枯草杆菌黑色变种芽孢菌片使用规程

枯草杆菌黑色变种芽孢菌片使用规程 枯草杆菌黑色变种芽孢菌片使用规程 目的： 制订本的目的是建立枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）芽胞片的使用规程，保证正确使用，对消毒效果进行有效监测。 2．依据： 枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）芽孢菌片使用。 国家卫生部《消毒技术规范》。 3. 范围: 用于枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）芽孢菌片对消毒（如环氧乙烷、干热、微波、臭氧、紫外线、甲醛等）效果进行的监测。 4. 职责： QC微生物检验员、消毒操作人员对本标准的实施负责。 5. 程序： 5.1. 枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）芽孢是国际通用消毒生物指标菌，具有良好的抗力代表性，保存稳定，容易培养和识别。 5.1.1. 该菌为革兰氏染色阳性杆菌，极易形成芽胞，其芽胞位于菌体中央，不膨大。 5.1.2. 100℃流蒸汽，可耐受4分钟；890mg/l环氧乙烷耐受120~150分钟；D10值2.6~2.8分钟；1%甲醛溶液耐受60~70分钟。 .1. 用于环氧乙烷、微波、干热消毒效果监测，将1×106CFU/片的枯草杆菌黑色变种芽胞菌片置于一单层小布袋内然后包入消毒包内适当位置，消毒后按无菌操作取出作微生物检验。 5.2.2. 用于甲醛气体及其它消毒剂熏蒸消毒监测时,可将菌片悬挂在消毒环境内进行消毒处理,然后按无菌操作取出作微生物检验。 5.2.3. 用于各种消毒剂液体浸泡消毒效果监测时,可将菌片直接放入消毒液内,消毒后按无菌操作取出进行微生物检验。 5.3. ： 菌片及其制备的芽胞应保存在4℃冰箱内。 检定菌传代、贮存、接种操作规程 目的： 建立检定菌的传代、贮存、接种操作规程。 2. 范围： 本标准适用于本厂检定菌的传代、贮存、接种。 3. 职责： QC微生物检验员、无菌检验人员对本标准的实施负责。 4. 程序： 4.1.​ 来源：检定菌种由药检部门提供已接种好的菌种斜面。 4.2.​ 保存： 4.2.1. 将购来的试管斜面菌种放入冰箱中冷藏保存。 4.2.2.​ 将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中保存。 4.2.3.​ 每只保存菌种需标明菌名、统一编号、接种日期。 4.3. 传代和接种： 4.3.1.​ 试验用菌种每月传代一次，在菌种接种室内进行传代和接种。 4.3.2.​ 先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作。烧灼接种环。 4.3.3.​ 再将原有的菌种斜面培养基（简称菌种管）与待种的新鲜斜面培养基（简称 接种管），持在左手拇指、食指及中指之间，要注意能清楚地观察到斜面，菌种管在前，接种管在后。应斜持试管呈45°角，使试管内斜面向上，两试管口平齐，注意不要持成 水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。 4.3.4.​ 首先，以右手在火焰旁转动两管的棉塞，以便接种时易于拔取。再以右手持 接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上烧灼。顶端的环必须烧红，以彻底灭菌。环以上凡接种时可进入试管的部分，也应通过火焰烧灼。烧灼时，应把环置于酒精灯的外焰上，因外焰的温度比内焰高，容易烧红。 4.3.5.​ 使用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔出两支 试管的棉塞，持住。再将试管口在火焰上通过，以杀灭管口可能沾污的细菌，但勿烧烫。 4.3.6.​ 先将烧灼过的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，如有熔 印则表明接种环未冷却，能烫死细菌。一定待冷后，再从斜面上挑取菌苔少许。取出时接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管，在斜面上轻轻划线接种。划线时一般先由下而上划一直线后，再由下而上划曲线。操作过程应迅速，勿使菌苔沾至管壁或管口。 4.3.7.​ 当接种完毕，立即将管口通过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上棉塞，不要将管 口离开火焰旁去迎接右手的棉塞。最后将接种环烧灼灭菌放置原处，再把可能未塞紧的棉塞塞紧，即可进行培养。 4.3.8.​ 操作过程中，如因不慎使棉塞触及火焰而着火，切勿用口吹，须在刚刚着火 时迅速塞入试管，因管内氧气不足会很快熄灭。若棉塞外端着火,可用手捏熄。若棉塞烧坏不宜再用，可另取末接种斜面培养基上的灭菌棉塞，代替塞上。 4.3.9.​ 传代和接种使用后，应记好记录。 5. 附： ​  检定菌传代登记表ZL0076 00； 检定菌使用登记表ZL0077 00。