新春话珍惜

PAGE\*MERGEFORMAT#实验二细菌的革兰氏染色一、目的与要求了解革兰氏染色的原理，掌握革兰氏染色的主要操作步骤，学会革兰氏染色的方法。实验原革兰氏染色法能将细菌分成两大类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。在用乙醇进行脱色时，两种菌的细胞壁结构不同，阳性菌细胞壁为网状结构，比较厚结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，而阴性菌细胞壁比较薄，颜色更容易洗脱出来，所以最终革兰氏阴性菌为红色，阳性菌为紫色。菌种：大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)。染色液：草酸铵结晶紫染液、路戈氏碘液、95%酒精、番红染液。器皿及材料：洁净载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、酒精灯、接种环、镊子、无菌水、洗瓶、染色盘、载玻片架、记号笔、75%消毒酒精瓶、废玻片缸、火柴等。仪器：显微镜。染色步骤：制片：接种环蘸取细菌液置于载玻片，酒精灯外焰加热玻片进行细菌固定。初染：添加结晶紫染色，lmin后倾去染色液，蒸馏水冲洗至无色。媒染：吸干残留蒸馏水后，加入一滴碘液，作用1min，水洗。脱色：吸干残液后，加入95%酒精进行脱色，30s后水洗。复染：吸干残液后，用番红液复染，lmin后，水洗。镜检：吸干残液后，低倍镜寻找目标物体，再用高倍镜放大目标物，目标视野添加香柏油进行观察。平板划线左手中指、无名指和小拇指托住无菌平皿。盖子用食指和拇指掰开，右手持接种环进行第一区划线。酒精灯灼烧接种环至通红，晾凉后进行第二区划线重复(3)进行第三、四区划线将平皿置于适宜温度的培养箱培养过夜。将显微镜下观察到的2个菌种的革兰氏染色结果填于下表中，并描述菌体的颜色、形态、排列方式。