杂酶测定之谷草转氨酶

谷草转氨酶(GOT) 谷草转氨酶(GOT) 原理： L-天(门)冬氨酸+α-酮戊二酸 GOT 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH+H+ MDH L-苹果酸+NAD+ 340nm下测定NADH的消耗速率。 单位定义： 下述条件下，每分钟氧化1 μmol NADH所需要的酶量为1U。 方法： 试剂 A. 磷酸钾-天冬氨酸缓冲液 ：0.1M 磷酸钾缓冲液(pH7.4，含0.5%天冬氨酸) [250mg天冬氨酸(MW=133.1)溶于50 ml磷酸钾缓冲液中，以NaOH溶液调pH至7.4。现用现配] B. α-酮戊二酸溶液 ：3.0% [150mg α-酮戊二酸(MW=146.10)溶于3ml纯水中，以NaOH溶液调pH至7.0，定容至5.0ml。现用现配] C. NADH溶液 ：1% [10mg NADH•Na2(MW=709.4)溶于1ml纯水中。现用现配] D. MDH(苹果酸脱氢酶)溶液 ：约2,400 U/ml [以50%甘油溶液或酶稀释液溶解酶干粉至所需浓度。甘油溶液配制的溶液，一般在4度下可稳定1个月] E. 酶稀释液 ：0.1M 磷酸钾缓冲液(pH7.4) 步骤 1. 准备下述工作液于试管中，25℃保温5分钟。(根据测试样本量，等比例调整) 30.0ml A液 1.00ml B液 0.50ml C液 0.10ml D液 2. 取3.16ml工作液于比色杯中，加0.02ml样本混匀。 3. 340nm下监测30S-180S的吸光度变化速率。 4. 以纯水做空白。 计算 1. GOT体积活力(U/ml)=△OD/min×25.56×df 2. GOT杂酶含量= GOT体积活力/样本酶体积活力=? × 10-xX% 注意事项 1.​ 样本通常为酶干粉且GOT杂酶含量极低，因此以10mg/ml溶液为起点测定。△OD/min很低时，应增大酶浓度至50mg/ml测定； 2.​ 如果测定样本为MDH，请以纯水代替D液。同时样品中的酶体积活力不应低于D液要求的活力。