1992报春花的组织培养和植株再生

第 4期 1992年 意 北 柙 大 学 枉 自 然 科 学 版 3OUR NA~ OF NORTHEAST NORM AL UNⅣ ERS1 No． 1992 cl c：I 报春花的组织培养和植株再生 李彦舫 张亚兰 杨松涛 杨文杰 庞劲松 p7钾．77 — — — — 北师大生物系) 摘要 用报春花叶片、花蕾作外植体。接种在含有不同浓度6BA、NAA的MS培 养基上，诱导愈伤组担形成，经惫伤组骞}增殖和反复切割后诱导其分化出芽和 根 ，然后将试管苗移植到土壤 中。 报春花 (~ ,nu／a 豳 )，是报喜花科报毒花属的二卑生草本花卉。产于云 南、广西西部，其花期长，观赏价值高。多卑来均用种子繁殖，速度较慢。如致 用组织培养法，可大大提高其生产效率。但其组织培养工作在国内外尚束见报 道，为此，我们对其进行 了愈伤组织曲诱 导和植株再生的研究，得到了初步结 果 。 关键词 报毒花，组织培养，植株再生，愈伤组织，试管苗。 1 材料与方法 从健壮植株上取未开放酌花蕾、幼嫩的叶片，用自来水冲洗数遍，洗去表面污染物， 滤纸吸干，放入70 酒精中漂冼30秒钟，然后用0．1 Hgcl滞 液消毒2分钟，再用无菌水 冲洗4—6次，在无菌条件下将叶片切成5tara 左右的小块，接种在培养基上，将花蕾直接 接种在培养基上。 选用 MS为基本培养基 ，附加不同浓度6BA、NAA和 IAA，蔗糖浓度为3 ，琼脂为 0．7 ，CH200mg／L，肌醇200mg／L，PH值为5．8。在25℃下恒温暗处培养 ，待愈伤组织发 生后，转入1500Lux光照下继续培养，温度维持在25+I'C，每天人工光照lod,时，相对 湿度为75—85 ，经诱导分化，壮苗和生根等步骤培养成苗。 2 结果与讨论 ：I 1 惫伤组织的诱1导1 叶片接种后，瞎来后叶表面膨大并卷曲，7～9天后卷曲的叶片开始松开，并逐渐增厚， 半月后在切口处出琊肉眼可见的黄白色瘤状物，即愈伤组织。20天后，瘤状物增多，并逐 渐变红，经继代培养后部分呈绿色，其余则呈肉黄色。 花蕾接种后，’一周后观察，花蕾形成黄白色愈伤组织，半月后，逐渐形成绿色突起 一 9d 一 维普资讯 http://www.cqvip.com 和瘤状钧 (图1)。 诱导愈伤组织培养基基本成分为 MS，附加不同浓度的细胞分裂素及生长素，其效果 如表1。 附加不丽浓度的细胞分裂素及生长索 表l · 对叶爰花蕾愈伤组织谤导的影响 l l 叶 I 花f 6-B．*k I 、 厂 r 1形 伤【诱 率 (ms／L) ml j { J ； l I I敷(堍)I组织披(块)i ，( I敷 (块 1组荨l敷 (块’； (％ 2．0 2．O 1．O m 5 O．2 从表 1看 出，6BA2．0mgL和 NAA0．2mg／L对报舂 花幼 叶愈 伤组 织诱 导率较高， 6BA1．0mg／L和 NAA 0．5mg／L对其花蕾禽伤组织诱导率较高。当培养基中只含有6BA而 无 NAA时 ，花营和幼叶不经过愈伤组织阶段直接诱导成苗 当培养基 中其古 NAA时，花 蕾和幼叶只形成愈伤组织不能分化苗 2．2 芽的分化 将叶片及花蕾禽伤组织转入分化培养基上，20夭后便可见到不定芽从叶片禽伤组织 上分化出来，开始时仅1—2个芽，以后陆续产生，形成丛生芽，再经半月后即长出幼苗。 (图2)花蕾禽伤组织在接种l5天后由黄白色变为绿色，并分化出矮壮、暗绿色的芽，并 逐渐形成丛生芽，进而长出幼苗 (图3)。 诱导分化的基本培养基为 MS，附加不同浓度的6BA、NAA及 L'kA，其效果如表2。 表2 培养基中6BA量对芽分化的影响 6一 B^ (打喀，L) NAA (rag／L) IAA (mg／L) 叶 l 花f 植^盘骺组 化芽的愈∞ 化 织敦 (块)l组织敦 (块)1( ) O 0．0l o．o1 0 5 0．0l 0．0l 1．o o．o1 o．o1 2 0 o．0l 0．o1 0 0 5 3l 23 10 63 25 13 77 20 o 4 76 65 从表2看出，在 NAA、IAA浓度一定的条件下，6BA为2．0mg／L时叶的诱导率较高， 6BA为1．Omg／L对花蕾的诱导率较高。从表1和表2可以看出，不管是由外檀体直接诱导成 苗还是经禽伤组织阶段再分化苗，培养基中都必须有细胞分裂索6BA的存在，可见6BA在 一 95 一 O 驰 “ 驺 盯 O 船 9 6 4 i i 1 3 2 2 1 1 O 轧 盯 O 7 6 5 2 8 3 O 5 i i i 0 O 0 ． ． n n _ 2 2 维普资讯 http://www.cqvip.com lenovo Rectangle lenovo Highlight lenovo Rectangle 诱导报春花叶片和花蕾成苗中起着重要作用。另外 ，在原来诱导愈伤组织的培养基上经二 个多月的时间也有少数的芽分化出来。 ． 2．3 根 的诱 导 通过对几 种培养基及生 长素的试验筛选，认为 3／2MS做 为基本培 养基，附加 NAAlmg／L生根率较高 ，且小苗基部不会产生大量的愈伤组织 ，根从基部生出，生根率达 9O 以上 ，时间大约半个月左右。至此，完整植株 已培育出来 (图4) 2．4 再 生苗的移 栽 当巳分化出的小苗长至2—3era时即可以移出室外，移栽前先打开瓶 口炼苗2天l然后 洗净根部的培养基 ，移入沙石的花盆中，栽后7一l0天要用玻璃盖盖上，’以免过分失水， 待小苗长出新叶后 ，再移到土壤中去 ，成活率达70 以上 (图5)。 TISsI E CULTURE AND PI．AN1[I．ET REGENERAT10N 0F RIM IⅡ，A MLAC0IDES Yang如 ，Z,'m,Ng Yalia~， 。，y唧 咄 Ptr,~- Atmm et Leaf bl ， ade and flower bud of PrimuM wualaioide~ Wets cultured On M S Suppleme~ed with different concentration of 6一 BA and NAA．Callus was~ rived from explant． after callus has T：~en rapidly WaS transfered to me~um that induce Shoot and root_formation．The test--tube plantlet WaS transplanted il1t0 soil． Key Words 叫 mah malacoides，tis~'ure culture，plantl regeneration，callus，test— tube Plant let． 。 维普资讯 http://www.cqvip.com 97 维普资讯 http://www.cqvip.com