氧化樟脑注射液

氧化樟脑注射液对小鼠睡眠功能等影响的实验研究 焦 燕，杨晓春，张 问，杨世杰，李 红＊ （吉林大学白求恩医学院药理学系，吉林 长春 130021） 摘　要:目的:探讨氧化樟脑对小鼠睡眠功能和自主活动的影响。方法: ①腹腔注射氧化樟脑10min后,腹腔注射阈剂量的戊巴比妥钠（45mg/kg）,记录小鼠入睡时间和睡眠持续时间。②腹腔注射戊巴比妥钠（65mg/kg）, 待小鼠翻正反射消失后,腹腔注射氧化樟脑,记录小鼠睡眠时间。③小鼠腹腔注射氧化樟脑, 10min后放入YLS-1S多功能小鼠自主活动测定仪中,稳定2min后记录5min内小鼠自主活动次数。结果:①氧化樟脑能显著延长阈剂量戊巴比妥钠的小鼠的入睡时间并缩短睡眠持续时间。②氧化樟脑能显著缩短阈上剂量戊巴比妥钠小鼠的睡眠时间,与对照组比较，具有明显的统计学差异(P<0. 05或P<0. 01)。③氧化樟脑明显的增加了小鼠自主活动次数。结论:氧化樟脑能够延长小鼠入睡时间、缩短睡眠时间并增加小鼠的自主活动次数，提示具有催醒的作用。 关键词:氧化樟脑；戊巴比妥钠；睡眠；自主活动 Effect study of oxcamphor injection on mice’s sleep function and other function JIAO Yan,YANG Xiao-chun,ZHANG Wen,YANG Shi-jie,LI Hong (Dept of Pharmacology,Norman Bethune College of Medicine,Jinlin University,Changchun 130021,China) Abstract: Objective: It is to investigate the effect of oxcamphor injection on mice’s sleep function and spontaneous activity. METHODS: ①intraperitoneal injection of camphor oxidation after 10min, of intraperitoneal injection the threshold dose of pentobarbital sodium (45mg/kg), recorded the mice’s sleep latency and sleep duration. ② intraperitoneal injection of pentobarbital sodium (65mg/kg), until loss of righting reflex in mice after the intraperitoneal injection of oxcamphor, recorded sleep time in mice. ③Mice injedted intraperitoneally oxcamphor, 10min later,put them into the YLS-1S multi-function spontaneous activity tester, and made the mice adapted the new environment within 2min , after 5min, recorded the number of spontaneous activity in mice. Results: ① The oxcamphor can significantly prolonge the mice’s sleep latency and short sleep duration at threshold dose of pentobarbital sodium. ② Oxcamphor can significantly shorten sleeping time above the threshold dose of pentobarbital sodium in mice, compared with the control group, with a statistically significant difference (P <0. 05 or P <0. 01).③Oxcamphor can significantly increase the number of spontaneous activity in mice. Conclusion: The oxcamphor has this function that it can prolonge sleep latency，shorten sleep duration and increase the number of spontaneous activity in mice. Key words: oxcamphor;pentobarbital sodium; sleep; spontaneous activity 氧化樟脑可兴奋延脑呼吸中枢和血管运动中枢,也可兴奋大脑皮层。氧化樟脑还具有兴奋心脏的功能,对于衰弱的心脏,可使其心脏收缩加强,恢复心脏的节律,增加每分钟的排出量,从而达到尽快恢复全身正常循环的作用[1]。另外有研究表明，氧化樟脑在体内的活性与巴比妥类药物存在拮抗作用[2],因此本研究通过相关实验探讨氧化樟脑对小鼠睡眠时间和自主活动的影响,为其是否具有催醒作用提供实验室的理论依据。 1.实验材料 1.1​ 药品和试剂 氧化樟脑注射液，由长春大政药业科技有限公司提供，批号：100201；阳性对照药尼可刹米注射液，为上海禾丰制药有限公司生产，批号：100301；戊巴比妥钠Sigma公司产品,货号：P3761；生理盐水，长春豪邦药业有限公司,批号：10030209。 作者简介：焦燕，（1 9 8 5 -），女，在读硕士研究生，E-mail:jiaoyan1216@126.com; 李红，（1 9 5 8 -），女，医学硕士，高级实验师，主要从事分子药理学研究。通信作者，Tel：0431-85619799，E-mail: lhong@jlu.edu.cn. 1.2​ 动物 清洁级ICR健康小鼠，雌雄兼用，体重（20±2）g，由吉林大学白求恩医学院动物实验中心提供，质量合格证号：SCXK(吉)2007-0003。在对小鼠进行实验的前1d，将小鼠转移到实验室中，使其对测定的大环境有所适应，实验前分笼饲养，自由进食和饮水。每只小鼠在实验中只能使用一次。所用实验动物均放置于空调、声音和电磁屏蔽的房间内,温度(24±2) ℃、湿度(55±15) %。 1.3​ 仪器 YLS-1S多功能小鼠自主活动测定仪，山东省医学院科学院设备站研制； 万分之一电子天平，沈阳龙腾电子称量仪器有限公司研制，称量小鼠体重电子天平，神州华志科学仪器有限公司研制。 1.4 睡眠潜伏期和睡眠持续时间的计算 翻正反射是一种评价动物是否睡眠的可靠的实验方法[3,4]。实验动物注射戊巴比妥钠后,开始记录实验指标。指标记录方法如下:从注射戊巴比妥钠开始到翻正反射消失持续30s，这段时间为睡眠潜伏期;从翻正反射消失到翻正反射恢复,以小鼠连续三次翻正反射恢复为指标，这段时间称为睡眠持续时间[5,6]。 2.​ 实验方法 2.1 对戊巴比妥钠阈剂量小鼠睡眠功能的影响　选取50只ICR小鼠,雌雄各半,随机分成5组,即生理盐水阴性对照组, 氧化樟脑高、中、低剂量组（6.08mg/kg、3.04mg/kg、1.52mg/kg）；阳性对照尼可刹米组（0.076g/kg）。各组小鼠分别腹腔注射各组实验药品0.2ml/10g，记录给药时间。10min后腹腔注射戊巴比妥钠（45mg/kg）,给药容积0.2ml/10g，记录给药时间。确定小鼠处于入睡状态时记录相应的时间；当小鼠翻正反射连续三次恢复则确定为小鼠觉醒，记录翻正反射恢复的时间，计算各组小鼠的睡眠潜伏期和睡眠时间进行统计学处理。 2.2 氧化樟脑对小鼠催醒作用的试验[7] 选取50只ICR小鼠,雌雄各半,随机分成5组,即生理盐水阴性对照组, 氧化樟脑高、中、低剂量组（6.08mg/kg、3.04mg/kg、1.52mg/kg）；阳性对照尼可刹米组（0.076g/kg）。各组小鼠分别腹腔注射戊巴比妥钠（65mg/kg），给药容积为0.2ml/10g，确定小鼠为入睡状态后腹腔注射各组试验药品，给药容积为0.2ml/10g，待小鼠翻正反射恢复后记录相应的时间，计算小鼠的睡眠时间。 2.3 对小鼠自主活动的影响[8] 动物分组：实验前将小鼠放入YLS-1S多功能小鼠自主活动测定仪内，开动记录仪记录5min内活动次数，选择自主活动数100次左右的正常小鼠。然后根据自主活动次数将小鼠随机分配到各实验组，实验前各组小鼠的自主活动数无显著性差异。 实验分组：将符合条件的ICR小鼠50只，雌雄兼用，随机分为5组，每组10只：生理盐水阴性对照组；氧化樟脑高、中、低剂量组（6.08mg/kg、3.04mg/kg、1.52mg/kg）；阳性对照尼可刹米组（0.076g/kg）。各组小鼠分别腹腔注射各组实验药品0.2ml/10g，10min后放入YLS-1S多功能小鼠自主活动测定仪内，使其在测定仪器内适应2min，然后启动记录仪记录5min内的活动次数。 2.4　统计学处理　实验数据均以均值±差（ ±s）表示,用Excel统计工具对组间差异采用方差分析,用t-Test检验,以P<0.05为有显著差异性。 3.​ 结果 3.1对阈剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠功能的影响 实验结果表明，氧化樟脑各剂量组与对照组比较睡眠潜伏期均延长，睡眠时间均缩短。氧化樟脑高、中、低剂量组睡眠潜伏期和睡眠时间与对照组比较，均有统计学差异（P﹤0.05），且氧化樟脑低剂量组与对照组比较，小鼠的睡眠时间明显缩短，有明显统计学差异（P﹤0.01），见表1，阳性对照尼可刹米组与对照组比较未见统计学差异。 表1 氧化樟脑对阈剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响( ±s，n=10) 组别 剂量 睡眠潜伏期（min） 睡眠时间（min） 生 理 盐 水 组 0.2ml/10g 6.23±1.97 35.54±11.22 氧化樟脑低剂量组 1.52mg/kg 9.70±4.38＊ 18.06±9.40＊ 氧化樟脑中剂量组 3.04mg/kg 10.26±4.07＊ 17.71±5.40＊ 氧化樟脑高剂量组 6.08mg/kg 11.65±5.64＊ 10.57±4.70＊＊ 尼 可 刹 米 组 0.076g/kg 7.28±1.60 33.28±9.30 注：与生理盐水组比较，＊P﹤0.05.，＊＊P﹤0.01 3.2对小鼠催醒作用的试验 由表2可知，氧化樟脑各组和尼可刹米阳性药对照组与生理盐水对照组比较，均有显著差异(P<0. 05或P<0. 01)，表明氧化樟脑能够缩短翻正反射消失的持续时间，即有催醒作用。阳性对照尼可刹米组对小鼠的催醒作用与氧化樟脑低剂量组效果接近，提示氧化樟脑的催醒作用可能强于尼可刹米。 表2 氧化樟脑对小鼠催醒试验的结果( ±s，n=10) 组别 剂量 睡眠时间（min） 生 理 盐 水 组 0.2ml/10g 48.96±14.09 氧化樟脑低剂量组 1.52mg/kg 32.18±14.40＊ 氧化樟脑中剂量组 3.04mg/kg 31.20±14.83＊ 氧化樟脑高剂量组 6.08mg/kg 27.05±8.46＊＊ 尼 可 刹 米 组 0.076g/kg 32.90±14.12＊ 注：与生理盐水组比较，＊P﹤0.05.，＊＊P﹤0.01 3.3对小鼠自主活动的影响 由表3可知，氧化樟脑高、中、低不同剂量的药物组均能使小鼠的自主活动增加，与生理盐水对照组比较，均有显著性差异(P<0. 05或P<0. 01)。 表3　氧化樟脑对小鼠自主活动次数的影响( ±s, n=10) 组别 剂量 活动次数（次/5min) 生 理 盐 水 组 0.2ml/10g 129.63±24.34 氧化樟脑低剂量组 1.52mg/kg 186.57±39.42＊＊ 氧化樟脑中剂量组 3.04mg/kg 162±25.62＊ 氧化樟脑高剂量组 6.08mg/kg 170.22±31.12＊＊ 尼 可 刹 米 组 0.076g/kg 163.56±27.88＊ 注：与生理盐水组比较，＊P﹤0.05.，＊＊P﹤0.01 4讨论 小鼠自主活动实验是药理学研究中的常用方法之一,在评价药物对中枢神经系统的影响方面有重要意义。动物的自主活动情况反映其中枢神经系统的功能状态,兴奋时活动次数增加,抑制时活动次数减少,所以小鼠自主活动实验是评价中枢神经系统兴奋状态的一项重要指标[9]。本实验的小鼠自主活动结果显示，氧化樟脑各组以及阳性药尼可刹米组小鼠的活动次数与生理盐水阴性对照组比较有显著差异(P<0. 05或P<0. 01)。根据实验结果可以反映出氧化樟脑和尼可刹米都有兴奋中枢的作用。 戊巴比妥钠主要由肝微粒体细胞色素P450(cytochrome P450, CYP)代谢灭活,对其睡眠功能的影响可以反映对CYP的作用[10],但具有中枢抑制或兴奋作用的药物也可能延长或缩短其睡眠眠时间。本研究观察了氧化樟脑对阈剂量和阈上剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响。结果显示，氧化樟脑注射液能够显著延长阈剂量戊巴比妥钠小鼠的入睡时间，缩短睡眠持续时间；同时还发现，它可以显著缩短阈上剂量的戊巴比妥钠所致小鼠翻正反射消失的持续时间，提示氧化樟脑对CYP有兴奋作用，由于CYP的兴奋，致使戊巴比妥钠在体内的代谢灭活加快，血药浓度降低变快，呈现睡眠时间显著缩短。尼可刹米对呼吸抑制的逆转作用较为缓和，这可能是尼可刹米作用于阈剂量戊巴比妥钠小鼠未见显著差异的原因，同时该药对呼吸中枢虽有直接的兴奋作用, 能提高通气量及血氧饱和度[11] , 但无外周兴奋作用。该组用药后意识、呼吸虽能在短时间内恢复, 但比氧化樟脑起效缓慢。由于氧化樟脑对中枢和CYP均有兴奋作用，提示其对应用麻醉药的患者可能具有催醒作用，为临床应用提供实验室的理论依据。 参 考 文 献 [1] 张淑会,张玉芹,蔡明,等.犬、猫有机氟化物中毒的诊治[J].山东畜牧兽医,2004,(3):46-47. 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