常用pH缓冲溶液的配制和pH值

常用pH缓冲溶液的配制和pH值 常用pH缓冲溶液的配制和pH值  常用pH缓冲溶液的配制和pH值 文章来自： 医药园  (http://www.biodrug.cn)   整理：zfg 序号  溶液名称  配制方法  pH值  1  氯化钾-盐酸  13.0 ml 0.2 mol/L HCl 与25.0 ml 0.2 mol/L  KCl混合均匀后，加水稀释至100 ml  1.7  2  氨基乙酸-盐酸  在500 ml 水中溶解氨基乙酸150 g，加480 ml浓盐酸，再加水稀释至1L  2.3   3  一氯乙酸-氢氧化钠  在200 ml 水中溶解2 g 一氯乙酸后，加40 g  NaOH，溶解完全后再加水稀释至1 L  2.8   4  邻苯二甲酸氢钾-盐酸  把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0 ml 0.1 mol/L HCl混合均匀，加水稀释至100 ml  3.6   5  邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠  把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5  ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml  4.8   6  六亚甲基四胺-盐酸  在200 ml水中溶解六亚甲基四胺40 g，加浓HCl 10 ml，再加水稀释至1 L  5.4   7  磷酸二氢钾-氢氧化钠  把25.0 ml 0.2 mol/L的磷酸二氢钾与23.6 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml  6.8   8  硼酸-氯化钾-氢氧化钠  把25.0 ml 0.2 mol/L的硼酸-氯化钾与4.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml  8.0   9  氯化铵-氨水  把0.1 mol/L 氯化铵与0.1 mol/L 氨水以2：1比例混合均匀  9.1   10  硼酸-氯化钾-氢氧化钠  把25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与43.9 ml  0.1 mol/L  NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml  10.0   11  氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠  把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠与51.0 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀  11.6   12  磷酸氢二钠-氢氧化钠  把 50.0 ml  0.05 mol/L Na2HPO4与26.9 ml  0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml  12.0   13  氯化钾-氢氧化钠  把 25.0 ml 0.2 mol/L KCl与66.0 ml 0.2 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml  13.0      一、常用溶液的配制（文章来自： 医药园  (http://www.biodrug.cn)   整理：zfg）       （一）溶液配制 1．药品要有较好的质量  试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。 2．药品称量要精确。 3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。 ４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。 （二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液 1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。 2．１/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。 3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。 附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升） pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4  5.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.4  5.9 9.9 90.1 7.2 72.0 28.0  6.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.2  6.1 15.3 84.7 7.3 80.8 19.2  6.2 18.6 81.4 7.5 84.1 15.9  6.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.0  6.4 26.7 73.3 7.7 89.4 10.6  6.5 31.8 68.2 7.8 91.5 8.5  6.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.8  6.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.3  6.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.2  6.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.0  7.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0  （三）0.15Mol/L PB液 附表2  0.15Mol/LPB液配制法 pH 0.15Mol/L Na2HPO4（ml） 0.15Mol/L NaH2PO4（ml）  6.4 26.5 73.5  6.6 37.5 62.5  6.8 49.0 51.0  7.0 61.0 39.0  7.2 72.0 28.0  7.4 81.0 19.0  7.6 87.0 13.0  Na2HPO4·2H2O分子量=175.05   0.15Mol/L溶液含26.7g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量=358.22  0.15Mol/L溶液含53.7g/L。 NaH2PO4·H2O分子量=138.00    0.15Mol/L溶液含20.7g/L。 NaH2PO4·2H2O分子量=156.03   0.15Mol/L溶液含23.4g/L。 （四）0.2Mol/L PB缓冲液 附表3  0.2mol/L PB缓冲液配制法 pH 0.2 Mol/L Na2HPO4（ml） 0.2Mol/L NaH2PO4（ml）  5.8 8.0 92.0  6.0 12.3 87.7  6.2 18.5 81.5  6.4 26.5 73.5  6.6 37.5 62.5  6.8 49.0 51.0  7.0 61.0 39.0  7.2 72.0 28.0  7.4 81.0 19.0  7.6 87.0 13.0  7.8 91.5 8.5  8.0 94.7 5.3      0.2Mol/L Na2HPO4·2 H2O溶液35.61g/L             Na2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L     0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/L            NaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L 欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85％的NaCl溶液即可。 （五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS） （0.15Mol/L PH 7.2）   NaCl                          8.0g   KCl                           0.2g   Na2HPO4                      1.15g  （如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）   KH2PO4                        0.2g 将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。 （六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）  文章来自： 医药园  (http://www.biodrug.cn)   整理：zfg 1．硼酸（Ｈ3BO3） 0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。 2．硼砂（Na2B4O7） 0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。 附表4  不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法 pH 0.05Mol/L硼砂（ml） 0.2Mol/L硼酸（ml） pH 0.05Mol/L硼砂（ml） 0.2Mol/L硼酸（ml）  7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.5  7.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.5  7.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.0  8.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0  （七）巴比妥缓冲液 1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液    巴比妥钠                 47.6g    蒸馏水                   3 000ml    1.17N  HCl               55.0ml   （1.17 N  HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水） ⑴ 将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。 ⑵ 加1.17 N  HCl 55ml。 ⑶ 用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4 265ml。     2．pH8.4  0.06Mol/L巴比妥缓冲液         巴比妥                   1.84g         巴比妥钠                 10.30g         加蒸馏水至               1 000.00ml     3．pH8.6  0.06Mol/L巴比妥缓冲液         巴比妥                   1.66g         巴比妥钠                 12.76g         加蒸馏水                 1 000.00ml （八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液  见表附表5 附表5  0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法 pH 0.2Mol/L Tris（ml） 0.1Mol/L HCl（ml） pH 0.2Mol/L Tris（ml） 0.1Mol/L HCl（ml）  23℃ 37℃ 23℃ 37℃  9.10 8.95 25 5 8.06 7.90 25 27.5  8.92 8.76 25 7.5 7.96 7.82 25 30.0  8.75 8.60 25 10.5 7.87 7.73 25 32.5  8.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.0  8.50 8.37 25 15.5 7.66 7.52 25 37.5  8.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.0  8.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5  （九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液） 不同pH，0.05Mol/L 25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表） 附表6  Tris—HCl缓冲液配制法     pH 0.2Mol/L Tris(ml) 0.1NHCl (ml)     pH 0.2Mol/L Tris(ml) 0.1NHCl (ml)  23℃ 37℃ 23℃ 37℃  9.10 8.96 25 5 8.05 7.90 25 27.5  8.92 8.78 25 7.5 7.96 7.82 25 30.0  8.74 8.60 25 10.0 7.87 7.73 25 32.5  8.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.0  8.50 8.37 25 15.0 7.66 7.52 25 37.5  8.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.0  8.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5  8.23 8.10 25 22.5 7.20 7.05 25 45.0  8.14 8.00 25 25.0     25    三羟甲基氨基甲烷（Tris）  分子量=121.14  0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。  0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1 000ml。 （十）0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液  NaHCO3                 3.70g  Na2CO3                  0.60g 溶于600.00ml蒸馏水中即得。 不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。 （十一）甘油磷酸缓冲液 1．配制pH8.0磷酸缓冲液    0.1Mol/L Na2HPO4       94.50ml    0.1N NaH2PO4           5.50ml    混合即可 2．9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。  用途：用于免疫荧光试验。 （十二）Hank’s液 1．贮存液    NaCl                   80.00g    KCl                    4.00g    Na2HPO4·12 H2O        1.52g    KH2PO4                 0.60g    葡萄糖                  4.00g    0.4％酚红液             50.00ml    双馏水加至             100.00ml  115℃高压灭菌15min，冰冻保存。 2．工作液    贮存液                 1份    双馏水                 9份  115℃高压灭菌15min。临用时用灭菌的5.6％NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。 （十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent） 配方1：氯化汞             6.0g        碘化钾              12.4g        20％NaOH           30ml        加蒸馏水至          100ml 配方2：碘化汞              11.5g        碘化钾               8g        蒸馏水               50ml     （完全溶解后）过滤，加20％NaOH 50ml。   用途：检测溶液中氨离子。 （十四）阿氏（Alsever’s）液        葡萄糖               2.05g        柠檬酸钠             0.80g        氯化钠              0.42g        蒸馏水              100ml   溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。 （十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）        青霉素（40万U）    5支        链霉素（200万μg）  1支   分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。   临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。 （十六）洗液（清洁液） 配方1：重铬酸钾            150g         蒸馏水             300ml         浓硫酸             3 000ml 将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。 盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。 洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。 配方2：浓硫酸              50%         蒸馏水              50%         重铬酸钾            5% 此为中等强度洗液。 配方3：重铬酸钾             100g         蒸馏水              1 000ml         加热溶解，冷却后缓慢加入  工业硫酸             100ml 此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。     二、犊牛血清的制备   选择健康犊牛，一般为初生至六个月龄，最好是刚出生尚未吸乳的公犊牛，采血前12h不予喂饲，仅予水喝。采血时采用颈动脉，动脉插管，乳胶管、盛血容器均应洗净灭菌。将采血筒中放入少量Hank’s液，将胶管连接至玻璃管（弯）放入瓶口，然后瓶口包以硫酸纸、白布和普通纸，系紧。插管也用硫酸纸包扎系好。 采血前将犊牛固定，最好放在手术台或固定架上固定好头部和四肢，局部剪毛消毒，切开，剥离颈动脉，止血钳夹好，消毒，切开动脉管壁，插入插管，另一助手轻摇采血筒中的Hank’s液以湿润瓶壁，这样有利于凝血，也有利于血凝块与瓶壁的分离。这时术者即可放血。每个采血筒内采适量不宜超过总容量的1／3，装的过多则出血清少。采血时还须注意动脉插管口不宜太细，放血速度也不宜过快，过快过慢均可引起溶血。 盛血的采血筒应置室温（天热时）或温箱中，温室（天冷时）中，静置4h以上，待血液凝固后放入4℃冰箱或冷库中过夜。然后在无菌间，小心（不要摇晃）倒出或用虹吸法吸出上清液，如混有红血球，则将这部分血清以2 000r/min离心10min～15min注意无菌操作，收集上清（略有溶血的血清也可应用）。一头犊牛可采血1 500ml～3500ml，约能分离出一半血清。 血清分离后，置56℃水浴中灭活30min以破坏补体和某些传染的病毒（也可以不灭活）。灭活后可进行分装，分装后需作菌检。菌检结果如有污染，可用赛世滤器过滤。 有的材料报道，有的血清不灭活要比灭活的血清效果好。 除近期要用的血清可置4℃保存外，其余放低温冰箱中保存。 最好采用3～5头犊牛血清先分别灭活，菌检后再混合、分装、保存。混合血清可以避免个别犊牛具有抑制细胞生长的物质或缺少某些生长因子的缺陷。 文章来自： 医药园  (http://www.biodrug.cn)   整理：zfg     三、常用化合物的分子量及当量   附表7  常用化合物的分子量及当量 化合物 分子式 分子量 当量  盐酸 HCl 36.46 36.46  氢氧化钠 NaOH 40.00 40.00  氢氧化钾 KOH 56.11 56.11  草酸 H2C2O4 90.04 45.02  氯化钠 NaCl 58.44 58.44  氯化钾 KCl 74.56 74.56  硫酸 H2SO4 98.08 49.04  醋酸 CH3COOH 60.05 60.05  磷酸 H3PO4 98.00 32.67  磷酸二氢钠 NaH2PO4 119.98    磷酸氢二钠 Na2HPO4 141.96    磷酸二氢钾 KH2PO4 136.09    磷酸氢二钾 K2HPO4 174.18    二乙胺四乙酸二钠（EDTA—Na2） C10H14N2O8Na2 372.24 186.12  硝酸 HNO3 63.01 63.01  碘 I2 253.81 126.90  碘化钾 KI 166.01 166.01  硼酸 H3BO3 61.83 20.61  碳酸氢钠 NaHCO3 84.01 84.01  碳酸钠 Na2CO3 105.99 53.00  硼砂 Na2B4O7 381.43