疟原虫染色方法

null疟原虫的制片与染色疟原虫的制片与染色山东省寄生虫病防治研究所 魏 庆 宽 0537-2359617,13176785845 weiqingkuan@yahoo.com.cn 各位领导、专家、同志们：各位领导、专家、同志们：血膜的制作（取血操作）血膜的制作（取血操作） 在制作血片前，首先要核对患者的姓名、年龄和住址，详细进行编号。取血部位和血量取血部位和血量 采血部位和取血： 耳垂或无名指，通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血量约一粒大米（即火柴头）大小。 薄血膜的制作薄血膜的制作薄血膜 用推片一端边缘的中点从取血部分①取约1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血液向两侧扩展约② 2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。推制时速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。③薄血膜外观：舌状厚薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处。厚血膜的制作厚血膜的制作 厚血膜 用推片的左下角，从取血部位刮取①约4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个自细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于玻片右1/3处。④厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。血膜的制作（涂片操作）血膜的制作（涂片操作）涂制厚、薄血膜的位置 通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人， 涂2个厚血膜1个薄血膜， 以防血膜脱落而影响检查； 标本片发热病人血片标签null各种不同的疟疾血片涂制法：血片（1人）门诊发热病人血片（1人）居民普查血片（2人）标准的疟疾厚薄血膜位置标准的疟疾厚薄血膜位置null全国疟疾镜检知识与技能竞赛 血片制作和染色质量评价标准 好血片制作质量: 厚血膜：血量 4.0～5.0ul,位置 玻片右1／3稍偏右,直径 0.8～1.0cm，外观 圆形厚膜均匀。 薄血膜：血量 1.5～2.0 ul，位置 玻片1／2～1／3处，外观 舌状厚薄均匀；染色质量 外观兰紫色；清洁度 外观光洁无油灰。 全国疟疾镜检知识与技能竞赛的 竞赛内容及分值比例 1.理论知识竞赛内容为：疟疾病原和诊断基本知识。包括：疟原虫生史，血片制作、染色、镜检操作理论，显微镜使用与维护知识。 2.技能竞赛内容为：制片染色和镜检读片。包括：厚、薄血片的制作和染色；疟原虫的显微镜镜检，确定阴阳性和虫种，定量计数以及显微镜的使用与维护。 3.分值比例：每位选手满分100分，其中理论竞赛20分，技能竞赛80分；技能竞赛中，制片染色15分，镜检读片60分，显微镜使用与维护5分。 全国疟疾镜检知识与技能竞赛的 竞赛内容及分值比例 1.理论知识竞赛内容为：疟疾病原和诊断基本知识。包括：疟原虫生史，血片制作、染色、镜检操作理论，显微镜使用与维护知识。 2.技能竞赛内容为：制片染色和镜检读片。包括：厚、薄血片的制作和染色；疟原虫的显微镜镜检，确定阴阳性和虫种，定量计数以及显微镜的使用与维护。 3.分值比例：每位选手满分100分，其中理论竞赛20分，技能竞赛80分；技能竞赛中，制片染色15分，镜检读片60分，显微镜使用与维护5分。 血膜的制作血膜的制作血膜编号 血膜制成后，立即在玻片面上写上受检者的号码，以防差错；待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内。 制作血膜的注意事项 制作血膜的注意事项1.清洗玻片，且勿碰撞、磨损。 2.刚涂制的血膜要平放，注意防尘、防昆虫吸吮血膜。 厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜；干后应及时装入标本盒并盖严。 3.血膜应自然干燥。 切忌在毒太阳下晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24-48h内固定染色；冬天也不能超过72h。放置时间越久，厚血膜越不易溶血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定（1-3分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入盒内盖严，待以后染色。 姬氏染液的染色方法姬氏染液的染色方法 先用甲醇或无水酒精固定薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后再进行染色。 注意：吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响染色效果. 成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入3%吉氏染液稀释液（3毫升吉氏原液加缓冲液或净水97毫升，混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30min（根据当地实际情况，酌情增减染色时间和浓度），然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。 单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液1-2滴，加中性蒸馏水15-30滴，染色30分钟左右，然后用清水轻轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。 较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原虫的胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。 null操作1 （快染） 配制5%染液，（每张血片约需染液2ml）：量筒内量2ml缓冲液或新鲜凉开水，直接滴加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，染色10min，清水细缓冲洗，晾干镜检。 操作2 (慢染)配制3%染液：在染色量筒内量2ml蒸馏水或新鲜凉开水， 再滴加吉氏原液4滴，混匀，滴入待染标本上，染色30~40min。清水细缓冲洗，晾干镜检。 吉氏染液浓度门诊染色血片制作与染色注意事项 血片制作与染色注意事项 ●使用前载玻片一定要清洁，不然会影响血片制作和镜检结果。 ●厚血膜干燥时不要加热，加热会使原虫变形，影响镜检结果。 ●配置母液时过滤可除去杂质颗粒，有助于提高镜检质量。 ● 固定薄血膜时不要将甲醇触碰到厚血膜 ● 冲洗染液时，不要冲走厚血膜。