C—erbB—2蛋白表达与胃癌转移的关系

· 64 · 安徽医科大学学报 Acta Universitatis Mediclnalis Anhui 2003 Feb；38(1) C—erbB一2蛋白达与胃癌转移的关系 盛 勇 张长乐 管伟宁 周 隽。 摘要 目的 探讨 C-erbB-2基因表达与胃癌浸润、转移的 关系 。方 法 用 免疫组 化方 法检测 3O例 胃癌 C—erbB-2基 因表达情况，并同时检测腹腔脱落癌细胞 ，比较两者的关系。 结果 C-erbB-2基因表达阳性率为 36．7 ，C-erbB-2阳性 染色与胃癌淋巴结转移、病理分期、腹腔脱落癌细胞检出率 密切相关。结论 C-erbB-2癌基因表达参与了胃癌的浸润、 转移机制，对判断 胃癌的预后有一定意义。 主题词 胃肿瘤／病理 学；原癌基因蛋 白质 c—erbB-2类 中图分类号 R392；R394；R735．202 文献标识码 A 文章编号 1000—1492(2003)O1—0064—03 C-erbB-2基因是结构类似表皮生长因子受体 基因的原癌基因，近年来研究表明其过度表达在 胃 癌发生、发展中起重要作用，并与预后不 良有关 。但 研究结果不尽一致。我们应用免疫组化方法研究 了 2002—10—3O收稿，2003一O1—2O修回 作者单位：安徽医科大学第一附属医院 外科、 肿瘤细胞室、。病理 科 ，合肥 230032 作者简介：盛 勇，男，31岁，主治医师，硕士生； 张长乐 ，男 ，49岁 ，教授 ，硕士生导师 3 4 胃癌 C—erbB-2基因表达与 胃癌病理 特征和腹腔脱 落癌细胞检出率的关系，以探讨其在胃癌中表达的 意义。 1 材料与方法 1．1 材料 收集我科 2002年 1～1O月住院的胃癌 患者 3O例，全部病例均经手术切除治疗。胃癌分期 按 1987年国际抗癌联盟 (IUCC)公布的临床病理分 期(PTNM 分期)，工期 4例，Ⅱ期 1O例，Ⅲ期 1O例，Ⅳ期 6例，1例伴肝转移，3例有腹膜转移。 肿瘤切除后胃癌标本常规福尔马林固定，石蜡包埋， 4 m 厚切片，分别行 HE染色和 C—erbB-2免疫组 化染色。并于手术开腹后，如有浆膜浸润 以 4层无 菌纱布覆盖病灶，有腹水直接收集，无腹水则以温生 理盐水(37 C)100 ml冲洗肿瘤所在局部腹腔，轻轻 搅动后收集冲洗液 行常规脱落细胞学 细胞化学染色检查 术的良性疾病患者 ， 2 000 r／rain离心、涂片、固定， 检查及 CK20和 CEA单抗免疫 。 同时收集我科同期住院剖腹手 1O例 ，作为对照组 ；同法收集对 standards for antimicrobial susceptibility testing． Ninth informa— tional supplement．1 999：9～ 10 朱德妹，汪 复，刘陈谊 等．上海地区耐甲氧西林金黄色葡萄球 菌的研究．中华传染病杂志，1988；72(5)：465 张吉怡，何礼贤，胡必杰．耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性研 究．中华医院感染学杂志，1996；6(2)：114 赖宏芳，赵 云，付晓野．葡萄球菌耐药性．中华医院感染学 杂志 ，2000；10(3)：230～1 曹月生，张云志，张淑惠 等．葡萄球菌临床分离株耐药性测定． 上海医学检验杂志 ，1999#14(2)：104 徐德兴，王藤霞，韦莉萍．金黄色葡萄球菌随机引物扩增 DNA分 型与药敏结果分析．中华医院感染学杂志，2002；12(6)：471～2 Analysis of resistance of main gram--positive cocci to antibiotic Xu Yuanhong，W ang Zhongxin，Fang Youbing (Clinical Laboratory of The 1st Atttliated Hospital，Anhui Medical University，Hefei 230022) Abstract Objective To investigate the resistance of main gram—positive cocci in our area．Methods An— tibiotic susceptibility of bacteria was detected by microdilution． Methicillin resistant Staphylococcus was detected by agar dilution with 6 mg／L Oxacillin．High level aminoglycoside resistant Entercocci was detec— ted by agar dilution with 500 mg／L Gentamicin．Results Susceptibility of Vancomycin was 100％ in Staphylococcus aureus and coagulase—negative Staphylococcus，and 98％ in Entercocci． Susceptibility of Rifampin and Timethoprin／Sufamethoxazole was higher than other antibiotics in Staphylococcus．The rate of MRSA，MRSCON and HLAR was 36．3 ，30．6％ and 55．4％ respectively．Conclusion Vancomycin is the first choice antibiotic in treating infectious diseases caused by StaphyIococcus including Methicillin re— sistant Staphylococcus aureus and Methicillin resistant coagulase-negative Staphylococci． Allied treatment shall be used for Enterococci． M eSH gram—positive COCCi：drug tolerance 维普资讯 http://www.cqvip.com 安徽 医科 大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2003 Feb；38(1) · 65 · 照组腹腔冲洗液，行常规脱落 细胞学 检查及 CK20 和 CEA单抗免疫细胞化学染色检查。 1．2 方法 免疫细胞化学染色和免疫组化染色均 采用 SP法 ，C—erbB-2单抗 和 CK20、CEA单抗购 自 福州迈新生物技术有限公司，操作步骤按试剂说明 书，以预试验中阳性胃癌标本作阳性对照，以 PBS 替代一抗作阴性对照。 1．3 免疫染色结果判定 细胞膜或细胞浆内出现 棕黄色颗粒为 阳性细胞 。胃癌组织 C—erbB-2免疫 组化染色以阳性 细胞数超过 5 为阳性 ；腹腔脱落 癌细胞 以冲洗液细胞涂片 CK20和(或 )CEA单抗 免疫染色出现阳性细胞即判为阳性。 1．4 统计学处理 各组间率的比较采用 Fish精确 计算法，所有数据均录入 SPSS统计软件处理。 2 结果 2．1 免疫染色情 况 30例 胃癌 C-erbB-2阳性表 达 11例，1例肝转移和 2例腹膜转移均有 C—erbB-2 表达。CK20和 CEA单抗免疫 细胞化学染 色方法 检 出 13例腹腔脱落癌细胞阳性 ，1例肝转移和 3例 腹膜转移均为 阳性结果(图 1)。 围 1 胃强 C。erbW2蛋白的曩达 ×400 2．2 C-erbB-2蛋白表达与胃癌病理特征的关系 C-erbB-2表达在不同浸润深度和组织类型中，差异 无显著性。在有淋巴结转移组，C—erbB一2表达阳性 率 55．6 ，明显高于无淋巴结转移组 8．3 (P< 0．05)；在 Ⅲ、Ⅳ 期 胃癌，C—erb13-2阳性 表 达 率 56．3 ，高于 I、Ⅱ期 胃癌 14．3 (P<0．05)，见表 1。 2．3 腹腔脱落癌细胞检 出率与 C-erbB-2蛋 白表达 的关系 对照组腹腔冲洗液细胞学检查及免疫染色 检查均为阴性，表明两种方法均有较高的特异性。 胃癌组腹液涂片细胞学检查敏感性较低，脱落癌细 胞阳性率仅为 23．3 (7／30)；脱落癌细胞阳性组较 阴性组 C—erbB-2蛋 白表达为高(51．1 与 13．0 )； 免疫细胞化学染色方法敏感性较高，癌细胞检出率 达 43．3 9／6；细胞学 检查阳性的病例 ，免疫染色 均为 阳性 ；细胞学检查阴性的 23例 中亦有 6例被检出有 脱落癌细胞存在。其结果表明在有脱落癌细胞组 ， C—erbB一2蛋白表达率(61．5 )高于无脱落癌细胞 组 (17．1 ，P<0．05)，见表 2。 表 1 C-erbW2蛋白表 达与胃癌病理特征的关 系 表 2 腹腔脱落癌细胞检出率与C-erbW2蛋白表达 3 讨论 原癌基因 C—erb13-2(又称 neu或 HER一2)属于 酪氨酸激酶癌基因家族，位于人类 17号染色体 q21 区带上 ，与表皮生 长因子受体 (EGFR)基因高度 同 源 ，编码 185ku具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋 白 (P185)，当受到某些致癌因素作用后其结构和表达 失控而被激活，具有肿瘤转化活性 。因为 C-erbB- 2基因激活与 mRNA、C—erbB-2蛋白表达有较好的 相关性，因此检测过度表达的蛋白产物可间接反映 C—erbB一2基 因状 态，从 分 子 水 平 认 识 肿 瘤 的本 质。 。近年来研究 已证实 C-erbB一2异常表达 与乳 腺癌预后不良有关 ，与 胃癌 的浸润、转移也有 关联 ， 但实验结果不尽相同。我们的研究表明 C—erbB一2 阳性表达在有淋巴结转移组 (55．3 )显著高于无淋 巴结转移组(8．3 )；在不同病理分期中，Ⅲ+Ⅳ期 病例明显高于 I+ Ⅱ期，表明随着胃癌的进展，C_ 维普资讯 http://www.cqvip.com ·66 · 安徽 医科 大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2003 Feb；38(1) erbB-2的表达也增强，证实 C-erbB-2癌基因参与了 胃癌的浸润 、转移机制 ，可能与 胃癌的预后不 良有 关，这与大多文献报道一致。 ；本组研究还发现在 4 例有远处转移的胃癌病例 中 3例有 C—erbB-2表达 ， 仅 1例无表达 ，亦说明了 C—erbB-2过度表达与 胃癌 进展程度和恶性度密切相 关。本组 中在浸润 到浆 膜、浆膜外病例其表达虽高于未浸润浆膜组，但差异 并无显著性(P>0．05)，在不同分化程度间其表达 亦无差异 ，与 Uchino等H 研究结果不符 ，他们 认为 随着侵袭深度的增加 C—erbB-2表达增高 ，分化程度 高的胃癌表达率高于分化程度低的。分析原因可能 与本组病例 较少影响结果分析或病 例构成不 同有 关 。 Yonemura等 报道 C—erbB-2表达阳性 的胃癌 易发生腹膜种植转移，是一个短期生存的预后因素。 由于癌细胞的脱落是发生腹膜转移的先决条件，因 此可以通过分析 C—erbB-2蛋 白表达与腹腔脱 落癌 细胞检出率的关系来进一步明确，为此我们重点研 究了C-erbB-2表达与腹腔脱落癌细胞检出率的关 系，检索文献 尚未见相 关报道。采用常规细胞学方 法检测脱落癌细胞，敏感性较低，检出率仅 23．3 ， 阳性组 C—erbB-2蛋 白表达虽较阴性组为高 (51．1 与 13．0 )，但 无统 计学 意义。因此本组中采用 了 细胞免疫化学染色方法，以提高检测灵敏度，使结果 分析更为准确。我们选用 CK20和 CEA 作为检测 指标是因为两者在 胃癌细胞 中均有较高表达 ，而腹 腔中的间皮细胞和粒细胞等其他细胞成分不表达， 因此腹液涂片 CK20和(或)CEA单抗免疫染色阳 性细胞即可判为癌细胞 。结果表明脱落癌细胞 检出率达43．3 ，阳性组 C-erbB-2表达率(61．5 ) 高于阴性组(17．6 ，P<0．05)，提示 C—erbB-2表达 阳性 的胃癌可能更易 于脱落而致腹腔转移 ，并 因此 而有更差 的预后 ，进一步证实 了 Yonemura等 的观 点 。 胃癌 的发生 、发展是以多个原癌基 因激活和抑 癌基因失活为基础的多步骤多阶段过程，其具体机 制 尚未阐明。本组研 究表 明 C—erbB-2癌基 因表达 参与了胃癌的浸润 、转移机制 ，是 胃癌预后不良的指 标之一。 参考文献 1 吕有勇．癌基因与人类肿瘤．见：曾益新主编．肿瘤学．北京：人 民卫生出版社，l999：42～6 2 Nakajima M，Sawada H，Yamada Y eta1．The prognostic signif— icance of amplification and 0verexpressi0n 0f c—met and c-erb B-2 in human gastric carcinomas．Cancer，1999；85(9)：1894~902 3 韩少 良，邵永孚 ，刘秀萍 等．中期 胃癌 nm23、p21和 c—erbB-2基 因的表达及其临床意义．癌症，2000；19(9)：922～6 4 Uchino S，Tsuda H ，Maruyama K et al，Overexpressi0n 0f C— erbB-2 protein in gastric cancer． Its correlation with long—term survival of patients．Cancer，1993；72(11)：3179～ 84 5 Yonemura Y，Ninomiya I，Ohoyama S et a1． Expression of C— erbB-2 oncoprotein in gastric carcinoma．Immu．noreactivity for C— erbB-2 protein is an independent indicator of poor 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exfoliated cancer cells(1 7．6 )．The overexpression of(、-erb13-2 was also relat— ed to the stage of cancer and lymph node metastasis(P< 0．05)．Conclusion C-erbB-2 gene may play a role in the metastasis of gastric cancer． MeSH Stomach neoplasms／pathology；proto—oncogene protein e-erbB-2 维普资讯 http://www.cqvip.com