其中大黄素的含量进行了薄层色谱法的含量 测定 。为了建立该制剂的化定量分析方法，更好地控制 本品质量，本课组对该制剂进行了含量测定方面的提高研 究。本试验采用高效液相色谱(HPLC)法对其君药大黄中芦荟大 黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚 5种成分的含量 同时进行测定。现报道如下。 1 仪器与试药 WATERS高效液相色谱仪(600泵，2487检测器，Mi l lennium32 工作站)，BP211D电子天平(德国塞多利斯公司)，HH—S型水浴 锅 (巩义市英峪予华仪器厂)，500 mL调温电热套(上海浦东新区 电理仪器厂)，SK3200H超声清洗器 (上海科导仪器有限公司)。 黄芎抗栓胶囊(安徽中医学院第一附属医院制剂中心生产 批号 080108、080523、080914)；含量测定用对照品均购 自中 国药品生物制品检定所，批号分别为：芦荟大黄素 0795—200605， 大黄酸 0757—200005，大黄酚 0796—2002081，大黄素 0756—200110， 大黄素甲醚 0758—200610。甲醇为色谱纯；水为二次重蒸水： 其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2．1 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱：Kromasil cl8柱(250 into×4．6 toni，5 pm)；柱温： 25℃；检测波长：254 nm；流动相：甲醇一0．1％磷酸(85：15)； 流速 ：1．0 mL／min；进样量 2O uL。理论板数以芦荟大黄 素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素 甲醚计算均不低于 10 000，5个成分与相邻峰之间分离度均大于 1．5，对称因子在 0．95～1．05之间。 2．2 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷减压干燥的芦荟火黄素、大黄酸、大 黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成 1 mL 含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚各约 0．2 mg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液 2 mL置 1O mL 量瓶中，混匀，即得。 2．3 供试品溶液的制备 参照文献[3-4]随机取黄芎抗栓胶囊 5粒，除去胶囊壳，内 容物混匀，精密称取内容物约 0．5 g，置具塞锥形瓶中，精密加 入甲醇 25 mL，称定重量，超声 (功率 300 W，频率 5O kHz)，放冷， 再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续 滤液 5 mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加 8％盐酸溶液 10 mL，超声处 理 2 min，再加三氯甲烷 10 mL，加热回流 1 h，放冷，置分液漏 斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲 烷层，酸液用三氯甲烷提取 3次，每次 10 mL，合并三氯甲烷液， 减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至 1O mL量瓶中， 加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2．4 专属性试验 按处方比例制成缺大黄阴性对照品，按 “2．3”项下方法制 备缺大黄阴性样品溶液。精密吸取上述对照品、供试品、阴性 样品溶液各 20 uL，照 “2．1”项下色谱条件测定。结果阴性样 品溶液在各对照品保留时间位置上均未见干扰，色谱图见图1。 A C B t}min 注：A．对照品；B．供试品：C．阴性样品； 1．芦荟大黄素；2．大黄酸；3．大黄素；4．大黄酚：5．大黄素甲醚 图1 黄芎抗栓胶囊HPLC图谱 2．5 线性关系考察 精密量取含芦荟大黄素(0．230 mg／mL)、大黄酸(O．224 mg／mL)、 大黄素 (0．223mg／mL)、大黄酚 (0．257 mg／mL)、大黄素甲醚 (0．287 mg／mL)的混合对照品溶液 0．5、1、2、4、8 IIlL，分别置 1O mL量瓶中，加 甲醇定容至刻度，摇勺，0．45 m¨微孔滤膜滤 过，按 “2．1”项下的色谱条件测定，每次进样 2O|lL。以进样浓 度(pg／mL)为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，计算其回 归方程及线性范围。芦荟大黄素：y_--161 8O3 一131 692，，= 0．999 8，线性范围0．230~3．68 Hg；大黄酸：J，=154 6312"+ 52 006，，=0．999 9，线性范围0．224~3．584 gg，大黄素： = 152 878 一791 770，／-=0．999 8，线性范围0．223~3．568 lag； 大黄酚：J，=163597 一129101，，=O．9999，线性范围 0．257～ 4．112 Pg；大黄素甲醚： =158 720 一132 792，，=0．999 8， 线性范围 0．287~4．592 Pg。 2．6 精密度试验 精密量取供试品溶液 2O L，连续进样 5次，测得芦荟大黄 素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSI)分别 为0．78％、0．9196、0．37％、0．46％、0．24％，明精密度较好。 2．7 稳 定性 试验 取供试品溶液，分别在 0、2、4、8、12、24 h按 “2．1” 项下色谱条件测定，测得样品中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、 大黄酚和大黄素甲醚峰面积的 RSD分别为 1．78％、1．06％、 1．86％、2．19％、2．37％，表明供试品溶液在 24 h内稳定。 2．8 重复性试验 取同一批样品，平行制备 6份供试品溶液，按上述色谱条件 测定峰面积并计算芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄 素甲醚的含量，其RSD分别为2．11％、1．93％、1．58％、1．94％、2．41％。 2．9 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(含芦荟大黄素 2．359 mg／g、大 2010年 6月第 17卷第 6期 中国中医药信息杂志 ·49· 黄酸 3．695 mg／g、大黄素 3．137 mg／g、大黄酚 4．257 mg／g 和大黄素甲醚 1．996 mg／g)6份，每份适量，分别精密加入一定 量的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照 品，按 “2．3”项下方法制成溶液，按上述色谱条件测定，计算回 收率。结果见表 1。 表 1 加样回收率试验结果(月=6) 2．1 0 样品的测定 取 3批黄芎抗栓胶囊，按 “2．3”项下方法制备供试品，每 批样品 3份。精密吸取供试品溶液 20 L，按照上述色谱条件 测定并计算含量，结果见表 2。 表2 黄芎抗栓胶囊中5种大黄成分含量测定结果(mg／g，／7=3) 3 讨论 黄芎抗栓胶囊由大黄、川芎等 4味中药组成，大黄为方中 君药，通过控制大黄中有效成分的含量可以很好地控制该制剂 的质量。大黄中蒽醌类成分含量测定方法文献报道较多，色谱 条件及制备方法也多种多样，但多采用单一成分含量的测定， 不能全面控制制剂的质量。本课题组在以往的研究中曾用薄层 色谱法测定了 3批样品中大黄素的含量，本试验的目的旨在更 进～步提高该制荆的质量控制水平。由于大黄中芦荟大黄素、 大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚 5种葸醌类成分的含量 均较高，故选择以上 5种葸醌类成分作为含量测定的指标成 分。笔者在本项目的研究工作中，参照 2005年版 《中华人民共 和国药典》(一部)“大黄”项下制备方法 ，并采用其测定波 长 254 nm同时对 5种葸醌类成分进行定量测定，试验结果表明 该方法可行，分离度较高，可作为黄芎抗栓胶囊的质量控制方 法 。 参考文献： [1]谢道俊，江停战，李之和，等．通脑精胶囊对 IR大鼠局灶性脑缺血症和 胰岛素敏感性的影响[J]．北京中医药大学学报，2003，26(1)：36—39． [2]陈 浩．薄层扫描法测定通脑精胶囊中大黄素的含量[J]．中国医院药学 杂志，2006，26(1)：l09—110． [3]胡晋娟，凌向阳．HPLC测定清泻丸中大黄素、大黄酚的含量[J]．广西中 医学院学报，2009，12(1)：53—54． [4]唐洪梅，李得堂，闰 雪，等．HPLC同时测定疗筋涂膜剂中 5种大黄成分 的含量[J]．中国现代应用药学杂志，2009，26(5)：409--41 1． [5]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)IS]．北京：化学工业出 版社。2005．17． (收稿 El期：2009一O9—1 8，编辑：陈静) 我国搭建中医药治疗肺结核科研平台 2010年 3月20日，国家 “十一五”科技重大专项中医药治 疗肺结核临床科研基地建设启动仪式在湖南省长沙市中心医院 举行。国家疾控中心结核病防控中心和湖南省有关领导出席仪 式。中医药治疗肺结核临床科研基地建设课题由长沙市中心医 院作为责任单位负责组织、实施、督导管理，联合多个省市的结 核病专科医院，共同完成课题研究。专项课题的目标主要是整合 中医药资源，建设中医药治疗肺结核临床科研基地；培养高素质 专科人才；规范肺结核中医诊断、实验室检测方法、治疗 及疗效评价标准；探索中医药治疗耐多药肺结核方案、方法， 为我国耐多药肺结核控制提供技术支持和依据，并将这些科研 成果应用到临床和结核病的防治中，为提高人民健康水平，保障 社会和谐稳定和经济持续发展服务。据介绍，鉴于数十年来全球 抗结核药物的研制停滞不前，寻求更新更好的治疗方法迫在眉 睫，人们期待中医药治疗肺结核上有所突破。 (本刊通讯员)