急性创伤患者早期中性粒细胞热休克蛋白72的表达意义

!论著! 急性创伤患者早期中性粒细胞热休克蛋白 "#的达意义 胡丹 曲彦 陈富强 罗兵 $摘要% 目的 探讨急性创伤患者应激早期各时间段中性粒细胞中热休克蛋白 "#&’()"#*含量及其编 码基因表达与患者预后的相关性+ 随机选取收入重症监护治疗病房的急性生理学与慢性健康状况, &-)-.’/,*评分012分的患者 34例5分离创伤后 46178#697和 "61:7的中性粒细胞+应用免疫组化 技术检测 ’()"#的蛋白表达5半定量逆转录 聚合酶链反应&;< ).;*检测 ’()"#=;>-表达水平5同时 记录患者 #个月的存活率+结果 ’()"#在急性应激后表达明显增强5表达高峰在 #6975存活组 ’()"#的 水平较死亡组明显升高+结论 ’()"#的蛋白和基因水平表达高峰在急性创伤后 #6975其含量及表达与急 性创伤患者 #个月存活率存在相关性+ $关键词% 急性创伤? 中性粒细胞? 热休克蛋白 "#? 存活率 @ABCDEEFGHGIJDKLEJGMNBCGLDFHOPFHQDRNGMSLDEICGTBKLFDHLEUFLJKMRLDLCKRTKKHVFLECDQKLFGHEJFBUFLJ ERCWFWKQ XYZ[\]5 Y^_[\5‘Xabcd ef[\g5hYijf\gk]l‘Ymnopd\fqfr[sXturfv[stw f^\gx[t5 f^\gx[tyzz{||5}n[\xt\g5‘nf\[ ‘t~~ourt\xf\g[dvnt~! Y^_[\ $"#ELCKML% $#%DMLFWD <&7’(’)=*+’(,’’-.)’//*&+&0,’1(/,&23.)&(’*+"#&’()"#**+4’53&26(’/ &0.1(*’+(/7*(,125(’()15=151+7’81451(’*(/)’41(*&+/,*.7*(,/5)8*814k9DLJGVE <,*)(6125(’()15=1 .1(*’+(/7*(,125(’.,6/*&4&:61+72,)&+*2,’14(,’81451(*&+, &-)-.’/,*0127’)’*+2457’71//(576 /5;<’2(/k=4&&7/1=.4’/7’)’/’)*1446&;(1*+’71((,)’’(*=’.&*+(/!716/4 15716/# 91+7716/ " 1:10(’)(,’()15=1k/-.)’//*&+&0’()"#71/1//’//’77*(,*==5+&,*/(&2,’=*/()651+7(,’’-.)’//*&+ &0’()"#=;>- 71/1//’//’77*(,/’=* >51+(*0*’7)’8’)/’()1+/2)*.(*&+ .&46=’)1/’2,1*+)’12(*&+ &;< ).;*51+7(,’)’41(*&+/,*.;’(7’’+(,’*)4’8’4/1+7(,’/5)8*814)1(’&/5)8*814.’)*&7?#=&+(,/*71/ 1+146@’7kADERQLE <,’’-.)’//*&+&0’()"#71//*:+*0*21+(46’+,1+2’7&+.&/(()15=1716/# 9k<,’4’8’4/ &0’()"#*+(,’/5)8*8&):)&5./7’)’,*:,’)(,1+(,1(*++&+ /5)8*8&)/kBGHMQREFGH <,’/(576/5::’/(/ (,1(125(’()15=121+4’17(&1=1)3’7’4’81(*&+&0’()"#51+7*(/.’134’8’41..’1)/&+716/# 957,*2, =*:,(;’2&))’41(’77*(,# =&+(,/5)8*814&0(,’1004*2(’7.1(*’+(/k $CDSUGCVE% 125(’()15=1? 4’53&26(’? ,’1(/,&23.)&(’*+"#? /5)8*814)1(’ 基金项目!山东省青岛市科技局科技计划项目&43 # >D 1E 3* 作者单位!#99411 青岛市市立医院F.G&胡丹5曲彦*5麻醉科&陈 富强*?青岛大学医学院分子生物学教研室&罗兵* 作者简介!胡丹&1H"1 *5女&满族*5辽宁省沈阳市人5医学硕士5 主治医师+ 热休克蛋白&,’1(/,&23.)&(’*+5’()*是生物 体在不利环境下产生的一种非特异性蛋白质产物5 其结构具有高度的保守性+各种应激因素诱导 ’() 合成后5机体耐热8耐低温8抗感染以及抗毒素等相 应适应能力增强+’()作为机体的自我保护机制参 与应激反应5在保护细胞免受各种应激损害的机体 自我保护机制中5扮演了一个重要角色+本研究中收 集 34例重症监护治疗病房&F.G*患者的外周血标 本5检测急性创伤早期各时间段中性粒细胞 ’()"# 及其编码基因的表达5旨在探讨 ’()"#水平与急性 创伤患者存活率的关系+ I 资料与方法 IkI 病例选择!随机选取 #443年 11月J#44:年 E月收住本院外科 F.G的脑外伤8腹部闭合伤或开 放伤8胸腹联合伤8多发性骨折以及大手术后患者 34例?入住 F.G后急性生理学与慢性健康状况, &-)-.’/,*评分均012分?男 #4例5女 14例?年 龄 1262:岁5平均 EEKH岁+根据 -)-.’/,评分 又分为低评分组&LE4分*和高评分组&0E4分*?同 时根据预后分为存活组和死亡组+ IkP 实验方法 IkPkI 血标本处理!采急性创伤后 46178#697 和 "61:7&分别定义为第 18#和 3期*患者外周静 脉血5用乙二胺四乙酸&/M<-*抗凝5室温下放置 34=*++取沉淀后上部血浆5用 )’)2&44试剂分离中 性粒细胞5制备细胞涂片5用免疫组化方法检测5余 下用 <;F@&4试剂提取中性粒细胞的总 ;>-5均于 #4N下保存待用+ IkPkP 半定量逆转录 聚合酶链反应&;< ).;* 检测 ’()"#编码基因的表达!用 <;F@&4试剂提取 中性粒细胞总 ;>-5取 1O:;>-参照逆转录试剂 !HH#!中国危重病急救医学 #44E年 E月第 1"卷第 E期 .,*+.)*(.1)’P’75P16#44E5Q&4k1"5>&KE 万方数据 盒!"#$%&’(公司)要求的标准条件合成 *+,-作 为 "./反应的模板0根据 12"34全基因序列 特异性引物0引物序列如下5"6578.--.999.: 9.9-..;9--.- <8="4578..;.;.9...: ;.9;-.-..;99-; <80用磷酸甘油醛脱氢酶 !9-"+1)作为内参>与特异性引物在同一体系中 进行扩增0"./产物用质量分数为 4?的琼脂凝胶 电泳>用凝胶成像系统测定扩增条带的吸光度值>用 目的基因与内参照基因吸光度的比值表示目的基因 的相对表达水平0 @ABAC 免疫组化检测5采用 ,&$D(#E&#F公司鼠 抗人 12"34单克隆抗体和北京中山生物技术有限 公司的免疫组化试剂盒检测中性粒细胞 12"34表 达情况0根据阳性细胞数量和强度将检测标本分为 不表达G低表达和高表达>由 <个有经验的读片专家 分别读片>取其平均值0 @AC 预后5观察 4个月后患者的存活和死亡情况0 @AH 统计学处理5结果以均数I标准差!JIK)表 示>实验资料应用2"2266L7统计软件包进行处理> 计量资料用 M检验和方差分析>计数资料用 N4检 验>OPQLQ7为差异有统计学意义0 B 结 果 BA@ 一般情况!表 6)5平均 TQ岁 以上者 3例=高评分组 6V例>平均 3VL7分>TQ岁以 上者 66例0年龄WTQ岁者 6U例>PTQ岁者 64例0 TQ岁以上者死亡 U例>占总例数的 4TL3?=TQ岁以 下者死亡 X例>占 6表 4)5急性创伤患者在整个观察期间 12"34表达水平 有不同程度增强>第 4期 12"34%/,-与第 6期G 第 <期比较差异均有显著性!O6jQLQQQ4和 O4j QLQQ46)>第 6期与第 <期比较差异无显著性!Oj QLXTQQ)>说明其表达高峰在 4kTl0与死亡组比 较>存活组12"34%/,-表达水平较高>第 4期和 第 <期差异有显著性!O6jQLQQVQ>O4jQLQXUQ)> 第 6期差异无显著性!OjQL6Q3U)0高评分组与低 评分组 <期间比较差异无显著性!O均mQLQ7)0 BAC 免疫组化结果分析!表 <)5大部分患者在 4k Tl的细胞涂片中可观察到较多的阳性细胞且着色 相对较深>Qk6l和 3k6Xl大部分为弱阳性或是 阴性>个别病例在 3k6Xl也出现了强阳性表达> <组间比较差异有显著性!OjQLQXQQ)0进一步验证 了急性创伤早期中性粒细胞中 12"34蛋白在不同 时期表达强弱不同>创伤后 4kTl是其表达高峰0 注56k6T5患者=635+,-D(#E&# 图 @ 半定量 n_o检测中性粒细胞中 pqnrBstu的扩增 v‘wxy^ @ q^z‘ {x[ad‘d[d‘|^ n_o[a[]}h‘hefpqnrB bstu[zg]‘f‘b[d‘ea‘a]^x~eb}d^ 表 B pqnrB编码基因表达的动态变化及相关因素!!I") Z[\]^B #^ |^]hdy^acefpqnrB[ac y^][d^cf[bdeyh!!I") 组别 例数!例) 第 6期!Qk6l) 第 4期!4kTl) 第 <期!3k6Xl) 存活组 6U 6A6QIQAX6 6ATVIQA7T$ 6A44IQAXX% 死亡组 64 QAU3IQA(OjQLXTQQ=与第 <期比 较5’OjQLQQ46 表 C CY例患者中性粒细胞中 pqnrB蛋白表达的比较 Z[\]^C _ezg[y‘heaefpqnrBgyed^‘a )^gy^hh‘ea ‘a]^x~eb}d^h*‘d+‘ag^y‘ech[fd^y[bxd^dy[xz[ 例 分期 12"34阴性 12"34阳性 12"34强阳性 第 6期!Qk 6l) 6V U < 第 4期!4k Tl) U 6X U 第 <期!3k6Xl) 63 V X BAH 预后与 -"-.1RS评分!表 X)5存活与死亡 两组中>低评分与高评分比较>差异有显著性!,j TLV6OPQLQ6)0 表 H 存活与死亡两组 unu_p-.评分的关系 Z[\]^H o^][d‘eah+‘gefunu_p-. hbey^ \^d*^ a^ hxy|‘|ey[acaea hxy|‘|ey 例 组别 -"-.1RS评分 低评分 高评分 总计 存活组 6Q U 6U 死亡组 6 66 64 总计 66 6V D(44QQ7>5$6A63>,$L7 万方数据 ! 讨 论 本研究结果显示"#$%&’蛋白和基因水平的表 达高峰在急性创伤后 ’()*"其表达强弱与创伤后 ’个月生存率具有明显的相关性"即表达相对增强" 创伤后存活率越高+提示#$%&’蛋白和基因的检测 可作为判断急性创伤患者预后的客观指标+ 哺乳类动物 #$%&,按表达情况可分为结构型 #$%&,-#$%&./和诱导型 #$%&,-#$%&’/+正常细 胞可表达 #$%&."应激情况下略增加0#$%&’仅出 现于应激状态下的炎性细胞或损伤的组织细胞123+ 动物实验表明"预先增高的 #$%表达能够减轻小鼠 由中性粒细胞介导的肺再灌注损伤"#$%被认为可 以与易化蛋白结合"稳定新形成的蛋白并且修复破 坏的蛋白123+缺血预适应兔的心肌可诱导心肌细胞 #$%&’的合成增加"且一氧化氮合酶-45$/可能参 与了 #$%&’的表达1’3+67897:;等1.3报道了在创伤 前提高 #$%表达可以降低脓毒血症实验鼠的死亡 率+<=>?等1@3研究认为"#$%&’的预表达增强可阻 断成人内皮细胞由激活的中性粒细胞所介导的坏 死+因而认为 #$%A表达增强可保护细胞免于创伤 损害+#=AB7?CDB7等1E3研究证实"在严重创伤急性 期"中性粒细胞 #$%A表达增高"可有效调节中性粒 细胞的功能"有利于机体恢复+机体遭受损害后"在 不同组织中都可产生应激反应"血液循环中的细胞 是惟一可以从机体稳定获得的细胞+严重创伤后" 中性粒细胞在宿主防御及系统炎性反应机制中占有 重要地位"因此本研究选择检测中性粒细胞中的 #$%&’表达情况来反映机体系统的应激反应状态+ 以往的大量动物实验表明"急性创伤后动物 -以鼠为主/的 #$%&’表达增强"并能保护创伤后的 血管和肝脏功能"并且 #$%&’表达高峰在创伤后 .(&’F7>1)G3+在急性创伤患者的 #$%&’表达如 何"与预后是否存在相关性"国内外报道较少+本研 究结果显示H急性创伤后患者的 #$%&’表达增强" 并且在创伤后 ’()*有明显的表达高峰"与 ,(2* 和&(2@*比较差异均有显著性0创伤后 &(2@*与 ,(2*比较差异也有显著性"推测个别病例表达高 峰延迟-本研究中有 @例/可能与新出现应激因素有 关+IDIC:J:K等1L3发现正常鼠在皮肤创伤’@F7> 炎性细胞中 #$%&’的表达达高峰"而糖尿病鼠延迟 到第 .*"因此认为"糖尿病鼠 #$%&,的表达延迟与 其对炎症反应的能力受损有关"并且这种延迟可能 对糖尿病鼠受伤创口的愈合有利+本研究中延迟表 达的 @例患者中有 ’例同时患有糖尿病+生存组与 死亡组在 ’()*和 &(2@*的表达水平都有差异" 其中 ’()*较 &(2@*更为明显"而 ,(2*两组间 则无差异+因此判断预后选取急性创伤后 ’()*检 测 #$%&’水平较好+重症患者 M%MN#OP评分高 低可作为病情轻重的一个指标"存活与死亡两组低Q 高评分患者间比较差异明显"提示高评分组较低评 分组死亡风险明显增加+ 综上所述"已有证据表明"胃肠外给予谷氨酰胺 可以缩短危重患者住院时间和降低病死率+$DB=:J9 等12,3研究被注射内毒素羊的心肌细胞"认为胃肠外 给予谷氨酰胺可以使其#$%&’表达增强+因此我们 设想"对于检测结果相对较低者可以给予一些干预 性治疗"至于具体作用机制及

方案

气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载

"需进一步探讨+ 本研究结果表明"创伤后 ’()*是急性创伤患者 #$%&’和编码基因表达的高峰期"#$%&’的表达水 平相对越高"提示患者存活的可能性越大+#$%&’检 测可以作为判断预后的预警指标+ 参考文献H 2 R:;C?B=>SM"TU9J>=>AVK6T"W7XYM*:9>9:?7D:9?CZ=J7;>;[ =*:9>=Z=>*;:J7DB9=JAB;DV\:;J97>1]3Y]$C:?69A"2LL)").H LG 2,@Y ’ 郑斌"党瑜华"陈魁Y一氧化氮合酶在缺血预适应诱导第二心肌保 护窗口中的作用1]3Y中国危重病急救医学"’,,2"2.HELG ),,Y . 67897:;$%"^ 7ZZ=:]"X;_>9K‘%"9J=ZY$;*7CF=:A9>7J97>*CD9A B9=JAB;DV\:;J97> &’V7Z;*=ZJ;>9a\:9AA7;>7>JB9ZC>?A=>* \:;J9DJA:=J=?=7>AJA9\A7A1]3YN7:DN=:9I9*"2LL@"’’HL’’ L’LY @ <=>?]#"69*F;>*#%"<=JA;>6< ‘"9J=ZYb>*CDJ7;>;[B9=J AB;DV\:;J97>&’\:9U9>JA>9CJ:;\B7Z F9*7=J9*BCF=>9>*;JB9c Z7=ZD9ZZ>9D:;A7A1]3YM:DB$C:?"2LLE"2.,H2’), 2’))Y E #=AB7?CDB74"5?C:=#"S=>=V=#"9J=ZYO>B=>D9*9a\:9AA7;>;[ B9=JAB;DV\:;J97>A7>Z9CV;DKJ9A[:;F J:=CF=\=J79>JA1]3Y ]S:=CF="’,,2"E,H2,’ 2&2Y ) I7dCAB7F=e"<=>?%"]=::=:XY%:97>*CDJ7;>;[B9=JAB;DV \:;J97>A\:;J9DJAD=:*7=D=>*B9\=J7D[C>DJ7;>A[;ZZ;_7>?J:=CF= =>*B9F;::B=?91]3YMF]%BKA7;Z69?CZb>J9?:N;F\%BKA7;Z" ’,,,"’&GH6.E’ .ELY & e=F=AB7J=4"#;AB7*=$"47AB7*=IYS7F9D;C:A9;[J;Z9:=>D9J; 7ADB9F7= :9\9:[CA7;>7>fC:K=>*7>*CDJ7;>;[B9=JAB;DV\:;J97> &’8KB9=JAJ:9AA7>JB9:=JB9=:J1]3Y]I;ZN9ZZN=:*7;Z"2LL&" ’LH2G2E 2G’2Y G e=F=AB7J=4"#;AB7*=$"47AB7*=I"9J=ZY#9=JAB;DV 7>*CD9* F=>?=>9A9AC\9:;a7*9*7AFCJ=A99>B=>D9AJB9J;Z9:=>D9;[ D=:*7=DFK;DKJ9AJ;BK\;a7= :9;aK?9>=J7;>7>fC:K1]3Y]I;Z N9ZZN=:*7;Z"2LL&"’LH2G,E 2G2.Y L IDIC:J:KMW"NB;T"e;C>?W]"9J=ZYOa\:9AA7;>;[#$%&,7> B9=Z7>?_;C>*A;[*7=89J7D=>*>;>*7=89J7DF7D91]3Y]$C:?69A" 2LLL"G)H.) @2Y 2,$DB=:J9I"R=8=# M"^ =>MV9>#"9J=ZYMZ=>KZ ?ZCJ=F7>9 *7\9\J7*9>;J=[[9DJB9F;*K>=F7DA*9A\7J9=?:9=J9:7>D:9=A97> FK;D=:*7=ZB9=JAB;DV\:;J97>&’7FFC>;:9=DJ7U7JK7>9>*;J;ac 9F7DAB99\1]3Y]4CJ:7"’,,2"2.2H2@.. 2@.&g -收稿日期H’,,@ ,G ,) 修回日期H’,,E ,. 22/ -本文编辑H李银平/ h2,.h中国危重病急救医学 ’,,E年 E月第 2&卷第 E期 NB7>N:7JN=:9I9*"I=K’,,E"^ ;ZY2&"4;gE 万方数据