结核分枝杆菌快速筛查的现状与展望（中国医学装备）

结核分枝杆菌快速筛查的现状与展望 刘光中、吕尚军、谌云云、呼延军 （北京倍肯恒业科技发展有限责任公司，北京，100020） 1、概述 世界卫生组织于2010年10月13日发布一项行动《 2011－2015遏制结核病全球计划 》，旨在今后五年内遏制结核病在全球的蔓延，力争实现减少结核病死亡人数进而根除结核病的目标。 比尔及梅琳达·盖茨基金会高级项目官员桓世彤指出，结核病是一种“被忽视的疾病”。最近这段时间，关于“超级细菌”的警报让全球的神经高度紧张。但桓世彤指出，由于发病人数多、传染性广泛、有效治疗药物少、治疗复杂等原因，“超级结核菌”其实比“超级细菌”的危害更大。 中国是全球22个结核病高发国之一，西太平洋地区70%的结核病人在中国。据卫生部调查显示，全国约有5.5亿人感染结核菌，现有活动性肺结核病人450万，其中具有传染性的病人150万，每年新增结核病患者约130万。中国80%的病人分布在农村，75%的病人为青壮年。我国一年死于结核病的人数达到13 万，与死于交通事故的人数相当。但这是一种“被忽视的疾病”，媒体与公众对于如何防治结核病仍显漠然。 一个未经治疗排菌的活动性肺结核病人在一年内可以传染15-20人。如果不采取有力的措施，我国每年可使2000-3000万人受感染，新发生200-300万新病人。10年内将有2-3亿人受结核菌感染，使2000-3000万人发病。结核病已超过了一般卫生健康概念，成为阻碍社会发展的一个复杂的社会经济问题。没有任何一种疾病像结核病那样更直接地损害家庭、社会和国家的经济发展。 2、结核分枝杆菌筛查的现状和进展 结核病控制作为我国疾控重点工作之一，已列入国家十一五规划。此外，中国也加入了联合国的千年发展目标（MDG），力争到2015年降低50%的结核病患病率和死亡率，到2050年消除做为公共卫生问题的结核病。要实现这个伟大的目标，结核病的检测和防治是关键。但如何有效的检测呢？   长期以来，结核病的实验室诊断主要依赖细菌学涂片和培养检查。由于方法所限，严重影响了结核病的及时诊断。因此，多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。随着医学技术的发展以及分子生物学技术的进步，陆续推出了快速培养法、噬菌体裂解试验、结核杆菌L型检查、免疫学诊断（结核抗体测定、结核抗原测定、循环免疫复合物测定）、分子生物学诊断（核酸探针、聚各酶链反应、DNA序列测定、基因芯片技术）等结核分枝杆菌诊断方法。结核病的实验室诊断方法取得了较大进步，一些新的实验室诊断技术已在我国得以应用。各种方法的优劣势都比较明显，在实际应用中也还存在一些问题。 在现有的医疗水平和经济状况下，国家对结核病的资金投入和防治力度不断加强，但防治的瓶颈在于缺少一种经济、简便、灵敏、准确的快速筛查手段进行鉴别，严重阻碍后续治疗工作的顺利开展。根据估算，全国每年新增的结核病人约130万，但筛查出来并确诊的不到30万人，检出率仅有20%左右。当然要评价一种新的诊断技术需长期、大量的实验研究和临床验证。只有从不同角度、不同层次来分析存在的问题，并予以足够的重视，制定化试剂、化操作、界定临床含义与使用价值，从而使这些技术更好地为我国的结核病诊断服务。可以相信，随着新世纪科学技术的飞速发展，简便、快速、灵敏、特异的实验诊断新技术将会不断出现，必将成为结核病检测、防疫工作的利器，为我们实现消除结核病的目标打下坚实的基础。但是，因为具有直观、简便、价廉等优点，常规细菌学检查方法仍将是结核病快速筛查的重要手段。 涂片和培养是结核病最基本的细菌学检查方法。痰涂片检查不仅可以明确结核传染源，而且十分经济，符合我国国情。涂片的优点是①简便：技术要求低，不需特殊仪器设备；②快速：当天可得出结果；③价廉：所耗材料价格低廉。涂片的缺点是①敏感性低，通常需5000—10000条菌／ml才能够得到阳性结果；②特异性差，各种分支杆菌均可着色，需要进一步鉴定是否为结核分支杆菌；③无法区别死菌与活菌。培养法的灵敏度略高于涂片法，并是鉴定活菌的可靠方法，还可进一步进行菌种鉴定和药敏试验，被誉为诊断结核病的“黄金标准”。但常规罗氏培养基培养时间长，需4—8周才能出结果，而且阳性率也只有30-40%；同时各种分支杆菌均可生长，需结合菌种鉴定才可确定是否为结核分支杆菌。由于传统涂片法和培养法的阳性检出率偏低，致使大量结核病人漏诊或误诊，严重影响了临床诊治的需要。 20世纪70年代诞生的分枝杆菌快速培养、药敏检测技术是一种新的结核病细菌学检查方法。可显著缩短培养时间（涂阳病例平均阳性天数9—14天），药敏试验只需5－7天，同时阳性检出率约提高10％，且操作简便、自动化强，还可进行快速菌型鉴定。但存在的主要问题是液体培养基中无法观察菌落形态，且污染率高于罗氏培养，并且仪器与试剂价格较贵、有放射性污染，故难以全面推广应用。 根据中国的国情，要同时满足基层医疗卫生机构的推广以及全国结核防疫、控制体系的完善两项需求，涂片法仍然是最适合的结核病实验室诊断方法。涂片检查主要有齐-尼抗酸染色法及金胺O荧光检测法。齐-尼抗酸染色法特异性低，样本不易观察，检测时间长，工作量大，检出率低；金胺O荧光检测法显微镜价格昂贵，操作复杂，对检验人员的素质及实验室环境要求较高。不论是传统抗酸染色法还是传统荧光染色法，痰涂片的染色时间都在20分钟左右，在空气中暴露的时间过长，增加了临床检验人员被传染的风险，并降低了工作效率。如何将传统抗酸染色法的低成本和荧光法的快速、高效结核起来，并有效的缩短制片时间，开发出一套全新的痰涂片检查方法，成为一个迫在眉睫的课题。 要解决这个问题，必须满足四点要求：经济、快速、便捷、可靠。第一、经济：中国作为世界第一的人口大国，同时结核病患病人数也高居世界第二，其中80%的病患都在农村。为满足基层医疗卫生机构推广的需要，仪器成本要低。第二、快速：由于基层实验室环境的限制，为有效的降低结核杆菌传染的可能性，保护检验人员的身体健康，必须有效的缩短痰涂片的染色制片时间。同时，由于荧光法快速、高效的特点，最好应用荧光技术。第三、便捷：由于基层人员素质的限制，如果仪器的操作、维护过于复杂，性能再优越的仪器也很难被充分利用起来。所以，需要仪器的操作、维护简单，而且环境的适应能力要强。第四、可靠：涂片检查法的结果是传染性结核病的重要诊断指标，同时也是结核病疫情流行病学统计的重要依据，所以仪器要稳定，检查结果要准确可靠。 3、展望 德国ZEISS（蔡司）公司和LEICA（徕卡）公司先后推出了可应用于结核病检查的LED荧光显微镜，它们可一定程度的降低荧光显微镜的采购成本，但相对于中国的基层医疗卫生领域，价格仍然偏高。而且，痰涂片的制片仍然需要采用传统的方法，未能从方法学的根本上解决问题。 倍肯公司依靠自身多年研发的经验和技术积累，结合中国的实际情况，采用WHO推荐的LED荧光检测技术，推出倍肯结核杆菌快速检测整体解决方案。该系统采用了寿命长达50000小时的LED荧光光源，仪器成本仅为传统荧光显微镜的三分之一，成本低，持久耐用。模块化设计，安装简单，维护方便，不需要复杂的光路校准，简单培训即可操作。配合仪器使用的特异性金胺O试剂盒，专门针对结核杆菌开发，2分钟染色，1分钟脱色，快速、简便。而且图文分析系统等配套附件及售后服务体系完善，通过向用户提供仪器、试剂、应用技术支持等一站式服务，有效的解决了结核病快速筛查难的瓶颈问题。 结核分枝杆菌快速荧光检验技术的发展和成熟，必将成为推进结核病快速筛查和防治工作的开路先锋，为消除结核病这一公共卫生问题和社会经济问题做出卓越的贡献。 作者姓名：刘光中，性别：男，学历：本科、工学学士， 职务：POCT事业部总监，职称：工程师， 工作单位：北京倍肯恒业科技发展有限责任公司