注射用心肌肽对幼鼠离体心脏缺血再灌注后的心功能影响

http://www.paper.edu.cn - 1 - 中国科技论文在线 注射用心肌肽对幼鼠离体心脏缺血再灌注 后的心功能影响# 杨立平1，陈良万2* 基金项目：基金项目：教育部博士点基金（200803920001） 作者简介：杨立平（1970-），女，博士，副主任医师，主要从事围术期心血管保护的研究. E-mail: hnylp@tom.com （1. 福建医科大学附属协和医院心外科 福州市 350001； 2. 福建医科大学附属协和医院心外科，福州，350001） 摘要：目的:探讨注射用心肌肽对幼鼠离体停搏再灌注心脏心功能的影响及机制。方法: 30 只 SD幼鼠，随机分为 3组，离体心脏用 Langendorff 灌流，稳定 20min后，停搏（缺血） 90min，再恢复灌流（再灌注）60min，建立缺血再灌注损伤模型，对照组（Control）：灌 流用 K-H 液、停搏用 ST.Thomas'II 停跳液，用药两组（CMP1 组：停跳液加入注射用心肌 肽；CMP2 组：灌流液及停跳液均加入注射用心肌肽）。监测心功能、检测冠脉流出液中 CK-MB 含量，心肌组织匀浆中能量指标的变化，超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛、NO 的含量、NOS 的活性。观察心肌组织超微结构改变。结果:停搏再灌注后，对照组心搏功能 下降，而两个用药组仅轻微下降，且 CMP2 组心功能相对更佳。与对照组比，用药两组的 CK-MB含量低，能量代谢活性好，SOD活性高，丙二醛、NO含量低，心肌组织 NOS的活 性下降，超微结构改变轻。结论:注射用心肌肽可保护幼鼠缺血再灌注后心功能。可能与其 减少氧自由基的损伤、改善能量代谢，减少 NO大量产生及其毒性有关。 关键词： 未成熟心肌；心肌肽；再灌注损伤；心功能； NO The effect of Cardiomyopeptidin for injection on the cardiac function of the isolated hearts of young rats after ischemia-reperfusion injury YANG Liping, CHEN Liangwan (Department of Cardiovascular Surgery,The Affiliated Union Hospital,Fujian Medical University,Fuzhou 350001,China) Abstract: Objective: To investigate the effect of cardiomyopeptidin for injection on the cardiac function in the Langendorff perfusion isolated hearts of young rats and its mechanism after ischemia-reperfusion injury. Methods: 30 young healthy SD rats（aged 20±3 day and weighing 50-70g） were randomly divided into three groups, Control group: the isolated rat hearts were perfused with K-H buffer and then arrested with cardioplegic solution; CMP1 group: the above ST.Thomas'II cardioplegic solution was added with 100 mg/L cardiomyopeptidin; CMP2 group: the above K-H buffer and ST.Thomas'II cardioplegic solution were added with 50 mg/L and 100 mg/L cardiomyopeptidin respectively. The isolated rat hearts were initially perfused with K-H buffer in 37 Langendor℃ ff system for 20 min, following a procedure of perfusion with ST.Thomas'II cardioplegic solution at 4 for 3min, and then arrest for 27min, with the Langendorff system kept in 32 . This procedure was ℃ ℃ repeated three times. After arrested for 90min (undergone ischemia), the rat hearts were reperfused for 60min in normal temperature.The cardiac functional index was monitored, including heart rate, http://www.paper.edu.cn - 2 - 中国科技论文在线 myocardial contractility and diastolic function, peak systolic and diastole myocardial velocities and coronary flow. In three ischemia-reperfusion injury model group, myocardial ultrastructure were observed through Transmission Electron Microscopy; the creatine kinase isoenzyme (CK-MB) concentration were measured in the fluid outflow of coronary; the content of Na+-K+ ATPase, Ca2+-Mg2+ ATPase, total ATPase, superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), nitric oxide(NO), total nitric oxide synthase (TNOS), inducible nitric oxide synthase (iNOS) and in myocardium tissue. Results: In control group, after prolonged perfusion, the time of heart re-beat was longer, the cardiac function index and coronary flow of isolated hearts had been decreased; Compared with the control group, the hearts re-beat fast, the decreased degree of the cardiac function index and coronary flow in the groups treated with cardiomyopeptidin were much lesser. Administration of cardiomyopeptidin in both K-H buffer and ST.Thomas'II cardioplegic solution is better than adding cardiomyopeptidin in cardioplegic solution only. Cardiac myofibrillar fragmentation and mitochondrial swelling were observed in the control group, while in the CMP groups, the myocardial structure was near-complete, and only mild mitochondria swelling and degeneration could be seen. After reperfusion, the content of CK-MB was increased in the control group. Compared with the control group, the CK-MB content is low in the two treatment group; There was a lesser decline in the contents of Na+-K+ ATPase, Ca2+-Mg2+ ATPase and Total ATPase in the treatment groups, and a increase in the activity of SOD (P<0.01 or P<0.05). The concentration of NO and MDA produced after ischemia-reperfusion injury were much lesser in two CMP groups; moreover, the activity of iNOS were inhibited, Conclusion: Cardiomyopeptidin for injection may improve coronary blood flow and protect cardiac function after reperfusion, thus protect immature myocardial against ischemia-reperfusion injury in young rats. The mechanism may be associated with inhibited the OFR injury, improved the energy metabolism, the reduced NO production and toxic in immature myocardium. Key words: immature myocardium; cardiomyopeptidin; ischemia-reperfusion injury; cardiac function; nitric oxide 0 引言 随着心外科技术及体外循环技术的发展，婴幼儿先天性心脏病手术逐渐增多，并且趋向 低龄化。大多数婴幼儿心脏手术时需要体外循环及阻断升主动脉停搏心脏，心脏会发生缺血 再灌注损伤，术中心肌保护仍多沿用基于成年的心肌保护，即每隔 20-30分钟用冷晶体 高钾停搏液灌注一次以保护心脏。但由于术中缺血心肌保护不当，术后心功能不全仍是婴幼 儿心脏手术死亡的主要原因之一[1]。因此，在停搏液添加其他的药物，加强婴幼儿心脏手术 中缺血心肌保护，将有助于提高先天性心脏病手术疗效。动物试验及临床研究发现注射用心 肌肽可直接作用于心肌细胞，降低心肌细胞脂质过氧化反应、提高心肌细胞清除氧自由基的 能力、提高心肌细胞线粒体脱氢酶活性、保护细胞膜完整性，从而拮抗多种因素（如缺血、 缺氧、药物、中毒等）对心肌的损伤，并促进心肌细胞功能与结构的修复。表明注射用心肌 肽对成熟心肌具有保护作用[2-4]。而对未成熟心肌是否具有保护作用及作用机制，需进一步 研究。本研究以幼鼠的未成熟心肌为研究对象，建立幼鼠离体心脏 Langendorff 灌流模型； 在停跳液及灌流液中加入注射用心肌肽，观察其对幼鼠离体心脏的心功能有无影响。 1 与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物及分组选用 SD大鼠的幼鼠 30只，雌雄不限，20±3日龄，体重 50～70g。 由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK（沪）2007-0005。随 http://www.paper.edu.cn - 3 - 中国科技论文在线 机分为 3组，每组 10只，对照组（Control，C group），注射用心肌肽组：CMP1组 （cardiomyopeptidin, CMP1 group）：停搏液加入注射用心肌肽 100mg/L；CMP2组 （CMP2 group）：灌流液中加入注射用心肌肽 50mg/L 及停搏液加入注射用心肌肽 100mg/L。（2）试剂：注射用心肌肽素，20mg/瓶，由大连珍奥药业有限公司友情提 供(生产批号：2008XL0289)。 1.1.2 K-H缓冲液配制：NaCl 118.5mmol/L、KCl 4.75mmol/L、KH2PO4 1.18 mmol/L、CaCl 2 1.4mmol/L、NaHCO3 25.0mmol/L、MgSO4 1.19mmol/L、葡萄糖 11.0mmol/L，PH7.4， 临用前配制，滤纸过滤，持续通入 95%O2+5%CO2（1.5L/min）混合气体饱和约 30min， 用恒温浴槽维持温度在 37.0℃。血气分析测定符合 pH 7.35～7.45，PO2＞600mmHg （或 66.7～73.3kpa，500-550mmHg），PCO2 35～45mmHg（或 4.8～5.6kpa， 36-42mmHg ）用于实验。 ST.Thomas’II 停搏液： NaCl 120mmol/L、 NaHCO310mmol/L、 KCl 16mmol/L、CaCl2 1.2mmol/L、MgCl216mmol/L， pH 7.8，渗透压 295-320mOsm/L。 1.2 方法 1.2.1 摘取心脏与主动脉插管灌流：幼鼠术 20min腹腔注射肝素(100IU/100g)，10%水合氯 醛 2.5ml/kg腹腔注射麻醉动物，固定，开胸，剪断腔静脉、主动脉及心脏周围组织， 迅速摘出心脏置于 4 K℃ -H 液中，清洗修剪，插主动脉套管，37 K℃ -H 液液 Langendorff法逆灌主动脉，从暴露心脏到开始灌注在 2min内完成。C组、CMP1组 与 CMP2组用 37℃的 K-H液灌流 20min稳定后，4℃停搏液灌流 3min停灌 27min， 停搏期间保持环境温度 32℃，重复 3 次。三组停搏共（缺血）90min，再恢复温度 37℃、正常灌流（再灌注）60min。 1.2.2 心功能指标实时监测：离体灌流心脏用系线的蛙心夹夹住少许心尖组织，移入恒温 小室中，系线通过滑轮与张力换能器相连，冠脉流出液经漏斗收集后测容量，由 RM6240微机化生物实验系统动态记录心搏曲线和冠脉流量。离体心脏灌流 5min时 调心脏前负荷约 3g，检测心率(HR，min-1）、收缩力(△T，g)及最大收缩速度(+dT/dtmax， g.s-1)和最大舒张速度(-dT/dtmax，g.s-1)、冠脉流量(CF，ml.min-1)、反映心功能。离体 心脏稳定灌流 20min 时测定心功能各参数（基础值），记录心脏复搏时间(s)，再灌 注后每 10min测心功能各参数，绘制心功能各指标的动态图。 1.2.3 生化检测：①用全自动生化仪(CX7 全自动生化分析仪：美国 Backman 公司)检测冠 脉流液中肌酸激酶同工酶（CK-MB）的含量。②实验结束后，取心肌组织，置于-70℃ 冰箱保存。按照试剂盒说明制成一定浓度的组织匀浆，测定以下生化成分：(1) Na+-K+ ATP酶（Na+-K+ ATPase）、Ca2+-Mg2+ ATP酶（Ca2+-Mg2+ ATPase），心肌总 ATP 酶（T-ATPase）的活性；(2)超氧化物歧化酶(SOD)活性；(3)丙二醛(MDA)含量；(4) 硝 酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量，总一氧化氮合酶（TNOS）、诱导型一氧化 氮合酶（iNOS）的活性。以上试剂盒购自南京建成生物有限公司。 1.2.4 病理检测：①HE 染色，光镜观察心肌组织改变；②标本按常规操作，日立 Hu-12A 型(福建医科大学电镜室协助完成) 观察大鼠心肌超微结构改变。 1.3 统计学分析：资料采用均值±差 ( sx ± ）表示，应用 SPSS 13.0 统计软件处理，组 间差异比较采用单因素方差分析，两两比较使用 LSD法分析，以 P<0.05 为统计学上 差异有显著性。 http://www.paper.edu.cn - 4 - 中国科技论文在线 2 结果 2.1 离体心脏心功能的变化 2.1.1 离体心脏复灌 60 min后心功能与基础状态的比较 幼鼠离体心脏开始灌流 20min后、心功能的各参数趋向稳定，作为基础值，各组心功能 参数差异无统计学意义（P﹥0.05）。停搏再灌注后，C组复跳慢且易出现心室颤动，CMP1 复跳快，CMP2组最快 (P<0.01) (表 3)。幼鼠对照组停搏 90 min、复灌 60 min后心功能各参 数较基础状态明显下降(P<0．01)，两个用药组心搏功能变化值较小，与对照组比较，差异 有统计学意义(P<0．05)。CMP2组与 CMP1组比心率快、心搏功能、冠脉流量保持较好(P<0．05 或 P<0．01)，见表 1。 表 1 离体灌流心脏停搏 90 min、复灌 60 min心搏功能与基础状态的比较( sx ± ，n=10） Tab.1 Camparison of the cardiac function after 90min of arrestand following 60 min of reperfusion and the baseline values in the isolated perfused rat hearts( sx ± ，n=10） Group Re-beat Time(s) HR(min-1) T(g) +dT/dt△ max(g.s-1) -dT/dtmax(g.s-1) CF(ml.min-1) Baseline Reper60min Baseline Reper60min Baseline Reper60min Baseline Reper60min Baseline Reper60min Control 99±4 236±25 107±13## 3.12±0.31 0.91±0.15## 203±18 40±2## -154±13 -34±3## 4.2±0.2 1.5±0.1## CMP1 40±3 231±15 166±16##△△ 3.24±0.25 1.87±0.24##△△ 223±12 88±7##△△ -139±15 77±10##△△ 4.3±0.2 2.6±0.2##△△ CMP2 30±4 246±26 189±15#△△* 3.07±0.5 2.78±0.51#△△* 217±32 125±15##△△** -142±12 -100±11##△△* 4.2±0.2 3.2±0.1##△△** 注： Vs # P<0.05, ## P<0.01 vs baseline； △ P<0.05, △△ P<0.01 vs control group; * P<0.05 ** P<0.01 vs CMP1 2.1.2 各组心脏亚低温停搏 90min再灌注 60min过程心搏曲线 与基础状态比较，C组再灌注后心搏曲线呈下降性变化，心搏弱，心率减慢，停搏期间 心脏张力升高，心肌挛缩，再灌注后张力恢复欠佳(图 1)。CMP1 及 CMP2停搏期间心脏张 力相对低，再灌注后心率及心搏有一定程度恢复；其中 CMP2 组心脏心率较快，心搏恢复 较好（图 2、3）。说明注射用心肌肽可以保护停搏再灌注后受损的心功能。 图 1对照组心搏曲线 Fig.1 the beat curve of the control group young rat heart http://www.paper.edu.cn - 5 - 中国科技论文在线 图 2 CMP1组心搏曲线 Fig.2 the beat curve of the CMP1 group young rat heart 图 3 CMP2组心搏曲线 Fig.3 the beat curve of the CMP2 group young rat heart 三组停搏 90min期间心脏张力变化 各组离体心脏张力在停搏（缺血）90min 期间都有升高趋势（表 2），其中 C 组升高 最明显（P<0.01），并在停搏 60min时达最高值；CMP1组停搏期间张力也逐渐增加，在停 搏 70min时达最高值（P<0.01-0.05）；CMP2组离体心脏的张力升高程度最低；结果表明， 随着停搏缺血期间延长心脏张力升高，幼鼠离体心脏处于挛缩状态，注射用心肌肽可减轻挛 缩状态，且停跳液和灌流液中均加入注射用心肌肽组的心脏张力相对更稳定，挛缩状态减轻。 表 2 幼鼠离体心脏停搏期间心脏张力（Tmin，g）（n=10） Tab.2 The tension of isolated hearts during stop beating 停搏时间(min) 对照组 CMP1组 CMP2组 10 1.72±0.33 1.65±0.22 1.76±0.28 20 1.92±0.45 1.85±0.40 1.79±0.31 30 2.19±0.36 2.11±0.49 1.94±0.24 40 2.51±0.51 2.40±0.36 1.97±0.40* 50 3.04±0.38 2.71±0.26* 2.14±0.45** 60 3.59±0.76 2.83±0.33* 2.30±0.51** 70 3.44±0.63 3.21±0.39 2.38±0.59** 80 3.42±0.72 3.08±0.40* 2.50±0.61** 90 3.37±0.81 2.82±0.20 2.60±0.65* 注： *:P<0.05 ， **:P<0.01 vs control group. http://www.paper.edu.cn - 6 - 中国科技论文在线 2.2 冠脉流液中 CK-MB含量的变化 对照组再灌注后 10min，60min冠脉流液中 CK-MB含量与基础值比明显增高，并高于 CMP1和 CMP2组；CMP2组低于 CMP1组(P<0.05或 P<0.01)（表 3）。表明再灌注后心肌 的漏出酶增高，心肌受到损伤，而加用注射用心肌肽保护后心肌损伤减轻。 表 3 冠脉流液中 CK-MB含量的变化( x ± s, n=10) Tab.3 The content of CK-MB in the fluid of Coronary flow( x ± s, n=10) 组别 Baseline（IU/L） Reper10min（IU/L） Reper60min（IU/L） 6.0±2.4 24.6±8.5△△ 27.8±9.4△△ 对照组 CMP1 5.9±2.1 18.4±4.8△△* 24.3±6.9△△ CMP2 5.7±0.9 13.8±2.7△△** 18.0±2.7△** 注： △ P<0.05, △△ P<0.01 vs baseline；* P<0.05 ** P<0.01 vs control group. 2.3 能量代谢活性与氧化抗氧化代谢变化 能量代谢指标改变：与对照组比较，CMP1及CMP2组心肌总ATP酶活性高，心肌Na+-K+ ATP酶和 Ca2+-Mg2+ ATP酶活力也高，并且 CMP2组三种 ATP酶活性最高，C组活性最低， 差异有统计学意义(P<0.05-或 P<0.01)。 心肌组织匀浆 SOD、MDA的变化：与 CMP组比，对照组 SOD 活性低，MDA含量高， 三组中 CMP2组 SOD活性最高，MDA含量低(P<0.05)，说明注射用心肌肽保护的未成熟心 肌缺血再灌注后抗氧化能力强，氧自由基的水平相对低（表 4）。 表 4 各组心肌能量代谢及氧化抗氧化代谢变化( sx ± ，n=10) Tab.4 The levels of Na+-K+ ATPase, Ca2+-Mg2+ ATPase, T-ATPase and The concentration of SOD , MDA in myocardial tissue homogenate( sx ± ，n=10) 组别 Na+-K+ ATP酶 （U/mgprot) Ca2+-Mg2+ ATP酶 T-ATP酶 （U/mgprot) （U/mgprot) SOD （U/mgprot) MDA (nmol/ml) 对照组 11.63±0.86 8.35±1.10 12. 73±1.01 69.55±9.88 4. 72±1.03 CMP1 14.70±1.47△ 11. 43±1.78△△ 15. 15±1.07△ 78. 67±7.60 △ 3.64±0.79△ CMP2 16. 14±1.44△△* 13. 23±1.75△△* 19. 58±1. 61△△** 88. 80±6.16△△* 3. 12±0. 68△△* 注： 与对照组比较， △ P<0.05, △△ P<0.01；与 CMP1组比较* P<0.05，** P<0.01 2.4 心肌 NO、NOS含量测定 对照组心肌 NO含量明显高于 CMP组(P<0.01)，且 TNOS、iNOS 的活性高，说明心 肌组织 NO 生成增多，注射用心肌肽可减少未成熟心肌缺血再灌注引起的 NO 生成增多。 CMP2组 NO含量，TNOS、iNOS 活性均低于 CMP1组 (P<0.05)，见表 5。 表 5 心肌匀浆 NO、TNOS 、 iNOS 含量测定( sx ± ，n=10) Tab.5 The concentration of NO、TNOS and iNOS in myocardial tissue ( sx ± ，n=10) 组别 NO（umol/gprot） TNOS（U/mgprot） iNOS（U/mgprot） 对照组 14 .91±4. 59 1.48±0.22 1.024±0.257 CMP1 6 .67±1.63△△ 1.14±0.24△ 0.738±0.205△ CMP2 4. 26±1.66△△* 0.795±0.28△△* 0.519±0.188△△* 注： △ P<0.05, △△ P<0.01 vs control group；* P<0.05，** P<0.01 vs CMP1 group 2.5 病理变化 2.5.1 光镜心肌组织学变化：对照组心肌细胞内可见明显的水肿及空泡样变，细胞胞核 固缩、溶解，异染性；肌纤维排列较紊乱，间质水肿，血管内皮接近正常。CMP1 组心 肌细胞轻度的水肿和空泡样变，胞核结构尚清晰；肌纤维排列稍紊乱，间质轻度水肿， http://www.paper.edu.cn - 7 - 中国科技论文在线 散在炎症介质，血管内皮基本正常。CMP2 组心肌细胞轻度的水肿和空泡样变，细胞胞 核结构较清晰；肌纤维排列较整齐，间质轻度水肿，散在炎症介质，血管内皮基本正常。 对照组心肌组织 CMP1组心肌组织 CMP2组心肌组织 图 4：光镜下各心肌组织结构改变（HE×400） Fig.4 The young rat myocardium of each group were observed under light microscopy 透射电镜下心肌组织超微结构改变：各组幼鼠未成熟心肌细胞具有核较大、肌原纤维相 对少、肌节不完整，线粒体数量少的特点。对照组心肌细胞肌原纤维欠整齐，部分肌丝间水 肿或肌纤维断裂，肌小节不甚清晰；线粒体稍肿胀，嵴减少、断裂；细胞核稍肿胀。CMP2 组心肌细胞肌原纤维排列规则、无断裂，肌小节清晰。线粒体无肿胀、嵴突规则致密；细胞 核无肿胀，核膜完整，异染色质和常染色质清晰可见，常染色质位于异染色质块之间。CMP1 组心肌超微结构改变介于对照组与 CMP2之间（图 5）。 (Normal x 12500) (对照组 x8000) (CMP1 x8000) (CMP2 x6300) （图5） 透射电镜下各组心肌组织超微结构改变 Fig.5 The young rat myocardium of each group were observed under transmission electron microscopy 3 结论 本研究观察到停搏期间，对照组心脏静息张力升高，幼鼠离体心脏处于挛缩状态，注射 用心肌肽可减轻挛缩状态。对照组的幼鼠离体心脏停搏再灌注后，心脏复跳时间长、并且复 跳期间常有心律失常、心室颤动的发生，而停跳液中加入注射用心肌肽的心脏再灌注后复跳 快，并且灌流液中也加入注射用心肌肽时再灌注后复跳更快。再灌注后，对照组离体心脏心 率减慢、舒缩功能降低，心脏功能受损。对照组的冠脉流量再灌注后进行性地下降，冠脉流 量与冠脉流阻和灌注压有关，本研究离体心脏采用恒压灌流，故冠脉流量下降提示冠脉流阻 增加。冠脉流量下降，可能是再灌注加重缺血心肌的损伤，细胞水肿造成冠脉受压，流阻增 http://www.paper.edu.cn - 8 - 中国科技论文在线 加所致；也可能是冠脉内皮功能障碍所致。缺血再灌注可导致明显的内皮功能障碍[5]。缺血心 脏再灌注后冠脉流量下降是心脏再灌注损伤的主要表现。与对照组相比，注射用心肌肽保护 的心脏缺血再灌注后冠脉流量高，且维持稳定，说明冠脉功能保护好。 对照组幼鼠的心肌缺血再灌注后，冠脉流出液CK-MB增加，MDA含量增加、而SOD的 活性下降。MDA含量和SOD活性可反映心肌组织再灌注损伤程度的轻重[6]。与对照组比较， CMP组MDA含量低，SOD活性最高，而CMP2组MDA和SOD的变化更明显，提示停博液中 加入心肌肽减轻未成熟心肌自由基的损伤，且灌流液及停博液中均加入注射用心肌肽更能减 轻损伤。病理学检查也提示，加用注射用心肌肽保护的幼鼠未成熟心肌损伤减轻。 ATP是心肌能量代谢的直接来源，为心脏电－机械活动和自身新陈代谢提供能量[7]。ATP 明显下降可进一步加重氧自由基的损伤、引发恶性心律失常、酸中毒等一系列代谢异常和紊 乱[8－9]，ATP下降还直接影响心功能。注射用心肌肽可保护缺血再灌注后幼鼠的未成熟心肌 的能量代谢活性[10]，可能是其保护缺血再灌注损伤后未成熟心肌的心功能机制之一。 本实验观察到，再灌注后对照组心肌 TNOS、iNOS 的活性高，NO生成增多。NO在 心肌再灌注过程中有双重作用，既有减轻再灌注损伤的作用，同时又能介导再灌注损伤。生 理浓度的 NO通常对心肌保护有利，低浓度的 NO通过抑制内皮素从而减少钙内流，抑制心 肌顿抑的发生；可增加心室收缩功能，使短期的冬眠心肌的收缩功能与心肌氧耗相匹配[11] 。 而高浓度的 NO 触发炎性反应、抑制收缩功能[12] 。注射用心肌肽减少再灌注后未成熟心肌 NO的大量生成及其毒性，可能是其保护心功能的机制之一。 总之，本研究提示注射用心肌肽可改善幼鼠缺血再灌注后心脏冠脉流量，提高心功能； 并且灌流液及停搏液均加入注射用心肌肽对未成熟心肌缺血再灌注后的心功能保护作用优于 单纯停搏液加入注射用心肌肽。其机制可能与其减少心肌 CK-MB漏出，减少氧自由基的生成， 减轻未成熟心肌缺血再灌注损伤；保护未成熟心肌缺血再灌注损伤后能量代谢活性，及减少 NO生成及毒性作用有关。 [参考文献] (References) [1] Karimi M, Wang LX, Hammel JM, et al. Neonatal vulnerability to ischemia and reperfusion:Cardioplegic arrest causes greater myocardial apoptosis in neonatal lambs than in mature lambs[J]. Thorac Cardiovasc Surg, 2004, 127(2):490-497. [2] 张明辉, 阮英茆, 王清峙, 等. 大鼠心肌缺血再灌注损伤与心肌肽素的保护作用[J].中国临床康复, 2005, 9(23):86-88. [3] 史青霞, 张磊, 汪炜健, 等. 心肌肽素在心脏手术中对心肌的保护作用的临床研究[J].中国循环杂志, 2005, 20(5):381-383. [4] 周玲善, 阮鹏, 李 刚, 等. 心肌肽素在体外循环中对心肌保护的临床研究[J].中国体外循环杂志, 2005, 3(3):143-146. [5] Carden DL, Granger DN. Pathophysiology of ischaemia-reperfusion injury[J]. J Pathol, 2000, 190(3):255-266. [6] Sauerl HH, Allenl SJ, Laine GA. Impact of Crystalloid HTK and St. Thomas’ Cardioplegia on Myocardial Fluid Balance and Postcardioplegic Stunning[J]．Cardiovasc Engin,2003, 8(1): 58-65． [7] Arslan A,Sezgin A,Gultekin B,et a1．Low-dose histidine tryptophan ketoglutarate solution for myocardial protection [J]．Transplant Proc. 2005, 37(9):3219-3222． [8] 谷天祥, 张显清, 谷春久,等. 心肌缺血再灌注损伤亚细胞 Ca2+反常与 ATP 酶泵功能抑制[J].中华心血管 病杂志, 2001, 29(7): 420-423. [9] Nordlie MA, Wold LE, Simkhovich BZ, et al. Molecular aspects of ischemic Heart disease: ischemia/reperfusion-induced genetic changes and potential applications of gene and RNA interference therapy[J]. Cardiovasc Pharmacol Therapy, 2006, 11(1): 17-30. [10] 杨立平, 陈良万, 张贵灿, 等. 注射用心肌肽对幼鼠离体心脏缺血再灌注能量代谢的影响[J].中南大学 学报, 2010, 35(6):598－606. [11] Heusch G , Post H, Michel MC, et al. Endogenous nitric oxide and myocardial adaptation to ischemia[J]. Circ Res. 2000, 87(2):146-152. [12] Schulz R, Kelm M, Heusch G . Nitric oxide in myocardial ischemia/reperfusion injury. Cardiovasc Res[J]. 2004, 61(3):402-413.