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高致病性禽流感RT-PCR快速诊断方法的建立

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高致病性禽流感RT-PCR快速诊断方法的建立高致病性禽流感RT-PCR快速诊断方法的建立 2010-03-02 14:41:12 来源:动物医学进展 浏览:393次 彭晓玲1,兰 玲1,马亚珍1,成 进2 (1.新疆自治区动物卫生监督所,新疆乌鲁木齐830063;2.新疆自治区畜牧科学院,新疆乌鲁木齐830000)   摘 要:参照国内外方法,选择M基因的保守序列作为靶序列,应用快速、高效、特异的一步法RT-PCR检测法进行禽流感病毒型特异性诊断,得到大小为229bp的特异性产物,与预期结果一致。另外,采用柱式总RNA提取方法,与酚/氯仿的抽提方法相比,具有快速,对操作...
高致病性禽流感RT-PCR快速诊断方法的建立
高致病性禽流感RT-PCR快速诊断方法的建立 2010-03-02 14:41:12 来源:动物医学进展 浏览:393次 彭晓玲1,兰 玲1,马亚珍1,成 进2 (1.新疆自治区动物卫生监督所,新疆乌鲁木齐830063;2.新疆自治区畜牧科学院,新疆乌鲁木齐830000)   摘 要:参照国内外方法,选择M基因的保守序列作为靶序列,应用快速、高效、特异的一步法RT-PCR检测法进行禽流感病毒型特异性诊断,得到大小为229bp的特异性产物,与预期结果一致。另外,采用柱式总RNA提取方法,与酚/氯仿的抽提方法相比,具有快速,对操作人员技术要求较低,整个反应和扩增体系设计合理等特点。以上技术,简化了操作程序,节约了检测时间,缩小了因微量操作引起的误差,可获得较理想的结果和可靠的检测数据。   关键词:禽流感病毒;RT-PCR;一步法   高致病性禽流感因其传播快、危害大,被世界动物卫生组织(OIE)列为A类动物疫病,我国将其列为一类动物疫病[1]。禽流感单靠临床症状常常难以确诊,实验室诊断是确诊流感的惟一有效途径。随着分子生物学技术的飞速发展,禽流感病毒分子生物学检测方法不断取得新的进展[2]。RT-PCR检测方法是近几年发展起来的一种分子生物学基因诊断技术,用RT-PCR技术对禽流感进行诊断,可以大大缩短病毒分离和鉴定的试验周期。它可通过基因序列和结构分析,从分子和基因水平直接对临床病料或鸡胚培养物进行禽流感病毒(AIV)型、亚型及不同毒力株的检测[3],目前已经大量用于流感等病毒的检测工作中。用一步扩增法可检测出总RNA中小于1ng的低丰度mRNA,为RNA病毒检测提供了特异性强、敏感性高的方法,并为获得与扩增特定RNA 互补的cDNA 提供了一条有效的途径[4 6]。 禽流感病毒基因组由8个分节段的单股负链RNA组成[7],M 蛋白是流感病毒的主要结构蛋白,占病毒蛋白总量的40%,具有型特异性,其抗原性的差异是流感病毒分型的依据之一。除了维持病毒粒子的形态外,M1还能调节病毒转录酶的活性[8]。本研究选择禽流感病毒M 基因的保守序列作靶序列,应用RT-PCR技术,合成cDNA,从基因水平检测病毒的RNA,进行禽流感病毒型特异性诊断,以期建立高致病性禽流感快速诊断方法。     完整文章阅读点击下载(PDF格式)
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