鲁米诺铁氰化钾化学发光体系对盐酸环丙沙星的测定

第29卷第3期 2010年3月 测试学报 FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis) VOL29No．3 313～315 鲁米诺一铁氰化钾化学发光体系对 盐酸环丙沙星的测定 周 华1，魏金凤2，周艳梅1，王亚萍1，朱天伟1 (1．河南大学化学化工学院环境与分析科学研究所，河南开封475004； 2．河南大学民生学院，河南开封475004) 摘要：环丙沙星对NaOH介质中的鲁米诺一铁氰化钾的化学发光具有较强的增敏作用，据此建立了一种新 的测定痕量环丙沙星药物的流动注射化学发光法。讨论了介质浓度、发光试剂浓度等因素的影响，在最佳实 验条件下，环丙沙星的质量浓度在2．0×10-51．2X10一g·L。范围内与发光强度呈良好线性关系，检出限 为1．2X10～g·L～，11次平行测定4．0×10～g·L“环丙沙星的相对偏差为3．2％。该方法已用于环 丙沙星片剂的测定，所得结果与标示值相符。 关键词：化学发光；鲁米诺一铁氰化钾；环丙沙星 中图分类号：0657．3；R917文献标识码：A 文章编号：1004-4957(2010)03-0313-03 doi：10．3969／j．issn．1004—4957．2010．03．022 DeterminationofCiprofloxacinwithLuminol—．PotassiumFerricyanide ChemiluminescenceSystem ZHOUHual，WEIJin．fen92，ZHOUYan-meil，WANGYa—pin91，ZHUTian—weil (1．InstituteofEnvironmentalandAnalyticalSciences，CollegeofChemistryandChemicalEn百neefing，HenanUniversity， Kaifeng475004，China；2．CollegeofMinsheng，HenanUniversity，Kaifeng475004，China) Abstract：Basedonthefactthatthechemiluminescence(CL)reactionofluminolandpotassiumfer- ricyanideinalkalinemediumcouldbesensitizedbyciprofloxacinsignificantly，andthechemilumi— nescenceintensitywasdirectlyproportionaltotheconcentrationofciprofloxacin，anewanalytical methodWasdevelopedforthedeterminationofciprofloxacinwithflowinjectionchemiluminescence． TheeffectoftypeofmediumandconcentrationofreagentsonCLintensityWasinvestigated．Under theoptimumexperimentalcondition，theCLintensityWasproportionaltociprofloxacinconcentration overtherangeof2．0X10～一1．2X10一g·L～withadetectionlimitof1．2X10～g·L～．The relativestandarddeviations(RSDs)of4．0×10～g·L～ciprofloxacinwith11consecutivemeasure— mentswasfoundtobe3．2％．ThemethodWasappliedinthedeterminationofciprofloxacindrugtab· lets，andtheresultsobtainedwereingoodagreementwiththatofthelabeHedvalues． Keywords：chemiluminescence；luminol—potassiumferricyanide；ciprofloxacin 环丙沙星(cF)的化学名为1．环丙_6．氟一1，4-二氢．4一氧-7[卜哌嗪基]-3-喹啉羧酸，是第三代喹诺酮 类药物，对需氧革兰阴性杆菌及绝大多数菌株有较好的抗菌活性⋯，在临床上应用广泛。目前测定环 丙沙星的方法有色谱法‘2|、毛细管电泳法口】、分光光度法H。51、电位法∞1、极谱法¨。等。但这些方法 存在仪器昂贵或操作复杂、测定时间较长等缺点。化学发光分析法¨1以其高灵敏度、仪器简单等优点 在食品与药物分析中日益受到重视。化学发光体系用于药物测定一“列的报道较多，用于测定环丙沙星 的化学发光体系有邻菲咯啉钉体系(Ⅱ)n4I、流动注射抑制化学发光法¨纠和ce“一Na：SO，化学发光体 系(酸性条件)116]。但尚无用鲁米诺一铁氰化钾化学发光体系测定环丙沙星的报道，与已报道文献相 比，本文方法设备简单、操作容易、体系稳定，用于环丙沙星片剂中环丙沙星含量的测定，结果令人 收稿日期： 基金项目： 第一作者： 通讯作者： 2009—12—16；修回日期：2010—02—22 河南省教育厅自然科学研究资助项目(20088610001，2009A610003) 周华(1986一)，女，河南中牟人，硕士研究生 周艳梅，Tel：0378—2868833．E—mail：zhouym@henu．edu．cn 万方数据 314 分析测试学报 第29卷 满意。 1 实验部分 1．1仪器与试剂 IFFM—E型流动注射化学发光仪(西安瑞科分析仪器有限公司)，分析过程中采样、注样、实验数据 采集及处理，均由WindowsXP系统下IFFM．ESystems软件完成。 准确称取鲁米诺(分析纯)0．4430g配成浓度为1．0×10～tool·L一的鲁米诺储备液，使用时用 0．1tool·L。1NaOH溶液逐级稀释，冰箱中避光冷藏；准确称取铁氰化钾(分析纯，上海试剂一厂) 0．9879g，加水溶解后定容于100mL棕色容量瓶中，摇匀配成浓度为3．0x10～mol·L‘1的铁氰化钾 储备液，使用时逐级稀释；准确称取环丙沙星标准品(分析纯，泰安市泰山神药业有限公司生产) 0．1000g，用水溶解并定容于100mL容量瓶中，得到1g·L一的环丙沙星标准储备液，使用时逐 级稀释。 1．2 实验方法 流动注射化学反应发光装置如图1所示，鲁米诺碱 性溶液与铁氰化钾溶液混合后载入流路，环丙沙星试样 (待测液)通过a通道载入流路，由泵(P)载入的溶液在 进样器中(V)混合后立即流入流通池中产生化学发光， 选择负高压为一500V，通过与计算机相联的化学发光 仪检测环丙沙星的发光强度，以相对化学发光信号对环 丙沙星进行定量分析。 2结果与讨论 2．1 实验条件的优化 2．1．1介质的影响分别试验了在浓度均为o．1tool·L。1 的NaOH、Na：CO，、NaHCO，3种碱性介质中鲁米诺一铁 氰化钾体系的发光强度，结果表明以NaOH为介质时， 体系的发光强度最大。所以选用NaOH溶液作为介质， P 图1 流动注射化学发光分析图 Fig．1Schematicdiagramofflowinjection chemiluminescence(CL)analysissystem P．peristalticpump，V．samplinginletvalve。C．flowingcell。 PMT．photomuhipliertube．AMP．amplifier．HV．hish voltage．Rrecorder。W．waste；a．eiprofloxaein solution，b．1uminolsolution，c．potassium ferricyanidesolution 并进一步考察了其浓度分别为0．05、0．1、0．15、0．2mol·L。1时对体系发光强度的影响。结果表明， 当NaOH浓度为0．1tool·L一时鲁米诺一铁氰化钾发光体系的发光强度最大，加入环丙沙星后，其发 光强度仍最大，因此实验选择0．1mol·L—NaOH作为介质。 2．1．2鲁米诺浓度的影响固定铁氰化钾和环丙沙星的浓度不变，考察了鲁米诺溶液浓度在1．0× 10-58．0×10～mol·L。1范围内对体系发光强度的影响。结果表明，在碱性介质中鲁米诺被氧化成能 发蓝色荧光的3一氨基酞酸盐，随着鲁米诺溶液浓度不断增加，被氧化的鲁米诺分子数量增多，因此体 系发光强度随之增大，当鲁米诺溶液浓度为6．0×10一mol·L。1时，体系化学发光强度达到最大，继 续增加鲁米诺溶液浓度，被氧化的鲁米诺分子占总的鲁米诺分子数量的百分比减小，发光强度开始减 弱，因此实验选用鲁米诺的分析浓度为6．0×10～mol·L～。 2．1．3铁氰化钾浓度的影响固定鲁米诺溶液和环丙沙星浓度不变，考察了铁氰化钾溶液浓度在1．0× 10～一7．0×10～mol·L一范围内对体系发光强度的影响。结果表明，随着铁氰化钾溶液浓度的增大。 化学发光强度增大，当铁氰化钾浓度为3．0×10一mol·L。1时，化学发光强度达到最大，继续增大铁 氰化钾浓度则会导致发光强度减弱，因此实验选用铁氰化钾的分析浓度为3．0×10～mol·L’。。 2．2 工作曲线 在优化的实验条件下，考察了环丙沙星的质量浓度对体系发光强度的影响，以相对峰高对其质量 浓度进行线性回归。结果表明，体系发光强度与环丙沙星的质量浓度在2．0×10-51．2×10～g．L。1 范围内有良好的线性关系，线性回归方程为，=44．4286p+24，相关系数(r)为0．9987(n=l1)，对 4．0×10～g·L一环丙沙星标样连续测定11次，其相对标准偏差为3．2％，检出限(S／N=3)为1．2× 万方数据 第3期 周华等：鲁米诺一铁氰化钾化学发光体系对盐酸环丙沙星的测定 315 10一g·L一。 2．3干扰实验 在优化实验条件下，药品中的赋形物、附随物及其它常见离子均不干扰环丙沙星的测定。对于 4．0×10～g·L叫的盐酸环丙沙星，1000倍的NaCI，500倍的葡萄糖、乳糖，50倍的淀粉、糊精，5 倍的蛋白质、s02,一、Cu“、zn2+、ca“、抗坏血酸、EDTA均不干扰测定。由于样品中上述物质的实 际含量均低于干扰最低值，因此在测定药片时无需分离或掩蔽，可直接测定。 2．4片剂中环丙沙星含量的测定 取盐酸环丙沙星片剂10片(每片标示量为0．25g，山西太原药业有限公司)，在研钵中研细混匀， 然后准确称取药粉0．3161 g，加水溶解并定容至250mL，摇匀，过滤，测定结果如表1所示。 表l样品中盐酸环丙沙星含量的测定及回收率实验 Table1 Determinationresultsofciprofloxacininsampleandrecoveryexpedments 参考文献： [1] [2] 钱元恕，王其南，肖永红，等．依诺沙星药代动力学和体外抗菌活性研究[J]．中国抗生素杂志，1992，17(3)： 215—218． MORLEYJA，ELRODL．DeterminationoffluoroquinoloneantibactefialsaS,N—acylderivatives[J]．Chromatographia， 1993，37(5／6)：295—299． MICHALSKAK，PAJCHELG，TYSKIS．Determinationofciprofloxacinanditsimpuritiesbycapillaryzoneelectropho- resis[J]．JChromatogr：A，2004，1051(1／2)：267—272． DULiming，XUQingqin，YUANJianmei．Fluorescencespectroscopydeterminationoffluoroquinolonesbychargetransfer reaction[J]．JPh删BiomedAnal，2003，33(4)：693—698． SULTANSM，SULIMANFEO．Flowinjectionspectrophotometricdeterminationoftheantibioticeiprofloxacinindrug formulations[J1．AnMyst，1992，117(9)：1523一J526． 胡娟，王宏．示波计时电位法测定环丙沙星含量[J]．华西药学杂志，2002，17(3)：213—214． 狄俊伟，金民．盐酸环丙沙星的示波极谱测定及其机理研究[J]．分析试验室，1995，14(4)：33—36． 李超，刘树元，李嫒嫒，等．化学发光分析法的发展与应用[J]．分析测试技术与仪器，2006，12(2)：75—81． 石杰，曹丰璞，龚伟，等．流动注射一抑制化学发光法测定司帕沙星[J]．分析测试学报，2006，25(6)：123一 125． 李丽清，周艳梅，封满良，等．流动注射一化学发光法测定片剂中氨基比林[J]．分析试验室，2001，20(3)： 28—30． 王金中，刘波，周艳梅．流动注射化学发光抑制法测定吡罗昔康[J]．分析测试学报，2005，24(5)：110一112． 何树华，吕弋，何德勇，等．鲁米诺一铁氰化钾化学发光体系测定双嘧达莫[J]．分析试验室，2004，23(4)：5—7． 李利军，钟招亨，冯军，等．流动注射化学发光法测定盐酸多巴胺[J]．分析测试学报。2007。26(1)：125—127． 何治柯，袁良杰，马容明，等．邻菲咯啉钉(Ⅱ)化学发光分析测定环丙沙星[J]。武汉大学学报：自然科学版， 1998，44(6)：714—716． 唐玉海，姚宏，孙嫒媛．流动注射抑制化学发光法测定盐酸环丙沙星[J]．理化检验：化学分册，2007，43(8)： 639—641． 梁耀东，李建中，章竹君．流动注射一化学发光法测定盐酸环丙沙星[J]．分析化学，1997，25(11)：1307—1310． ， ， ， ，，，， 们 ¨纠纠引 钉 叫 口 H 陋 №"哺眇 叫 n 1二I=¨ I=I I=J 万方数据 鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系对盐酸环丙沙星的测定 作者： 周华， 魏金凤， 周艳梅， 王亚萍， 朱天伟， ZHOU Hua， WEI Jin-feng， ZHOU Yan- mei， WANG Ya-ping， ZHU Tian-wei 作者单位： 周华,周艳梅,王亚萍,朱天伟,ZHOU Hua,ZHOU Yan-mei,WANG Ya-ping,ZHU Tian-wei(河南大 学,化学化工学院,环境与分析科学研究所,河南,开封,475004)， 魏金凤,WEI Jin-feng(河 南大学,民生学院,河南,开封,475004) 刊名： 分析测试学报 英文刊名： JOURNAL OF INSTRUMENTAL ANALYSIS 年，卷(期)： 2010，29(3) 被引用次数： 0次 参考文献(16条) 1.钱元恕.王其南.肖永红 依诺沙星药代动力学和体外抗菌活性研究 1992(3) 2.MORLEY J A.ELROD L Determination of fluoroquinolone antibacterials as N-acyl derivatives 1993(5/6) 3.MICHALSKA K.PAJCHEL G.TYSKI S Determination of ciprofloxacin and its impurities by capillary zone electrophoresis 2004(1/2) 4.DU Liming.XU Qingqin.YUAN Jianmei Fluorescence spectroscopy determination of fluoroquinolones by charge transfer reaction 2003(4) 5.SULTAN S M.SULIMAN F E O Flow injection spectrophotometric determination of the antibiotic ciprofloxacin in drug formulations 1992(9) 6.胡娟.王宏 示波计时电位法测定环丙沙星的含量[期刊论文]-华西药学杂志 2002(3) 7.狄俊伟.金民 盐酸环丙沙星的示波极谱测定及其机理研究[期刊论文]-分析试验室 1995(4) 8.李超.刘树元.李媛媛.段洪伟 化学发光分析法的发展与应用[期刊论文]-分析测试技术与仪器 2006(2) 9.石杰.曹丰璞.龚炜.陈锦辉.史犇 流动注射-抑制化学发光法测定司帕沙星[期刊论文]-分析测试学报 2006(6) 10.李丽清.周艳梅.封满良.吕九如 流动注射-化学发光法测定片剂中氨基比林[期刊论文]-分析试验室 2001(3) 11.王金中.刘波.周艳梅 流动注射化学发光抑制法测定吡罗昔康[期刊论文]-分析测试学报 2005(5) 12.何树华.吕弋.何德勇.胡玉斐.章竹君 鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系测定双嘧达莫[期刊论文]-分析试验室 2004(4) 13.李利军.钟招亨.冯军.陈其锋.程昊.黄文艺.孔红星.吴健玲 流动注射化学发光法测定盐酸多巴胺[期刊论文]-分 析测试学报 2007(1) 14.何治柯.袁良杰.马容明 邻菲咯啉钌(Ⅱ)化学发光分析测定环丙沙星 1998(6) 15.唐玉海.姚宏.孙媛媛 流动注射抑制化学发光法测定盐酸环丙沙星 2007(8) 16.梁耀东.李建中.章竹君 流动注射-化学发光法测定盐酸环丙沙星 1997(11) 相似文献(10条) 1.学位论文 冯娜 鲁米诺-铁氰化钾体系后化学发光现象的研究 2005 本论文由综述和研究两部分组成。在综述部分，对鲁米诺化学发光体系近十年的应用进行了综述，着重介绍了它们的分析应用以及反应机理。 优化了反应条件， 对机理进行了初步的探讨，建立了测定磷酸可待因、吩噻嗪类药物、盐酸小檗碱的后化学发光分析新方法，从而从理论和实践上构建了一个鲁米诺- 铁氰化钾后化学发光新体系。 本文对该体系的发光机理进行了详细的研究，提出了鲁米诺-铁氰化钾-有机物可能的发光机理。 本论文对鲁米诺-铁氰化钾的后化学发光反应体系的研究有助于充实化学发光研究的内容，拓宽化学发光分析的研究领域，为深入认识化学发光的反 应本质提供了有益的思路。 2.期刊论文 何树华.吕弋.章竹君.HE Shu-hua.Lü Yi.Zhang Zhu-jun 鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系测定异丙嗪 - 涪陵师范学院学报2003,19(5) 在碱性条件下,铁氰化钾能氧化鲁米诺产生化学发光,异丙嗪对该体系的化学发光有显著的增强作用.基于此,结合流动注射技术,建立了测定异丙嗪的 化学发光新方法.该方法具有很高的灵敏度,检测限为5.7×10-9g/mL(IUPAC),线性范围为1.0×10-8～1.0×10-6g/mL,对1.0×10-7g/mL异丙嗪平行测定 11次,其相对标准偏差为2.9%. 3.学位论文 邓庆文 化学发光分析法在药物分析中的应用 2006 本研究论文主要分为两个部分：综述和研究报告。 第一部分综述：化学发光分析法在药物分析中的应用。本文对化学发光分析法的发展历程，基本原理以及近年来在药物分析中的应用作了简要综述 ，并对化学分析法在药物分析中的应用前景作了展望。共计参考文献137篇。 第二部分研究报告主要涉及两个方面的工作，第一部分是建立了以ClO2为氧化剂的在中性及近中性均相水溶液中的化学发光新体系和在无缓冲介质 条件下的化学发光新体系。第二部分是利用鲁米诺-铁氰化钾第二次化学发光反应体系测定咖啡因并对铁氰化钾-鲁米诺-有机物体系第二次化学发光反应 的反应机理进行深入研究；同时提出了新的反应机理假设。 (1)以二氧化氯为氧化剂的中性及近中性均相化学发光体系的研究及其分析应用。ClO2在pH值为5.0-8.5的醋酸缓冲溶液中能够氧化亚硫酸盐产生化 学发光，吡哌酸(PPA)能够增敏这一化学发光体系。以ClO2-SO32--PPA反应作为此类反应的一个模型体系，研究了具有高度化学活性和对环境友好的 ClO2在中性及近中性水溶液中作为化学发光氧化剂的可能性。结合流动注射分析技术，这种化学发光体系已应用于吡哌酸药片的自动溶出实验。与通常 的强酸性及强碱性化学发光体系相比较，所提出化学发光体系有其自身的优点。 (2)以二氧化氯为氧化剂的无缓冲介质条件下化学发光体系的研究及其分析应用。本文研究发现在无缓冲介质条件下，维生素B2可以显著地增敏 ClO2和亚硫酸盐的化学发光体系。基于此现象并结合流动注射分析技术，本文提出了一种极其简单的测定维生素B2的化学发光分析法。这种化学发光体 系已成功用于VB2片剂及注射液中VB2含量的测定，结果令人满意。与其它相类似的能量转移体系相比，所提出的化学发光体系有其自身的优点。 (3)鲁米诺-铁氰化钾-咖啡因第二次化学发光反应机理研究及其分析应用。本文研究发现咖啡因在鲁米诺-铁氰化钾化学发光反应结束后的溶液中存 在第二次化学发光的现象；优化了反应条件，建立了一种利用鲁米诺-铁氰化钾体系的第二次化学发光反应测定咖啡因的流动注射化学发光新方法。方法 的检出限为3.6×10-8g/mL，相对标准偏差为2.5％(2.0×10-6g/mL的咖啡因，n=9)，线性范围为1×10-7g/mL-5×10-5g/mL。基于一系列的实验，我们提 出了一种新的关于第二次化学发光反应的机理假设。 4.期刊论文 何树华.吕弋.何德勇.胡玉斐.章竹君 鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系测定氯丙嗪 -西南师范大学学报 (自然科学版)2003,28(2) 在碱性条件下,铁氰化钾氧化鲁米诺产生化学发光,氯丙嗪对该体系的化学发光有显著的增强作用.基于此,结合流动注射技术建立了测定氯丙嗪的化 学发光新方法.该方法有很高的灵敏度,检测限为5.7×10-9 g/mL (IUPAC),线性范围为1.0×10-8～1.0×10-6 g/mL,对1.0×10-7 g/mL氯丙嗪平行测定 11次,其相对标准偏差为2.7%. 5.期刊论文 屈颖娟.段淑娥.王少英.QU Ying-Juan.DUAN Shu-E.WANG Shao-Ying 鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系测 定利福平 -光谱实验室2007,24(5) 基于鲁米诺在碱性条件下可以被铁氰化钾氧化产生化学发光,利福平对此化学发光具有增敏作用这一现象,结合流动注射技术建立了一种直接测定利 福平的流动注射化学发光分析新方法.该方法的线性范围为5.0×10-8-3.0×10-6 g·mL-1,检出限为1×10-8g·mL-1,对3.0×10-7g·mL-1的利福平连续 进行11次平行测定,其相对标准偏差为4.5%,该方法已成功地测定了利福平眼药水中利福平的含量. 6.学位论文 何德勇 化学发光微流控传感器芯片和微流动注射芯片的研究 2006 微流控芯片（microfluidic chip）又称微全分析系统（micro total analysis system，μTAS）或芯片实验室（Lab on a chip），它是以分析化 学理论和方法为基础，以微机电加工技术（micro-electromechanical system,MEMS）为依托，以微管道网络为结构特征，以生命科学和环境科学为主要 应用对象，将分析化学操作的整个程序（包括取样、分离、化学反应和检测）或部分程序都集成在芯片材料上，甚至能集成几百台仪器于一个芯片上。 微流控芯片不但使珍贵的生物试样与试剂消耗大大降低到微升甚至纳升级，而且使分析速度提高了十倍，百倍，费用却降低了十倍，百倍，从而使分析 技术的应用普及到家庭，个人成为可能。它充分体现了当今分析设备微型化，集成化与便携化的发展趋势，为其在生物医学、药物合成筛选、环境检测 和保护、卫生检疫和司法鉴定等众多领域的应用提供了广阔的前景。 本论文的研究内容包括化学发光微流控传感器芯片和化学发光微流动注射芯片等两个方面。 1 化学发光微流控传感器芯片的研究 传感器芯片的传统分子识别物质有酶（包括纯酶、动植物组织和细胞）、抗体和受体、核酸、DNA和蛋白质等。这些生物识别物质大都具有高度专一 识别能力，用作传感器识别元件具有特异性。但同时这些识别物质具有制备昂贵、容易失活以及实验操作条件苛刻等缺点。分子印迹技术（molecular imprinting technology,MIT）是以目标分子为模板，将功能单体分子与模板分子通过共价键或非共价键的方式形成可逆复合物，再加入交联剂和引发剂 进行聚合反应将模板分子交联固定，最后将模板分子提取出来，形成具有与模板分子空间结构互补并具有多重作用位点的三维孔穴的分子印迹聚合物 （molecularly imprinted polymer,MIP）。分子印迹聚合物具有可以和生物识别物质相媲美的专一识别能力以及其制作简单，耐酸碱热等特点，已广泛 的运用于了传感器的设计中。 分子印迹聚合物应用于芯片的研究，主要集中在阵列芯片、SPR传感器芯片、QCM传感器芯片和微固相萃取芯片等方面。将分子印迹聚合物作为分子 识别物质，构建微流控传感器芯片的文献还未见报道。本论文分别以特布他林、双嘧达莫、氯丙嗪和没食子酸为模板分子合成了它们各自的分子印迹聚 合物，并将其填充在化学发光微流控芯片的发光检测池中，构建了一种新型的分子印迹微流控传感器芯片，这种芯片具有如下特点。 1．通常传感器的分子识别元件只具有分子识别功能，同其他传感器的分子识别元件不同，本研究设计的微流控传感器芯片，分子印迹聚合物同时具 有在线富集和分子识别两种功能。它同文献报道的含有分子印迹聚合物微固相萃取柱的微流控芯片也不同，在微固相萃取柱中，通常要使用大量的有机 溶剂或者混合溶剂去洗脱模板分子，这种洗脱是比较困难的，特异性好、多位点结合的分子印迹聚合物的洗脱就更加困难。 2．由于模板物质的洗脱通常都要使用大量的有机溶剂或者混合溶剂，它们会对化学发光产生淬灭作用，从而降低化学发光的强度。而在本芯片中 ，由于化学发光反应破坏了模板分子的结构，使得MIP上的结合位点得以释放出来，以便再次结合模板目标分子，因此该传感器芯片具有很好的可逆性。 又由于反应后的模板分子发生了结构的改变，MIP对它的结合能力下降，直接用水就可以将之洗脱下来，避免了有机试剂或者缓冲溶液的使用，大大提高 了芯片的响应值。 （1）化学发光分子印迹传感器芯片测定人血清中特布他林的含量 特布他林为选择性β<,2>受体激动剂，有明显的平喘、祛痰作用，临床用于治疗支气管哮喘、哮喘型支气管炎等疾病。常常作为促生长剂添加到动 物饲料中，其作用与克伦特罗相似。以特布他林为模板分子，a-基丙烯酸（MAA）为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）为交联剂，乙腈为溶剂 ，偶氮二异丁腈（AIBN）为引发剂，在60℃的水浴中加热24小时，合成了特布他林分子印迹聚合物。以此聚合物填充在芯片的微检测池中作为分子识别 物质，并基于特布他林对鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系的增敏作用，建立了一种新型的化学发光微流控分子印迹传感器芯片测定特布他林。该传感器在 8.0×10<’-9>-1.0×10<’-7>g／mL范围内对特布他林有良好响应，检出限为4.0×10<’-9>ng／mL（3σ）。该传感器芯片已成功的测定了血液中特布 他林的含量。 （2）基于分子印迹识别的化学发光微流控传感器芯片测定双嘧达莫 以聚甲基丙烯酸甲酯（poly（methylmethacrylate），PMMA）为材质，用二氧化碳激光雕刻机在PMMA上刻蚀出200μm宽，150μm深的微通道，8mm长 ，1mm宽，0.5mm深的微检测池。微检测池中填入50μm粒径大小的双嘧达莫分子印迹聚合物作为识别物质，利用精确时间控制的注射泵控制所有试剂，基 于双嘧达莫对铁氰化钾－鲁米诺化学发光体系的增敏作用，建立了化学发光分子印迹传感器芯片测定双嘧达莫的方法。该传感器具有很高的灵敏度和很 好的选择性以及很好的可逆性。其响应值与双嘧达莫在1-20ng/mL的范围内有良好的线性。检出限为0.5ng/mL（3σ）。该传感器芯片已成功的测定了人 体液中的双嘧达莫含量。结果令人满意。 （3）氯丙嗪分子印迹化学发光微流控传感器芯片的研究 盐酸氯丙嗪作为抗精神失常药物，由于其潜在的对人体的危害，禁止在饲料和动物饮用水中使用。因此建立一种快速高效的便携式的氯丙嗪质量监 控方法是非常必要的。在本研究中，以氯丙嗪分子印迹聚合物为识别物质，微流控芯片技术为载体，鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系为检测方法，建立了 一种新型的氯丙嗪化学发光分子印迹传感器芯片。该传感器的设计简单，可逆性高，选择性好，重现性好，其响应特性为：线性范围为0.02- 0.4μg/mL，检出限为8ng/mL（3σ），精密度为4.8％。该微流控传感器芯片已成功的测定了尿液中氯丙嗪的含量。 （4）没食子酸化学发光微流控分子印迹传感器芯片的研究 没食子酸常用作食品抗氧化剂，防腐剂。本研究中利用没食子酸分子印迹聚合物为分子识别物质，基于没食子酸对鲁米诺一铁氰化钾化学发光体系 的增敏作用，结合微流控分析技术，建立了化学发光微流控传感器芯片测定了没食子酸。该传感器芯片制作简单，重现性好，其响应范围为5- 200ng/mL，检出限为3ng/mL（3σ）。将该传感器运用于食品中没食子酸的测定，结果满意。 2 化学发光微流动注射芯片的研究 微流动注射分析（micro flow injection analysis，μFIA），是微流控分析的一个分支，1995年S.J.Hawwell首次对μFIA作了报道。微流动注射 分析与常规的流动注射分析相比，由于其简单高效，操作方便，节约试剂等优点，近几年来发展的很快。本文在PMMA材质上，用二氧化碳激光烧蚀构建 微通道和热压法键合，设计了一种具有精确时间控制的注射泵用于控制进样体积，时间控制精度为0.01秒，取样量为纳升至微升级，通过化学发光反应 进行检测，建立一系列的微流动注射分析芯片，测定了尿酸，亚硫酸钠、亚硝酸根和过氧化氢等。 （1）化学发光微流动注射芯片测定尿酸 微流控芯片测定尿酸的方法已有报道，但是这些方法都是基于酶化学的原理。由于酶试剂昂贵且难于保存，在实际应用中，实验条件比较苛刻，所 以建立一种无酶测定尿酸的方法就显得尤为重要。 在本论文中，基于无酶化学发光体系（鲁米诺-铁氰化钾）在强碱性介质中及高浓度亚铁氰化钾存在的条件下，尿酸对鲁米诺-铁氰化钾化学发光体 系的增敏作用，建立了一种无酶试剂的化学发光微流动注射芯片测定了人血清和尿液中的尿酸含量。该方法采用注射泵控制所有试剂，简单高效，易于 微型化。尿酸的浓度在0.8-30mg／L范围内有良好的线性关系，检出限是0.5mg／L（3α）。 （2）化学发光微流动注射芯片测定食品中的亚硫酸钠 亚硫酸钠作为一种食品添加剂，常常应用于食品的漂白。当亚硫酸钠摄入过量，会对人体造成严重危害。因此很有必要建立一种快速高效的方法监 控食品中亚硫酸钠。 本研究发现，在硫酸介质中，亚硫酸钠对Ce（IV）-Rh6G-Tween 80化学发光体系具有很强的增敏作用，采用注射泵精确控制试剂，利用二氧化碳激 光烧蚀，热压法在PMMA材质上建立一种高效快速，易于微型化的微流动注射芯片测定了食品中的亚硫酸钠。线性范围为1.0-60μg／mL，检出限是 0.5μg／mL（3σ）。 （3）化学发光微流动注射芯片测定食品中的亚硝酸钠 基于无机偶合化学发光反应，即在酸性条件下，亚硝酸氧化亚铁氰化钾生成铁氰化钾，铁氰化钾遇到鲁米诺溶液产生很强的化学发光，在 50×40×5mm的PMMA材质上用二氧化碳激光刻蚀出200微米宽，100微米深的微通道，利用精确时间控制的注射泵控制所有试剂，建立了一种高灵敏度微流 动注射分析芯片测定了食品中的亚硝酸。亚硝酸的浓度在8-200μg／L范围内与发光强度成良好的线性，检出限是4μg／L（3α）。该芯片非常适合于监 控食品中的亚硝酸含量。 （4）化学发光微流动注射芯片测定雨水中的过氧化氢 基于luminol-H<,2>O<,2>-Co<'2+>化学发光体系，设计了一种新的微流动注射芯片，准确测定了雨水中的过氧化氢含量。 7.期刊论文 何树华.吕弋.何德勇.胡玉斐.章竹君 鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系测定双嘧达莫 -分析试验室 2004,23(4) 在碱性条件下,铁氰化钾氧化鲁米诺产生化学发光,双嘧达莫对该体系的化学发光有显著的增强作用.基于此并结合流动注射技术建立了测定双嘧达莫 的新方法.该方法检出限为5.7×10-11 g/mL(IUPAC), 线性范围为1.0×10-10～5.0×10-8 g/mL,对5.0×10-9 g/mL双嘧达莫平行测定11次,其相对标准偏 差为1.9%. 8.学位论文 陈福南 高效液相色谱-化学发光分析研究 2008 化学发光(chemiluminescence，CL)是在没有光、电、磁、声、热源激发的情况下，由化学反应或生物化学反应产生的一种光辐射。以此为基础的化 学发光分析，由于可以进行发射光子计量，又没有外来激发光源存在时散射光背景的干扰，因而具有很高的灵敏度(检出限可达10-12-10-21mol)，很宽 的线性范围(3-6个数量级)，同时仪器设备又很简单、廉价、易微型化，在近三十年发展非常迅速。然而，化学发光分析法的一个突出的缺点是选择性比 较差，严重制约了它的应用。人们采用了多种方法来弥补化学发光分析的这个缺陷，一是与特异性分子识别反应联用，如酶反应，包括纯酶反应、动植 物组织或细胞；抗原-抗体反应或受体-配体反应；核酸、适配体、DNA、RNA等特异性识别及分子印迹聚合物识别等。另一种方法是将化学发光分析同高 效分离方法相结合，如高效液相色谱、毛细管电泳和凝胶电泳等。 现就HPLC-CL检测技术的研究进展(第一章)和具体研究工作(第二-四章)简述如下： 第一章主要就HPLC-CL检测技术的基本原理、典型化学发光反应体系(包括鲁米诺及其衍生物、过氧化草酸酯、三(2，2-联吡啶)钌(Ⅱ)、高锰酸钾化 学发光体系等)、柱后化学发光检测器的构建及近10年来在生命科学、药学、临床医学、环境及食品等领域的应用和进展情况进行了评述。对这一检测技 术在实际应用中存在的问题进行了分析，对其发展方向进行了展望。 第二章就luminol-K3Fe(CN)3化学发光检测方法与高效液相色谱分离技术的结合及其在儿茶酚胺类药物分析中应用进行了研究，主要包括： 1、微透析采样，高效液相色谱分离和鲁米诺-铁氰化钾化学发光活体在线检测血液中左旋多巴： 基于左旋多巴可以增强鲁米诺-铁氰化钾化学发光信号的现象，结合高效液相色谱，建立了新的HPLC-CL左旋多巴分析方法。而微透析技术是一种新 的采样技术，它具有活体、原位采样，实时、在线检测等突出特点。本研究设计了微透析探针系统，又将这个新的采样技术与HPLC-CL联用，实现了家兔 血液中的左旋多巴活体在线检测。灌流液以5μl/min的速度灌流，将血液中的分析物透析出来，经HPLC分离后用CL检测。该方法获得的响应信号在 1×10-8-1×10-6g/mL(r2=0.9995)浓度范围内呈良好的线性关系，检出限为3×10-9g/mL(3σ)。获得的药时曲线表明左旋多巴的血药浓度在服药90分钟 时达到最高值，与药典上分析结果一致。 2、HPLC-鲁米诺-铁氰化钾化学发光检测同时测定人血清中的肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺： 肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺对鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系都有增敏作用，可以分别用本化学发光体系进行检测。但是它们三者在同一个系 统中，则会产生相互干扰。本研究设计反应池、优化色谱分离条件，建立了这三种物质同时测定的HPLC-CL新方法。以0.01mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液-甲 醇(92/8，v/v)为流动相在C18反相色谱柱上实现分离，柱后用CL进行检测。在优化好的各项条件下。肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺的线性范围分别 是1×10-8-5×10-6，5.0×10-9-1.0×10-6和5.0×10-9-1.0×10-6g/mL，检出限分别为4.0×10-9，1.0×10-9和8.0×10-10g/mL。该方法已成功用于血 清样品中三种物质的分析，加标回收率在97-106.7％之间。 第三章研究了高锰酸钾－甲醛化学发光体系在高效液相色谱柱后检测技术的应用，包括： 3、高锰酸钾－甲醛化学发光法高效液相色谱柱后检测血清中的肌苷本文采用高效液相色谱与化学发光检测联用法，用酸性高锰酸钾和甲醛作为发光 剂，流动注射化学发光来测定肌苷，用55:45的甲醇：水作为流动相，肌苷的质量浓度在0.4-12μgmL-1，范围内与化学发光强度呈良好的线性关系。其 检出限为0.15μgmL-1,测定的相对标准偏差为2.9％，(c=1.0×10-6g/mL，n=9)。该方法已成功地用于测定人体血清中的肌苷。 4、高锰酸钾-甲醛化学发光法高效液相色谱柱后检测血清中的维生素B6本文基于酸性介质中甲醛会增敏高锰酸钾化学发光体系，建立了一个新的高 锰酸钾-甲醛-维生素B6化学发光体系，并将其与高分离效率的HPLC耦合，克服了化学发光选择性差的缺陷，在优化好的条件下，维生素B6对该体系的化 学发光响应线性范围为0.3-10μgmL-1，检出限为0.1gμgmL-1，测定的相对标准偏差为3.7％，(c=1.0×10-6g/mL，n=7)。该方法已成功地用于同时测定 人血清中的维生素B6。 5、高锰酸钾－甲醛化学发光法高效液相色谱柱后检测尿样中的异丙嗪高锰酸钾实际常用的化学发光试剂，经研究发现在酸性介质中可以氧化盐酸异 丙嗪产生化学发光。而甲醛可以增敏高锰酸钾－异丙嗪化学发光。基于这样的原理，建立了HPLC-CL检测盐酸异丙嗪的新方法。在实验优化的最佳条件下 盐酸异丙嗪的质量浓度在1-100μgmL-1范围内与化学发光强度呈良好的线性关系，其线性方程为△I=16.9234+26.3620c(r2=0.9993)，对1μgmL-1的盐酸 异丙嗪平行测定11次，其相对标准偏差为2.7％，根据IUPAC建议计算得本方法的检出限为3×10-7gmL-1。 第四章研究了联吡啶钌-Ce(Ⅳ)化学发光体系在高效液相色谱柱后检测技术，包括： 6、联吡啶钉-Ce(Ⅳ)化学发光体系检测血清和尿样中的呋噻米Ce(Ⅳ)为氧化剂时，一方面与呋噻米发生氧化还原反应生成活性中间体，另一方面又 将Ru(bipy)32+氧化成Ru(bipy)33+。后者与呋噻米活性中间体发生反应产生激发态Ru(bipy)32+*,然后释放出光能回到基态，并且产生的化学发光强度与 呋噻米浓度在一定范围内呈线性关系。本文基于这样的反应体系,建立了Ce(Ⅳ)-Ru(bry)32+-呋噻米化学发光分析方法，并将这个高灵敏的CL分析方法与 高分离效率的HPLC耦合起来，在设计反应池的基础上，形成一个新的灵敏、快速的呋噻米分析方法，检出限为3.0×10－8g/mL，线性范围在1- 50×10－7g/mL,并成功用于血清样晶中呋噻米的测定。 7、联吡啶钌－Ce(Ⅳ)化学发光体系检测片剂和血清中的己烯雌酚本文研究发现酸性介质中Ce(Ⅳ)可以同时氧化DES和Ru(bipy)32+，两个氧化还原反 应生成的中间产物再相互作用生成激发态Ru(bipy)32+*，激发态Ru(bipy)32+*通过释放光能回到基态，由此产生化学发光，且化学发光强度与DES浓度在 一定范围内呈线性关系。基于此，本文建立了新的测定DES的CL方法。并设计了反应池，使之与HPLC耦合后，尽量减少柱后峰展宽，保持化学发光方法的 灵敏度，同时优化了各项分析分离条件和化学发光反应条件，利用HPLC的高分辨效率，成功实现了血清等复杂生物样品中DES的分析，在8×10-8-1×10- 5g/mL范围内成良好的线性关系，方法检出限为3.0×10-8g/mL。对8×10-7g/mL的己烯雌酚连续进行7次平行测定的相对标准偏差为3.6％。 8、联吡啶钌－Ce(Ⅳ)化学发光体系检测血清和尿样中的甲磺酸酚妥拉明本文研究发现，酸性介质中，酚妥拉明被Ce(Ⅳ)氧化生成活性中间体。有 Ru(bipy)32+存在时，Ru(bipy)32+同时也被Ce(Ⅳ)氧化成+3价Ru(bipy)33+。酚妥拉明活性中间体接着与Ru(bipy)33+产生反应生成激发态 Ru(bipy)32+*，激发态Ru(bipy)32+*通过释放光能回到基态，由此产生化学发光，且化学发光强度与酚妥拉明浓度在一定范围内呈线性关系。基于此 ，在完成反应池设计基础上，首次提出用HPLC-CL联用技术测定生物样品中的酚妥拉明，对4×10-7g/mL的酚妥拉明连续进行11次平行测定的相对标准偏 差为3.1％，方法检出限为3.0×10-8g/mL。在1～20×10-7g/mL范围内线性方程为,△I=-55.95+46.40c(r2=0.9985)，效果令人满意。 9.期刊论文 何树华.田开江.张淑琼.余维亚.HE Shu-hua.TIAN Kai-jiang.ZHANG Shu-qiong.YU Wei-ya 鲁米诺-铁 氰化钾化学发光体系测定富马酸酮替芬 -分析测试学报2005,24(2) 在碱性条件下,铁氰化钾与鲁米诺产生化学发光,富马酸酮替芬对该发光有显著的增强作用.基于此,结合流动注射技术,建立了测定富马酸酮替芬的新 方法.该方法具有较高的灵敏度,检出限为5.7×10-9g/mL(IUPAC),线性范围为1.0×10-8～1.0×10-6g/mL,对1.0×10-7g/mL富马酸酮替芬平行测定11次 ,其相对标准偏差为2.6%.该方法已成功用于片剂中富马酸酮替芬的测定. 10.会议论文 何德勇.吕弋.胡玉斐.何树华.章竹君 鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系在儿茶酚胺类药物中的分析研究 2003 本文研究发现在,儿茶酚胺类药物对.基于此结合流动注射技术,建立了灵敏、快速、简单测定儿茶酚胺类药物的新方法.去甲肾上腺素、肾上腺素、 多巴胺、异丙肾上腺素、多巴酚丁胺的线性范围在5×10<'-11>~5×10<'-8>g/mL.并且该方法已经成功应用于了注射液中儿茶酚胺的测定. 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_fxcsxb201003022.aspx 授权使用：上海海洋大学图书馆(shhydxtsg)，授权号：5756e230-4369-40c4-957b-9e14009e4772 下载时间：2010年10月19日