干细胞论文 ：异基因脐血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的疗效观察

异基因脐血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的疗效观察 高远征，贾素华，刘玉英，张守民，王 研，赵连峰，魏兴辉 (滨州市结核病防治院肝病科，山东 滨州 251700) 收稿日期:2010 － 06 － 23 修订日期:2010 － 08 － 20 作者简介:高远征(1966 －) ，男，副主任医师，学士，主要从事肝病的 诊断与治疗。 【摘要】目的 观察异基因脐血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化患者的临床疗效。方法 失代偿期肝硬化患 者 50 例，其中乙型、丙型肝炎肝硬化 36 例，酒精性肝硬化 12 例，胆汁性肝硬化 2 例;Child － Pugh分级:A级 2 例，B 级 32 例，C级 16 例。所有患者治疗前均行肝功能及影像学等检查，排除肝癌，严格筛查产妇，无菌采取脐血并分离 出干细胞，通过导管经肝固有动脉将干细胞混悬液植入肝脏，分别在术后 2、4、12、24 w 复查肝功能，观察实验室指 标、影像学改变、临床症状及不良反应等情况。结果 干细胞移植后患者症状改善明显，Alb 2 周时短暂下降，由均 值 28. 4 g /L降至 26. 3 g /L(P ＞ 0. 05) ，24 周 Alb 升至 37. 3 g /L(P ＜ 0. 01) ，ALT 由 56. 9 U /L 降至 46. 3 U /L(P ＜ 0. 05) ，AST由 75. 3 U /L降至 50. 0 U /L(P ＜ 0. 05) ，TBil由 45. 3 μmol /L降至 31. 2 μmol /L(P ＜ 0. 05) ，PTA由 41% 升至 70%(P ＜ 0. 01) ;腹水患者 36 例腹水消失，5 例腹水明显减少，1 例腹水变化不明显;24 周复查 CT，肝脏最大 截面积均值由 132 cm2 增至 178 cm2(P ＜ 0. 01) ，肝脏平扫 CT值由 52. 6 降至 49. 3(P ＞ 0. 05) ，肝裂缩小。50 例患 者均未发生不良反应。结论 异基因脐血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化安全可行，可明显改善肝硬化患者的临 床症状、肝功能、凝血功能和肝脏大小。 【关键词】脐血干细胞移植;肝硬化 【中图分类号】R575. 2 【文献标识码】A 【文章编号】1001 － 5256(2010)06 － 0613 － 03 Efficacy of allogeneic umbilical cord blood stem cell transplantation for treatment of decompensated cirrhosis GAO Yuan － zheng，JIA Su － hua，LIU Yu － ying，et al． (Department of Hepatology，Binzhou Tuberculosis Hospital， Binzhou，Shandong 251700，China) Abstract:Objective To determine the therapeutic effect of allogeneic umbilical cord blood stem cell transplantation in the treatment of patients with decompensated cirrhosis． Methods Total 50 patients of decompensated liver cirrhosis were in- cluded as follows:36 cases of liver cirrhosis based on chronic hepatitis B and hepatitis C，12 cases of alcoholic liver cirrho- sis，and 2 cases of biliary cirrhosis． The patients’s Child － Pugh classification were as follows:2 (grade A )and 32 (grade B) ，and 16 (grade C)． Stem cells were transplanted into the liver through liver artery catheter． Liver function and imaging examination of all the patients were checked after 2，4，12 and 24weeks of therapy respectively，while clinical symptoms and adverse reaction were observed． Results Symptoms were improved obviously after stem cells transplanta- tion． Alb dropped transiently at 2 weeks from the mean value of 28. 4 g /L to 26. 3 g /L (P ＞ 0. 05) ，but Alb increased to 37. 3 g /L after 24 weeks (P ＜ 0. 01)． The mean value of ALT，AST，TBil dropped from 56. 9 U /L to 46. 3 U /L (P ＜ 0. 05) ，75. 3 U /L to 50. 0 U /L (P ＜ 0. 05) ，45. 3 μmol /L to 31. 2μmol /L (P ＜ 0. 05)respectively． PTA increased from 41% to 70% (P ＜ 0. 01)after 24 weeks therapy． Ascites disappeared in 36 patients，lessened in 5 patients，and no change in l case． The mean value of the largest cross － sectional area of liver CT scanning increased from 132 cm2 to 178 cm2(P ＜ 0. 01) ，and CT value from 52. 6 down to 49. 3 in the unenhanced CT scanning (P ＜ 0. 05)． Liver cracking nar- rowed． No adverse effects were observed in any of the cases． Conclusion Allogeneic umbilical cord blood stem cell trans- plantation in the treatment of decompensated cirrhosis is safe and feasible． The clinical symptoms and liver function and liv- er size of the patients were improved significantly with this therapy． Key words:cord blood stem cell transplantation;liver cirrhosis 失代偿期肝硬化是各种慢性肝病的终末期 现，是临床治疗的一大难题，肝移植是理想的治疗选 择，可从根本上改善肝功能，延长肝硬化患者的生存 期，然而由于其治疗费用的昂贵，供体器官紧缺以及 移植后需要长期服用抗排异反应的药物等问题，使 临床应用受到很大限制。近年来干细胞移植治疗失 代偿期肝硬化，已经成为广大学者的研究方向。目 前自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化已取得一定进 展，而异基因脐血干细胞较骨髓干细胞无论在采集、 细胞数量和细胞活力等方面更具优势。滨州市结核 病防治院肝病科对 50 例失代偿期肝硬化患者进行 了异基因脐血干细胞移植治疗，取得了理想的治疗 效果，现报道如下。 1 资料与方法 1. 1 一般资料 2009 年 4 月至 2009 年 12 月期间 316临床肝胆病杂志 2010 年第 26 卷第 6 期 收治的 50 例失代偿期肝硬化患者，男 45 例，女 5 例，年龄 35 ～ 66 岁，平均(43. 5 ± 12. 6)岁;其中乙 型、丙型肝炎肝硬化 36 例，酒精性肝硬化 12 例，胆 汁性肝硬化 2 例;Child － Pugh 分级:A 级 2 例，B 级 32 例，C级 16 例。术前均行化验检查，肝脏 CT 强 化扫描及腹部超声检查，其中 42 例并发腹水。所有 患者均给予保肝降酶(病毒性肝炎肝硬化患者给予 抗病毒治疗)、退黄利尿、输白蛋白或血浆等综合内 科治疗。所有患者均填写《脐血干细胞移植手术知 情同意》。 1. 2 脐血干细胞的采集 选择健康足月怀男胎初 产妇;并排除乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒及其 他传染性疾病和家族有遗传病及肿瘤病史者，无病 理妊娠。填写《脐带血供着健康调查表》和《脐带血 供着同意书》。用装有 ACD － B 保存液的一次性采 血袋，在胎盘娩出前以密闭式采血法采血，采血量要 求大于 70 ml，置于 2 ～ 8℃冰壶中，立即送到干细胞 分离实验室，保存时间小于 6 h。 1. 3 脐血干细胞分离 用负收集法分离脐带血干 细胞，试剂盒由宁夏中联达生物有限公司提供。由 细胞分离专业人员，严格按照操作进行分离提 取，要求全部分离操作必须在万级洁净实验室，局部 百级超洁净工作台内完成;在操作过程中使用的容 器及所接触脐血的物品无菌;干细胞终制品有核细 胞存活率大于 96%，有核细胞收集率大于 85%，干 细胞收集计数大于 2. 0 × 108。以生理盐水稀释到 5 ml，立即送到介入室进行干细胞移植。 1. 4 移植方法 在介入治疗室内，经股动脉穿刺插 管，病人首先进行肝动脉造影、摄像，排除肝癌。 将脐血干细胞液用生理盐水稀释至 20 ml，用微量注 射泵 2 ml /min缓慢从肝固有动脉处注入，注完后用 5 ml 生理盐水冲管，以减少干细胞在导管内的残 存。术后股动脉穿刺处加压包扎，下肢制动 6 h，观 察局部有无渗血，足背动脉搏动是否正常。24 h 后 可以下床活动。 1. 5 术后治疗 术后常规治疗的基础上，加用促肝 细胞生长素，每天 100 mg，静点 14 d。 1. 6 疗效观察 术后 2、4、12、24 w 复查肝功能、 PTA、腹部超声检查，术后 24 w 时行肝脏 CT 检查; 观察患者的临床症状和不良反应。 1. 7 统计学分析 数据以均数 ±差表示，采用配 对 t检验，所有数据采用 SPSS13. 0软件进行分析处理。 2 结果 2. 1 脐血干细胞移植治疗后症状改善情况 患者 均在术后 1 周左右出现精神、体力、食欲明显好转， 原有腹胀、嗳气等症状明显减轻或消失;4 周时患者 不适症状基本消失，多数患者精神、体力、食欲恢复 如常，双下肢水肿消退。 2. 2 脐血干细胞移植治疗前后生化指标的改变情 况 移植治疗后 2 周，Alb 短暂下降，由均值 28. 4 g /L降至 26. 3 g /L(t = 0. 471，P ＞ 0. 05) ，24 周 Alb 升至 37. 3 g /L(t = 6. 522，P ＜ 0. 01) ，ALT 由 56. 9 U /L降至 46. 3 U /L(t = 2. 164，P ＜ 0. 05) ，AST 由 75. 3 U /L降至 50. 0 U /L(t = 2. 552，P ＜ 0. 05) ，TBil 由 45. 3 μmol /L 降至 31. 2 μmol /L (t = 2. 213， P ＜ 0. 05) ，PTA 由 41% 升至 70% (t = 5. 263， P ＜ 0. 01) (表 1)。 表 1 脐血干细胞移植术前后血液生化指标变化情况(x ± s) 时间 Alb(g /L) ALT(U /L) AST(U /L) TBil(μmol /L) PTA(%) 术前 28. 4 ± 3. 1 58. 9 ± 6. 7 75. 3 ± 53. 4 45. 3 ± 24. 1 41 ± 11. 5 术后 2 w 26. 3 ± 3. 6 55. 5 ± 7. 2 70. 5 ± 20. 1 41. 2 ± 22. 0 43 ± 12. 0 术后 4 w 30. 9 ± 4. 1 54. 2 ± 8. 3 56. 5 ± 15. 5 39. 4 ± 25. 0 50 ± 13. 2 术后 12 w 35. 2 ± 5. 7 53. 6 ± 6. 3 54. 6 ± 8. 3 37. 5 ± 17. 5 67 ± 17. 5 术后 24 w 37. 3 ± 5. 5 46. 3 ± 9. 6 50. 0 ± 10. 1 31. 2 ± 11. 8 70 ± 16. 8 2. 3 脐血干细胞移植治疗后 24 w 肝脏 CT 变化情 况 50 例患者肝脏最大截面积由(132 ± 17. 2)cm2 增至(178 ± 20. 5)cm2(t = 2. 583，P ＜ 0. 01) ，肝脏平 扫 CT值由(52. 6 ± 3. 5)降至(49. 3 ± 3. 2) ，无统计 学意义(t = 0. 982，P ＞ 0. 05) ，肝裂缩小。 2. 4 脐血干细胞移植治疗后腹水情况 42 例并发 腹水患者，4 w后腹水减少;12 w 腹水消失 14 例，腹 水明显减少 27 例;24 w 36 例腹水消失，5 例腹水明 显减少，1 例腹水变化不明显。 2. 5 脐血干细胞移植治疗后不良反应 50 例患者 均未出现发热、出血、肝区疼痛等不良反应和并发 症，术后 24 周复查肝脏 CT无一例发现肝癌。 3 讨论 现已证明干细胞在体内外均有极强的向肝系细 胞分化的能力［1 － 3］，干细胞能够长期存活，具有不断 的自我繁殖能力和多向分化潜能，几乎存在于所有 组织中的原始细胞，其表面无血型分子，无 MHC 分 子，不需配血型和 HLA配型。干细胞能有效治疗各 种细胞损伤性疾病是全世界主流医学公认的事实， 通过移植具有分化增殖能力的干细胞，使其在体内 分化成肝细胞，可以代偿部分肝功能，因此干细胞移 植治疗失代偿期肝硬化的研究越来越多。张强 等［4］经肝动脉骨髓干细胞移植及曹葆强等［5］经门 静脉骨髓干细胞移植治疗肝硬化的临床应用均取得 了一定的近期疗效。近几年来脐带血作为造血干细 胞的另一个来源受到广泛关注，脐血中干细胞比例 (下转第 617 页) 416 J Clini Hepatol，December 2010，Vol. 26，No. 6 较治疗前明显下降，但动态观察治疗后 30 d PE 组 和对照组，发现两组间的 MELD 分值差异无统计学 意义，这一结果与两组间三个月内病死率比较的结 果是相一致的。这说明，PE只能通过暂时清除体内 毒素从而改善肝功能，而不能从根本上改善肝脏储 备功能。同时，我们对治疗前不同 MELD 分值的肝 衰竭患者的治疗效果进行比对，结果显示，PE 组不 同 MELD分值的患者进行 PE 治疗后，病死率与对 照组相比均没有明显降低。这提示，对于病情严重 程度不同的患者，在降低病死率疗效方面，内科常规 治疗与加 PE治疗之间并没有统计学差异。然而追 踪预后至治疗后 90 d 发现，PE 组的平均生存时间 比对照组明显延长，说明 PE 治疗可以延长肝衰竭 患者生存期，为肝细胞再生争取时机或过渡到肝移 植。 ［参 考 文 献］ ［1］Isoniemi H，Koivusalo A M，Repo H，et al． The effect of albumin dialysis on cytokine levels in acute liver failure and need for liver transplantation［J］． Transplant Proc，2005，37(2)∶ 1088 － 1090． ［2］Goto E，Tomojiri S，Okamoto I，et al． Methotrexate poisoning with acute hepatorenal dysfunction［J］． Toxicol Clin Toxicol，2001，39 (1)∶ 101 － 104． ［3］Clemmesen JO，Kondrup J，Nielsen LB，et al． Effects of high － vol- ume plasmapheresis on ammonia，urea，and amino acids in patients with acute liver failure［J］． Am J Gastroenterol，2001，96(4)∶ 1217 － 1223． ［4］Biancofiore G，Bindi LM，Urbani L，et al． Combined twice － daily plasma exchange and continuous veno － venous hemodiafiltration for bridging severe acute liver failure［J］． Transplant Proc，2003，35 (8)∶ 3011 － 3014． ［5］Bathgate AJ，Garden OJ，Forsythe JR，et al． The outcome of the first 165 ortho topic liver transplants in Scotland ScottMed ［J］． 1999，44(1)∶ 9 － 10． ［6］Kamath PS，Wiesner RH，Malinchoc M，et al． A model to predict survival in patients with endstage liver disease［J］． Hepatology， 2001，33(2)∶ 464 － 470． ［7］Forman LM，Lucey MR． Predicting the prognosis of chronic liver dis- ease:An evolution form Child to MELD［J］． Hepatology，2001，33 (2)∶ 473 － 475． ［8］刘青，刘铮，王泰龄，等． 应用MELD系统预测慢性重型肝炎的预 后及其治疗效果［J］． 中华医学杂志，2005，85(25)∶ 1773 － 1777． (本文编辑:王 莹) (上接第 614 页) 明显高于成人骨髓及外周血，且与骨髓干细胞相比， 脐血干细胞活力强、自我繁殖能力强、繁殖速度快， 研究证实脐血干细胞可以分化成肝细胞［6 － 8］。将脐 血干细胞输入急性肝损伤大鼠，可在鼠肝脏内检测 到 AFP和 Alb表达及检测到人的 X染色体 DNA［9］， 说明脐血干细胞能在损伤的肝脏中增殖分化为肝细 胞。 本院采用异基因脐血干细胞经肝动脉介入移植 治疗失代偿期肝硬化 50 例，临床效果显著，近期疗 效(0 ～ 4 w)可缓解症状，如腹胀、乏力、纳差症状， 改善精神等;中期疗效(4 ～ 12 w)可改善肝功能:升 高白蛋白、改善凝血功能、降低胆红素、减轻腹水;远 期疗效(12 ～ 24 w)大部分患者肝脏容积增大，肝裂 缩小。显示异基因脐带血干细胞移植治疗失代偿期 肝硬化将有着广阔的应用前景，值得进一步研究观 察、总结和推广应用。 ［参 考 文 献］ ［1］Sell S． Heterogeneity and plasticity of hepatocyte lineage cells［J］． Hepatology，2001，33(8)∶ 738 － 750． ［2］Theise ND，Krause DS． Bone marrow to liver:the blood of Prome- theus［J］． Semin Cel Dev Biol，2002，33(6)∶ 411 － 417． ［3］Crompe M． Mouse liver goes human:a new tool in experimental hepa- tology［J］． Hepatology，2001，33(8)∶ 1005 － 1006． ［4］张强，李京雨，徐力扬，等．经肝动脉骨髓干细胞移植治疗肝硬化 的初步临床应用［M］．中国介入影像与治疗学，2005，2(4)∶ 261 － 263． ［5］曹葆强，林继宗，钟跃思，等．自体骨髓干细胞经门静脉移植治疗 肝硬化与肝功能不全的临床研究［J］．中华普通外科杂志，2007， 22(9)∶ 386 － 389． ［6］Rocha V Cornish J，Sievers EL，et al． Comparison of outcomes of un- related bon morrow and umbilical cord blood transplants in children with acute leukemia［J］． Blood，2001，97(11)∶ 2962 － 2971． ［7］Kakinuma S，Tanaka Y，Chinzei R，et al． Human umbilical cord bood as a source of transplantable hepatic progenitor cells［J］． Stem Cells， 2003，21(3)∶ 217 － 227． ［8］陈海鸥，胡小宣，刘洪娟，等．脐血干细胞移植治疗肝硬化的疗效 观察［J］．肝脏，2010，15(2)∶ 81 － 84． ［9］唐晓鹏，杨旭，张旻，等．脐血干细胞移植治疗肝功能衰竭及心肌 损害的临床与实验研究［J］．中华肝脏病杂志，2005，13(4)∶ 259 － 263． (本文编辑:王 莹) 716临床肝胆病杂志 2010 年第 26 卷第 6 期