双黄连注射剂的工艺与质量标准研究

null双黄连注射剂的工艺 与质量标准研究双黄连注射剂的工艺 与质量标准研究 张清波 黑龙江省药品检验所 二九年八月十二日 主要内容主要内容一、双黄连注射剂系列的品种概况 二、双黄连注射剂系列的研究概况 三、双黄连注射剂系列的指纹图谱研究 四、双黄连注射剂系列的质量研究 五、存在的主要问题 null一、双黄连注射剂系列的品种概况 功能与主治: 清热解毒，清宣风热。用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。适用于病毒及细菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃体炎、咽炎等。 收载标准： 成方制剂十一册、中国药典2005年版一部一、双黄连注射剂系列的品种概况一、双黄连注射剂系列的品种概况1、生产企业：黑龙江省生产双黄连注射剂企业共有11家（股份制企业5家、民营企业5家、私营企业1家），从业员工1.1万人。这些企业分别建厂于1950年至2001年。有20余年生产双黄连注射剂的历史，企业固定资产净值25亿元，年生产能力11.83亿支。 2、剂型及规格：现有注射液、粉针剂、冻干粉针剂、滴注剂四个剂型；有20ml、300ml、500ml、0.6g、1.2g。 3、生产量：现11家从2000年到2008年底共生产双黄连注射剂2万余批次、27亿支；2004年至2008年生产1.49万批次、20.53亿支。近三年来实现产值13.4亿元、利税2.1亿元，单品种产值占全行业总产值的12.96%。 4、销售范围：目前这些企业的品种销往全国各地，分布最广的企业除台湾、香港、西藏外，各省市、自治区、直辖市均有销售和使用。二、双黄连注射剂系列的研究概况二、双黄连注射剂系列的研究概况 第一阶段: （2002年～2004年） 1、对8家生产企业的近100批产品进行了初步质量分析； 2、进行企业工艺调研与实验室模拟工艺的研究； 3、与生产企业沟通，明确生产工艺应严格按照部颁标准执行 4、药材样本的采集：共实地采集了不同产地的70多批药材； 5、考察不同采收季节、不同来源，不同产地的药材对指纹图谱的影响； 6、采用色谱指纹图谱技术，对双黄连注射剂指纹图谱的整个获取过程进行了学验证并测定了统一工艺路线后的样品 7、考察了药材、中间体与成品指纹图谱的相关性； 8、增加了成品中绿原酸、连翘苷的含量测定标准。 二、双黄连注射剂系列的研究概况二、双黄连注射剂系列的研究概况 第二阶段（2006年～2008年）： 1、根据样品的实测情况对双黄连注射液、注射用双黄连的指纹图谱的评价标准进行了改进； 2、增加了异常毒性、降压物质、过敏试验安全性检测标准。 3、注射用双黄连指纹图谱已收载于中国药典2005年版一部增补本。null药厂实地调研，考察 药材样品的采集 成品样品的收集 实验室模拟工艺小样 统一生产工艺 （中期会的召开）方法学验证 双黄连注射剂系列 指纹图谱的建立 中间体指纹谱的研究 相关性考察 前期准备工作文献检索研究计划的制定会议召开三、双黄连注射剂的指纹图谱研究市场上近100批 成品的摸底药材指纹图谱的研究双黄连注射剂系列 质量标准的提高 指纹图谱条件的确立技术的形成征求反馈意见生产工艺的追踪 工艺参数变动的影响null 统一工艺前八个不同厂家的双黄连注射液指纹图谱的比较 从这八个厂家的样品色谱图可以看出，无论从色谱峰的个数上，还是各峰面积的大小和相对比例，不同厂家的产品质量不尽相同，尤其是保留时间在1020分钟的色谱峰个数、510分钟的色谱峰面积，厂家之间差异很大。null金银花与连翘分别煎煮提取与混合煎煮提取对指纹图谱的影响 金银花、连翘混提与单提，特征色谱峰之间差异较大，表现在5、6、7号色谱峰在单提液中缺失或减弱。除1、3号色谱峰相对稳定外，大多特征峰的相对峰面积比值发生变化，混提比单提有增高的趋势，表明混提增加了某些成分的溶出量。实验室模拟小样金银花与连翘分别煎煮提取金银花与连翘混合煎煮提取null金银花、连翘提取不同的煎煮时间对指纹图谱的影响 对金银花、连翘提取的煎煮时间分别进行每次煎煮1小时和每次煎煮2小时的考察，结果特征峰的峰数与峰位没有变化，相对峰面积的比值变化不大。null 金银花、连翘提取各步骤对指纹图谱的影响 重点考察醇沉、纯化、稀配这三步留样。HPLC分析结果显示，特征色谱峰的峰数与峰位无大的区别，即成分未有变化，但来自金银花药材的2号特征峰（绿原酸）及1、3、9、11号特征峰的峰面积随着一步步生产而降低，其它特征峰相比受影响较小。null金银花、连翘提取不同醇沉温度对指纹图谱的影响 对金银花、连翘提取进行20C、40C、60C不同醇沉温度的考察，结果特征峰的峰数与峰位没有变化，相对峰面积的比值变化较小（RSD小于3%）null金银花、连翘提取中冷藏放置与冷冻放置对指纹图谱的影响 对金银花、连翘药材水煎、浓缩后进行冷藏放置与冷冻放置对比考察，结果除4号特征峰差别较大外（冷藏的峰面积增值较大），其它均相差无几。null以上研究结果表明： 1、金银花、连翘药材的合煎与分煎对某些成分的溶出有较大的影响； 2、生产工艺各步骤的一致性也是获得稳定的双黄连注射液指纹图谱的关键因素； 3、在一定范围内，不同的煎煮时间、不同的醇沉温度对双黄连注射液指纹图谱的影响不大。三、双黄连注射剂的指纹图谱研究null双黄连注射剂药材指纹图谱的研究连翘药材【中国药典】连翘为木犀科（Oleaceae）连翘属植物连翘Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl. 的干燥果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透时采收，晒干，除去杂质，习称“老翘”。null22批连翘药材的质量情况null不同产地青翘指纹图谱null不同产地老翘指纹图谱null 有3对相同产地的青老翘，分别是山西、栾川、陵川，把它们的图谱进行比较发现： 1、山西青老翘在色谱峰的保留时间和峰数上较为一致，只是峰面积有所增减，如老翘中10.919、12.737、13.662的峰面积稍有增加，而14.562、18.850、21.323、46.666和37.902（连翘苷）的峰面积明显减少； 2、栾川青老翘在色谱峰的保留时间和峰数上也较为一致，老翘色谱峰除了12.737、13.662峰面积减少外，其它色谱峰无明显变化； 3、陵川老翘则在10.919、49.944峰面积明显减少，其它峰面积无明显变化。 总之，相同产地的老翘大部分色谱峰峰面积均比青翘减少。相同产地青、老翘指纹图谱null双黄连注射剂药材指纹图谱研究黄芩药材【中国药典】黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，春秋二季采挖，除去须根和泥沙，晒后撞去粗皮，晒干。 药材样品的收集null黄芩药材的匹配结果null双黄连注射剂药材指纹图谱研究金银花药材【中国药典】本品为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山银花Lonicera confusa DC或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花。夏初花开放前采收，干燥。金银花质量情况null金银花同山银花比较null忍冬与红腺忍冬的区别null1、不同品种的药材得到的指纹图谱不同； 2、不同产地的药材得到的指纹图谱不同； 3、不同采收季节的药材得到的指纹图谱不同 4、要获得到稳定、均一的成品指纹图谱，固定药材的品种、产地、采收季节是不可忽略的因素之一。双黄连注射剂药材指纹图谱研究null金银花中间体在金银花药材中的追踪三、双黄连注射剂的指纹图谱研究金银花中间体金银花药材null连翘提取物三、双黄连注射剂的指纹图谱研究连翘中间体在连翘药材中的追踪连翘药材null5批黄芩提取物匹配结果 三、双黄连注射剂的指纹图谱研究黄芩中间体在黄芩药材中的追踪null三、双黄连注射剂的指纹图谱研究1、 中间体的各特征峰均可在药材指纹图谱中得到追踪； 2、药材通过适当的方法提取纯化后的HPLC谱图中的色谱峰比中间体的多； 3、中间体色谱图与相对应的药材色谱图在对应峰的量上有所变化。 4、建立的指纹图谱可以很好地控制药材、中间体乃至成品的质量。null样品的测定10个厂家 21批样品6个厂家 18批样品null从整个色谱峰面积看： 1、各厂家的黄芩苷的投料比较稳定（10号峰的峰面积RSD值最小）； 2、属于连翘的5、6号色谱峰和属于金银花及连翘的7号峰，属于黄芩及连翘的8号峰的峰面积虽然不大，也相对比较稳定； 3、属于金银花的1-4号和9号峰变化较大； 结果表明，确保不同厂家生产出相同质量产品的关键是1-4号和9号这5个色谱峰的峰面积的相对稳定，即金银花的质量和生产工艺的同一性。三、双黄连注射剂的指纹图谱研究null三、双黄连注射剂的指纹图谱研究21批双黄连注射液指纹图谱相似度 输出黄芩苷信号未输出黄芩苷信号null11批双黄连注射液指纹图谱 相似度（未输出黄芩苷信号） 双黄连注射液对照指纹图谱 （未输出黄芩苷信号） 双黄连注射液双黄连注射液药材与成品、中间体的相关性 null色谱峰描述 共有10个特征峰，分为两部分，保留时间在15分钟以前的是1—4号峰，不应有多峰现象，其中2号峰为绿原酸，其分离度高，峰面积积分值适中，作为参照峰（S）；1—3号峰来自金银花药材；4号峰为连翘药材中含有的成分，同时也是工艺过程中转化的产物。保留时间在15分钟以后的是5—10号峰，其中5、6号峰为连翘药材的特征峰，7号峰为连翘和金银花药材所共有，8号峰为连翘和黄芩药材所共有， 9号峰为金银花药材的特征峰， 10号峰为黄芩苷，10号峰之后有一组黄芩药材的特征峰。 金银花连翘黄芩注射用双黄连 注射用双黄连对照图谱 色谱峰描述： 共有7个特征峰，分为两部分，保留时间在15分钟以前的是1-3号峰，均来自金银花药材，2号峰为绿原酸；保留时间在15分钟以后的4、5号峰为连翘药材的特征峰，6号峰为金银花药材的特征峰，7号峰为黄芩苷色谱峰。金银花连翘黄芩注射用双黄连null1：绿原酸 2：咖啡酸 3：木犀草苷 4：金丝桃苷 5：芦丁 6：黄芩苷 7：木犀草素 8：黄芩素 9：汉黄芩素 10：连翘苷 11：獐牙菜苦苷 双黄连注射液化学物质基础的研究 混合对照品双黄连注射液null双黄连注射液1null 1、11种对照品在350nm处，除连翘苷、獐牙菜苦苷没有吸收外，其它9种对照品均可显现，且分离良好； 2、成品色谱图中，具有与9种对照品相同的保留时间，且光谱图相似的有5个色谱峰：2号峰可能是绿原酸，4号峰可能是咖啡酸，10号峰可能是黄芩苷，13号峰可能是黄芩素，14号峰可能是汉黄芩素，其它所对应成分，有待以后进一步分析确认； 3、根据质谱检测结果经对照品比对，2号峰和10号峰确定为绿原酸和黄芩苷，其它的化学成分还需进一步的确认。 双黄连注射液化学物质基础的研究 null总结 1、通过药材指纹图谱的研究，明确了药材的产地、品种，为成品的稳定、均一打下了物质基础； 2、中间体指纹图谱的研究使企业的生产过程达到了可控； 3、成品指纹图谱可以体现不同企业产品的同一性及同企业产品的稳定性，在产品的整体性上可给予评价。 三、双黄连注射剂的指纹图谱研究null五、存在的主要问题1、多厂家产品质量不一致。 2、不同厂家所用原料产地不一致。 3、化学成分基础研究不足。五、存在的主要问题null