复件 麝香保心丸和辛伐他汀对兔股动脉粥样硬化斑块稳定性的影响

与方法 l。1动耪分组30只2冀龄健康雄性新西兰兔， 体重1．8—2．2奴，购自申旺实验动物养殖场，喂养1 周后测定血脂数值；然后随机分为3组：(1)对照组 (10只)；(2)辛饯他汀组(10只)；(3)麝香保心丸缝 (10只)。各组均在实验开始时喂养瀚脂饲料，每天 100g。两周后测皿脂确认已形成血脂异常。然后 对所有动物进行殷动脉球囊扩张术。3％戊巴毙妥 钠经耳缘静脉麻醉后，在右大腿近端沿右股动脉走 行处。钝性分离出股动脉约2cm，结扎远端，用血 管夹阻断近端囊流，动脉壁上剪一小溪后捶入球囊 至动脉夹阻断处，连接压力泵以0．5—1个大气压充 盈球囊，缓慢回拉如球囊；重新插入球囊反复牵拉3 次，潋确保内貘撕伤。退高等管，庆大霉素稀释滚冲 洗伤阴。逐层缝合皮下组织和皮肤。术后肌肉注射 庆大霉素8万u一次预防感染。手术后即刻给予药 物于预，每次灌辫蓊称体重。对照缝不给药；辛伐他 汀组2．5mg／kg，以5111l生理盐水稀释后灌胃；麝香 保心丸组每天给予1粒加生理盐水2越灌胃。给 药4周盾处死动物取标本。实验过程中因灌胃意外 或腹泻死亡兔子5只。实验结束时动物数目：对照 组8只，辛伐她汀组9只，麝香保心丸组8只。 1．2药品和试制麝香保心丸(上海穰黄药韭有限 公司)，辛伐他汀(舒降之，杭州默沙东制药有限公 司)，Maverick球囊2。5mmx8Inln、压力泵(波科公 司)，胆固醇(中圈医药集团上海化学试剂公司)，盛 清甘油三酯、低销度脂蛋融、高密度脂蛋白试剂盒 (浙江东欧生物有限公镯)，蛊清总胆固醇试测 盒(上海荣盛生物技术有限公司)、血清基质金漏蛋 白酶3(MMP3)试剂盒(上海广实生物科技有限公 司)，小鼠抗兔CD34抗体、抗兔血管肉皮生长因子 (ⅦGF)抗体、羊抗兔MMP3抗体(美圈SantaCruz公 司)、抗兔a平滑肌肌动蛋白抗体(美圆DAKO公闭)。 l。3观察项目翻捡测方法分别予第1、3、7用处 死前采血。测定斑清总胆瞬醇采用CHOD．PAP法， 甘油三酯用GPO．PAP法，低密度脂缓白采用PVS 沉淀法，嘉密度脂蛋皂用PTA-M乎+沉淀载脂蛋出嚣 (apoB)后取上清液。使用752型分光光度计(上海 棱光仪器厂提供)手动比色读数。 实验第7震采用酶联免疫吸附法测定巍清 MMP3。分别将品和样品加入酶标板的空臼微 孔中。样品孔加入生物素标记液；每孑L加入酶标记 液。37℃孵育反应60肺n后清洗5次。然后每孔加 入底魏A、B液，再次37℃孵育15min。每孔加入终 止液后终止反应。于波长450nnl的酶标仪上读取 各孔的吸光度(A，曾称光密度OD)值。 在实验第7周，将3％戊巴跑妥镳经兔耳缘静 脉麻醉后，在右大腿分离皮肤和皮下组织，钝性分离 出股动脉，结扎远端，用血管夹阻断近端m流，在病 变最明显部位(繇球囊撕痿内膜处)取下股动脉组 织。10％甲醛固定，常规石蜡包埋，间断均匀切片， 切片厚度均为4脚，分别作HE染色和Ma8son三色 染色。普遥澎镜观察缀织病理学变亿。观察者未被 告知所检查标本的分组情况。采用sP法对病理标 本进行免疫组织化学染色。常规4ym石蜡切片，贴 在涂有留片黏合荆翡干净载玻片上，58％烤18h，二 甲苯脱蜡至水。pH7．4，0．1mol／LPBS洗3×3IIlin。 抗原修复后自然冷却。再以PBS洗3X3戚n，然后 将3％琏铙捧麓悫源性过氧化物酶，PBS洗3×3 Inin。6．20％蛋清抑制内源性生物素室温(RT)30 诚n，PBS洗3X3rnin。7．3％BSA降低背景染色，室 滠(RT)30蕊n，不洗。遭当稀释一抗，室温4h，PBS 洗3X3Illin，0．3％H202抑制内源性过氧化物酶。 再以PBS洗3x3越n后，生物素化羊抗免／鼠IsG或 生物素纯兔抗羊转l：2∞(美圈ZymM公司产品) 37％30IIlin；PBS洗3×3戚n。Strepmvdin-HRP 1：20037℃30赫n；PBS洗3×3诚n。O．05％DAB+ 0．03％通02显色8～12洒n，流水冲洗终止反应。苏 木精对比染色30s，水洗，蓝化(37℃)，0．5％盐酸乙 醇分化，水洗蓝化；常规树脂封圈。我们选髑的观察 猎标都与斑块的稳定性密切相关，包括：与斑块内新 生血管有关的指标——血管内皮细胞抗体CD34和 健进血管生长的重要因子VEGF；斑块内基质降解 的相关因子MMP3；斑块内基质合成的裙芙指标胶 原和a平滑肌肌动蛋融抗体。阳性产物为棕黄色或 呈棕竭色，背景为紫蓝色。 1．4 图像处理 图像处理使用IMS细胞图像分析 系统，软件来自上海中腾信息技术有限公词。摄像 枕是Pan_asonicMV-CP410型，使用OlympusBH2显微 镜和Nikon数码相机。通过显徽镜、图像采集卡、数 码相机和CCD摄像机采集数字图像。距离用显微 镜专用校正微尺来标定。操终时用鼠J蠢器选择阴性 或阳性区域，有效阴性区域用蓝色表示，有效阳性区 域用红色表示。每张切片至少分析3个视野，用阳 性送域面积秘鬻性毙率表示。图像采集程分析者均 未被告知所观察标本的分组情况。 万方数据 中华老年0脑m篱病杂志2006年5月第8卷第5期OlinJ‰HeartBrainVesselDis，May2006，Vol8，No．5 1．5统计学方法所有数据用露±s表示，多组间 比较用方差分析，两组间比较用t检验。采用 SPSSl0．0软髂计算。 2结果 2．1动脉粥撵硬化模墅的形态学特点肉限直视 可见，股动脉球囊扩张处管壁明显增厚，有较大的灰 白色斑块形成，使管腔明显狭窄。光镜下可以看到， 斑块中有大量泡沫细魏壤积，细胞之闻有少量腿固 醇结晶；一些血管内皮细胞长人斑块周围；伴有平滑 肌细胞和胶原组织增生。表明本模型包括了人粥样 硬化斑块的主要成分，鄹舞誓渍成分嚣域(泡沫细胞+ 胆固醇结晶)和纤维／平滑肌成分区域。 2．2血脂变化与对照组比较，辛伐他汀组和麝香 傈心丸组能显著降低血清低密度脂蛋自水平；麝香 保心丸降低血清甘油三酯和血清总胆固醇的效果不 显著。辛伐他汀则可显著降低血清腮固醇和甘油三 酯水平，这种调脂作用与麝香保心丸有显著性差异 (表1，2)。 表1药物予蒺蕊兔蛰邋喂养霸蹇毖喂养的 血脂水平(30只，露-I-S，mmol／L) 蝴Ⅱ 高密度舀旨蛋白低密魔8旨蛋白总腮蹰醇甘油三酯 表2药物干预4周后3组的血脂水平(露±s，mmol／L) 缎Ⅱ高毽嬲籍蛋白燃鬟蛋白总嘲薄甘濑捌蓦 淀：与对照组比较，’P<0．05，一P