实验四体液免疫功能测定

null实验四体液免疫功能测定 实验四体液免疫功能测定 一、实验目的一、实验目的1．了解体液免疫功能的组成。 2、掌握凝集试验原理。 3、掌握沉淀试验原理。二、实验材料和用具二、实验材料和用具1．器材：电泳仪、玻片、打孔器、刻度吸管等 2．试剂： 琼脂、血型抗体、人血清、兔抗人抗体 三、实验内容三、实验内容一、凝集实验 颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应的抗体结合，在适量电解质存在的条件下出现凝集现象，称为凝集反应。分类分类1 、直接凝集 2、间接凝集 3、反向间接凝集 4、反向间接凝集抑制 5、抗球蛋白试验（Coombs试验）玻片凝集反应玻片凝集反应玻片凝集反应是在玻片上将细菌等颗粒性抗原与其相应抗体混合，如出现凝集块者为阳性反应。混合后均匀浑浊，无凝集块出现者为阴性反应。本试验可应用于已知抗体（免疫血清）检测未知抗原,是定性试验。ABO血型鉴定。方法方法1. 取洁净玻片1张。 2.在玻片中滴1滴指尖血。 3. 然后滴加入血型抗体1滴，轻轻摇匀。 4.立即持续摇动玻片，1～3min后观察结果。 三、实验内容三、实验内容二、沉淀反应 可溶性抗原（血清、细胞裂解液或组织浸出液等）与相应抗体结合后在一定条件下出现肉眼可见的沉淀现象称为沉淀反应。分类分类1.单向免疫扩散 2.双向免疫扩散 3.免疫电泳 4.免疫比浊对流免疫电泳对流免疫电泳对流免疫电泳原理：带电的胶体颗粒可在电场中移动，其移动方向与胶体颗粒所带电荷有关。在pH8．6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白等电点较高，只带有微弱的负电荷，而且分子较大，所以泳动慢，受电渗作用影响大, 往往不能抵抗电渗作用，故在电泳时，反而向阴极倒退。而抗原通常带有较多的负电荷，分子又小，所以泳动快，虽然由于电渗作用泳动速度减慢，但仍然向阳极泳动。如将抗原置阴极，抗体置阳极，电泳时两种成分相对泳动，一定时间后二者相遇，并于比例合适还形成肉眼可见的沉淀线。此种在双向琼脂扩散基础上加电泳的方法，称为对流免疫电泳。方法方法1.打孔：取琼脂板，放于上，用3mm打孔器打孔 (按模板进行)，孔的排列方式如图所示。 2.加样：用微量加样器加样：一侧2孔加抗体，另一侧2孔加待检血清及阳性对照血清。方法方法3.将已加好样的琼脂板放在电泳槽架上(加抗体侧放在阳极),两端贴上已浸透缓冲液的纱布。 4.打开电源，调整电压，4～V／cm(玻片长度)，电流3～4mA／cm(玻片宽度)，电泳时间以阳性对照抗原抗体间出现沉淀线后再持续5～10分钟。一般为45～60分钟。 5.调整电压为零，切断电源，取出琼脂板null四、实验结果四、实验结果一、原理 凝集试验 沉淀试验 二、图示结果及