炎琥宁氯化钠注射液处方筛选

炎琥宁氯化钠注射液处方筛选 炎琥宁氯化钠注射液处方筛选 卢宏丽1，刘旻娟2，胡杰3，郭小青3 (1. 山西省肿瘤医院药剂科 太原 030013；2.陕西省渭南市中心医院药剂科 渭南 714000； 3. 山西大学中医药现代研究中心 太原 030006) 摘要： 目的： 优选炎琥宁氯化钠注射液的处方。方法： 应用L25(53)正交试验法，以有关物质、含量、PH值变化为指标筛选处方。结果：处方中辅料最佳组成为PH6.2～6.5，L-半光氨酸0.05%，枸橼酸0.04%；采用该处方制备样品在经稳定性、冻融试验考察，质量稳定。结论：处方合理，注射液质量稳定。 关键词： 炎琥宁氯化钠注射液； 有关物质； 处方筛选 Formula Optimization of Potassium Sodium Dehydroandrographolide Succinate and Sodinm Chloride injection LU Hong-Li1，LIU Wen-Juan2，WU Chun-Ling3，GUOxiao-qing3 (1.The pharmacy department of Shanxi Province Tumour Hospital , Taiyuan 030013； 2. Weinan Central Hospita of Shaanx，Weinan 714000； 3. The Chinese Medicine Modern Research Center of Shanxi University，Taiyuan 030006 ) Abstract: Objective: To optimize the Formula of Potassium Sodium Dehydroandrographolide Succinate and Sodinm Chloride injection. Methods: Orthogonal test of L25 (53) was applied for screening and related substances,contents,pH value as indexes. Results: The key factors in optimized formula was the following: the solution pH value of 6.2～6.5, 0.04percent citrate buffer, and 0.05 percent the antioxidant L-cysteine, Conclusion:The formula is reasonable in design and the injection is stable in quality. Key words: Potassium Sodium Dehydroandrographolide Succinate and Sodinm Chloride injection；related substances；Formula Optimization 炎琥宁(Potassium sodium drographo lide succinate) 来源于爵床科植物穿心莲的穿心莲内酯新型衍生物，化学名称为14-脱羟-11, 12-二脱氢穿心莲内酯-3, 19-二 作者简介：卢宏丽，山西省太原市人（1973，07-）， 琥珀酸半酯钾钠盐一水合物，临床适用于病 毒性肺炎和病毒性上呼吸道感染的治疗【1】，目前国内已上市的品种有注射用炎琥宁、炎琥宁氯化钠注射液，炎琥宁氯化钠注射液可 主管药师，主要从事医院制剂和新药开发研究。 以避免药物使用配制过程中引起的二次污染，但是，目前炎琥宁氯化钠注射液经常发 现有关物质不符合规定（≥5%），因此，对其处方及生产工艺进行严格筛选并考察样品的稳定性十分必要。 1 试药与仪器 1.1 试药 炎琥宁原料及对照品（湖北荷普药业有限公司，批号：080504；对照品由原料精制而得）；枸橼酸（江西国药有限责任公司，批准文号：国药准字H36020075）；L-半胱氨酸(天津天安药业股份有限公司；批准文号：国药准字H20054014)；氯化钠（北京双鹤药业股份有限公司；批准文号：H11020997）；氢氧化钠（天津市化学试剂三厂；分析纯）；甲醇（Fisher ChemAlert；色谱纯）；磷酸二氢钾（天津市博迪化工有限公司；分析纯）；磷酸（天津市化学试剂三厂；分析纯）；注射用水。 1.2 仪器 Waters-1525高效液相色谱仪，2487检测器，Brees色谱工作站(waters公司)；Diamonsil – C18色谱柱(迪马公司)；BS210S分析天平（Sartorius公司）；CRMDX-280高压灭菌锅（上海申安医疗器械厂）；Mettler toledo 320-S PH计（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。 2 实验方法 2.1 有关物质测定方法[2]及验证 色谱条件：色谱柱 Diamonsil – C18（200 mm × 4.6 mm , 5μm )；流动相: 0.05％磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节PH值至2.5左右）-甲醇（40︰60）；检测波长：251nm。 溶液的配制及测定：取炎琥宁氯化钠注射液适量，加流动相稀释成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相稀释成每1ml中含50μg的溶液，作为对照溶液；精密量取供试品溶液及对照溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，色谱图至主成分峰保留时间的2倍，量取供试品溶液色谱图中各杂质峰面积总和（扣除相对保留时间约小于0.29的辅料峰）与对照溶液色谱图中主成分峰面积，计算有关物质相对百分含量。 在此色谱条件下炎琥宁与其降解产物峰之间分离度大于1.5，专属性强（图1）。 2.2 含量测定方法[2] 色谱条件：同2.1项下有关物质测定方法下的色谱条件。 溶液的配制及测定：精密量取供试品适量(相当于炎琥宁10 mg)，置100 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取经减压干燥(以P2O5为干燥剂)12小时以上的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯对照品适量，精密称定，用流动相稀释成0.1 mg·mL-1的对照品溶液；精密量取供试品溶液及对照溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算含量。 2.3 制备工艺 按正交设计中试验号，取相对应的枸橼酸和L-半光氨酸及氯化钠0.9g，加注射用水约80ml溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调节溶液至相应的PH值，加0.07℅(w/v)的药用炭搅拌吸附20min，过滤脱炭；加0.2g炎琥宁搅拌溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调节至相应的PH值，加0.01℅(w/v)的药用炭搅拌吸附15 min，过滤，脱炭，加注射用水至100ml，灌装于100ml的输液瓶中，密封， 115℃灭菌30min。 3 正交设计 3.1因素-水平的选择 影响炎琥宁水溶液稳定的主要因素有PH值、温度、氧、金属离子等[3]，参照原处方及文献[4] ，选择了L25(53)正交表，因素-水平如下（表1）。 表1. 正交实验因素水平表 因素 水平 PH值 （A） L-半光氨酸浓度（B）％ 枸橼酸浓度（C）％ 1 5.5 0.01 0.02 2 6.0 0.05 0.04 3 6.2 0.10 0.10 4 6.5 0.15 0.20 5 7.0 0.20 0.40 2.4 实验结果分析方法 以有关物质相对百分含量和炎琥宁含量为指标，分别进行方差分析，并分析灭菌前后PH值变化量与灭菌前PH值、L-半光氨酸浓度、枸橼酸浓度之间的相关性。 4 结果 4.1实验结果 正交试验结果（表2） 4.2 方差分析结果 以有关物质相对百分含量和炎琥宁含量为指标的方差分析结果（表3、4） 表2. L25(53)正交实验表 试验号 PH值 （A） L-半光氨酸浓度（B） 枸橼酸浓度 （C） 空白 （D） 有关物质相对 百分含量（％） 含量（%） 灭菌后PH值 ΔPH值 1 1 1 1 2 4.38 95.21 4.77 0.73 2 1 2 2 3 3.79 95.77 4.71 0.79 3 1 3 3 4 3.98 96.12 4.72 0.78 4 1 4 4 5 1.08 98.28 4.72 0.78 5 1 5 5 1 3.98 95.67 4.69 0.81 6 2 1 2 3 3.94 95.54 5.24 0.76 7 2 2 3 4 3.80 96.11 5.17 0.83 8 2 3 4 5 4.05 95.37 5.16 0.84 9 2 4 5 1 3.99 95.49 5.13 0.87 10 2 5 1 2 3.98 96.03 5.13 0.87 11 3 1 3 4 3.26 96.31 5.31 0.89 12 3 2 4 5 2.54 97.11 5.32 0.88 13 3 3 5 1 2.97 96.25 5.29 0.91 14 3 4 1 2 2.71 97.22 5.38 0.82 15 3 5 2 3 2.72 96.98 5.32 0.88 16 4 1 4 5 3.71 95.89 5.58 0.92 17 4 2 5 1 3.59 95.94 6.35 0.15 18 4 3 1 2 3.42 96.27 6.40 0.10 19 4 4 2 3 3.97 96.02 6.46 0.04 20 4 5 3 4 4.74 94.29 6.50 0.00 21 5 1 5 1 9.03 90.19 6.34 0.66 22 5 2 1 2 5.23 94.15 6.96 0.04 23 5 3 2 3 5.83 93.77 7.00 0.00 24 5 4 3 4 8.43 91.17 7.08 -0.08 25 5 5 4 5 8.59 92.03 7.05 -0.05 表3. 以有关物质相对百分含量为指标的方差分析结果 变异来源 离均差平方和 自由度 均方 F值 P值 A 61.06 4 15.27 19.83 p＜0.01 B 4.37 4 1.09 1.41 p＞0.05 C 3.06 4 0.77 1.00 p＞0.05 SSe 3.06 4 0.77 F0.01(4, 5)=15.98 F0.05(4, 5)=6.39 表4. 以炎琥宁含量为指标的方差分析结果 变异来源 离均差平方和 自由度 均方 F值 P值 A 56.70 4 14.18 132.78 p＜0.01 B 1.08 4 0.27 2.53 p＞0.05 C 0.43 4 0.11 1.00 p＞0.05 SSe 0.43 4 0.11 F0.01(4, 5)=15.98 F0.05(4, 5)=6.39 4.3 相关性分析结果 灭菌前后PH值变化量与灭菌前PH值、L-半光氨酸浓度、枸橼酸浓度之间的相关性分析结果（图2）。 结果分析表明，炎琥宁氯化钠注射液制备过程中对有关物质和含量的影响因素一致，主要影响因素均为PH值（p＜0.01），其最佳PH值6.2～6.5，L-半光氨酸浓度、枸橼酸浓度为非主要因素（p＞0.05）；灭菌前后PH值变化量与灭菌前PH值、L-半光氨酸浓度、枸橼酸浓度之间无相关性。 根据分析结果选择了炎琥宁氯化钠注射液的处方：每100ml含炎琥宁0.2g，氯化钠0.9g，L-半光氨酸浓度0.05g，枸橼酸浓度0.04g；PH值须严格控制在6.2～6.5之内。采用该处方制备样品在经加速、室温留样稳定性、连续5次冻融试验考察，质量稳定。 5. 讨论 炎琥宁为穿心莲内酯与琥珀酸酐等反应而制得的半合成药物，其分子结构中存在桥形共轭结构，α、β不饱和内酯键，水溶液容易发生水解,导致产品含量下降、有关物质升高，国内关于炎琥宁的水解影响因素未见详细的相关报道。炎琥宁和穿琥宁母体结构相同，只是将穿琥宁分子结构中琥珀酸中的H+变成了Na+，文献报道【5】穿琥宁水解符合一级动力学反应，降解速率与穿琥宁的浓度、溶液离子强度无关；受缓冲液的浓度、溶液pH值以及温度的影响较显著。本实验结果显示，炎琥宁氯化钠注射液制备的主要影响因素为PH值，其最佳PH值为6.2～6.5，而缓冲液和抗氧剂浓度的影响并不显著，可能与大容量注射剂中缓冲盐和抗氧剂浓度使用范围过窄有关。 成品在灭菌后pH会有所下降，分析原因可能是由于受热后有酸性降解产物产生所致，个别样品灭菌后pH略有升高，可能是测定误差，灭菌前后PH值变化量与灭菌前PH值、 L-半光氨酸浓度、枸橼酸浓度之间无相关性的原因尚有待探讨。 参考文献： [1] 王有成，胡国华. 炎琥宁冻干粉针治疗小儿急性上呼吸道感染疗效观察[J]. 儿科药学杂志，2003；9(5)：39～40. [2] 国家食品药品监督管理局. 国家药品[Ｓ]. YBH09302006. 北京：2006. [3] 林丽琴，王金华，李维凤，等. 穿琥宁氯化钠注射液的工艺研究[J]. 天津药学，2004；16(2)：32～34. [4] 张婷，徐平声，李舟. 穿琥宁溶液的稳定性研究[J]. 中药新药与临床药理，200；18(2)：136～138. [5] 罗巍伟，贺英菊，王凌，等. 穿琥宁的水解动力学研究[J]. 四川大学学报(医学版)，2006；37(5)：794～797.