猪传染性胸膜肺炎病原分离鉴定及防治试验5

猪传染性胸膜肺炎病原分离鉴定及防治试验 边传周, 王老七 (郑州牧业工程高等专科学校生物工程系, 河南 郑州 450011) 中图分类号: S858. 285. 1　　文献标识码: B　　文章编号: 052926005 (2005) 0220025201 　　2003 年 11 月, 河南周口地区某猪场, 在育肥猪 中, 发生了以体温升高、呼吸困难、具有肺炎和胸膜炎 典型症状和病变的传染病, 笔者进行了病原分离鉴 定, 并在猪场进行了防治试验, 如下。 1　与方法 1. 1　病料来源　严重病变的猪肺脏、淋巴结。 1. 2　主要培养基　特制的牛心浸汁琼脂平板 (含 10% 灭能的马血清及 100 Λgöm l NAD )、特制的牛心 浸汁液体培养基 (含 10% 灭能的马血清及 100 Λgöm l NAD )、微量生化发酵管等。 1. 3　标准金黄色葡萄球菌菌株　金黄色葡萄球菌 (A TCC25923)购自中国兽医药品监察所。 1. 4　细菌的分离培养　将病科接种于特制的牛心浸汁 琼脂平板, 置烛缸内, 37℃培养 24 h, 观察培养结果。 1. 5　分离菌株特性检查　 (1)取纯培养的菌落, 涂片 作常规革兰氏染色镜检。 (2)在一系列生化培养基中 加入NAD , 接入浓厚待检菌, 37℃培养 18 h, 观察结 果。(3)用不加NAD 和马血清的牛心浸汁琼脂平板, 将待检物均匀涂布于琼脂面上, 用能够产生生长因子 的金黄色葡萄球菌A TCC25923 菌株培养物划线接 种, 37℃ 培养过夜, 观察卫星生长现象。 (4) 在加 NAD 的牛心浸汁琼脂培养基中加入 5% 脱纤绵羊血 制成平板, 接种培养物后经 37℃培养 18 h, 观察溶血 情况。(5)将分离菌株制成菌悬液, 给 3 只 18～ 20 g小 鼠分别腹腔注射 0. 3 m l(约含 5 亿活菌) , 另 2 只腹腔 注射生理盐水作对照, 观察发病情况 1 周, 并从死亡 鼠肝脏分离细菌并鉴定。 1. 6　药敏试验　将菌落用灭菌生理盐水洗脱, 取 0. 2 m l在特制的牛心浸汁琼脂平板上均匀涂布, 选用 氟苯尼考、强力霉素、恩诺沙星、青霉素、丁胺卡那霉 素、环丙沙星、泰乐菌素七种药敏纸片均匀贴在平板 上, 置 37℃培养 24 h, 观察抑菌环大小。 1. 7　疫苗研制　 (1) 用分离菌种接种于特制的牛心 浸汁液体培养基, 37℃100 röm in 的摇床震荡培养过 夜, 使菌液的含菌量为 5. 0×109 个öm l, 加入0. 2% 的 福 尔 马 林 充 分 混 匀, 37℃灭 活 48 h, 加 适 量 Tw een80 成水相。 (2) 将 10 号白油, Span80、硬脂酸 铝按一定比例混合, 15 磅、30 m in 高压灭菌即为油 相, 将油相加入高速组织捣碎机, 然后缓慢加入一定 量的细菌液, 乳化 5 m in, 分装加塞、压铝盖, 并对该 油乳剂苗进行无菌检验、安全检验等。 1. 8　自家血清制备　用已康复的病猪, 屠宰时无菌 　　收稿日期: 2004203217 操作采集血清, 将血清进行灭活细菌、病毒脱毒处理, 并做无菌检验和动物试验。 1. 9　防治试验　 (1) 取发病猪 40 头 (5 日龄) , 随机 分为 2 组, 第 1 组用氟苯尼考 20 m gökg 体重肌肉注 射, 1 天 1 次, 连用 5 天, 同时在发病时注射自家血清 30 m lö头, 第 2 组用氟苯尼考 20 m gökg 体重肌肉注 射, 1 天 1 次, 连用 5 天, 观察治疗效果 1 周。(2)取上 述发病猪场的 15 日龄乳猪 90 头, 随机分为 3 组, 第 1 组为油乳剂灭活苗免疫组, 在 15 日龄时 1 m lö头, 在 35 日龄时 2 m lö头, 颈部深部肌肉注射。第 2 组为 药物预防组, 25 日龄时用氟苯尼考 25 m gökg 饲料浓 度拌料, 连用 1 周, 第 3 组为空白对照组, 对试验猪按 常规进行猪瘟、猪链球菌病、猪伪狂犬病免疫, 25 日 龄断奶, 并定期消毒, 连续观察 60 天, 及时各组 发病情况和临床表现。 2　结果 2. 1　细菌的分离培养　见有 1～ 1. 5 mm , 圆形、中 间凸起、边缘整齐、灰白色半透明黏液型菌落。 2. 2　形态学检查　分离菌株 24 h 培养物为革兰氏 染色阴性, 两极着染略深的小球杆菌。 2. 3　生化试验结果　该分离菌株对葡萄糖、麦芽糖、 蔗糖和果糖发酵产酸, 尿素酶试验阳性反应呈粉红色, 可在浓厚菌接种后 8 m in 出现, 随后越来越明显。 2. 4　卫星生长现象　在A TCC 25923 生长线附近 生长较好, 离线越远生长越差。 2. 5　溶血试验　该分离菌株为典型的 Β溶血。 2. 6　小鼠致死试验　小鼠均在接种后 18 h 发病, 50 h 左右死亡 1 只, 从死鼠肝脏中分离到较纯的A PP, 余者观察结束后全部康复。 2. 7　药敏试验结果　高度敏感的有氟苯尼考、强力 霉素; 中度敏感的有丁胺卡那霉素、泰乐菌素; 低敏感 的有恩诺沙星、环丙沙星、青霉素。 2. 8　油乳剂灭活菌研制及自家血清制备　该油乳剂 灭活苗经无菌检验、安全检验均正常, 该自家血清经 无菌检验和动物试验均正常。 2. 9　防治试验　 (1) 第 1 组同时使用氟苯尼考和高 免血清治疗, 1 周后还有 1 头猪有呼吸道症状, 剖检 见有肺炎和胸膜炎病变, 19 头猪痊愈 , 治愈率为 95% , 第 2 组使用氟苯尼考, 1 周后还有 4 头猪有呼 吸道症状, 剖检见有肺炎和胸膜炎病变, 16 头猪痊 愈, 治愈率为 80%。(2)预防试验: 第 1 组使用疫苗免 疫后 60 天, 猪只正常, 第 2 组使用药物预防后, 在 60 天内, 共有 3 头猪出现呼吸道症状, 剖检后可见肺炎 和胸膜炎病变, 发病率为 10% ; 第 3 组对照, 在 60 天 52　　Ch inese Journal of V eterinary M edicine　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 中国兽医杂志 2005 年 (第 41 卷)第 2 期 乳胶凝集试验对猪弓形虫病的血清学调查 许应天1, 张国宏1, 宋建臣1, 李　兰1, 金洪范2 (11 延边大学农学院动物医学系, 吉林 龙井 133400; 21 吉林省龙井市动物卫生监督检验所, 吉林 龙井 133400) 中图分类号: S858128519　　文献标识码: B　　文章编号: 052926005 (2005) 0220026201 　　近年来该病在国内时有发生, 给养猪业带来了较 大的经济损失, 同时也给人类健康带来严重威胁, 据 报道, 人群的平均感染率约 25%～ 50%。近几年来, 我们在病例剖检过程中遇到了不少猪弓形虫病疑似 病例。本试验旨在摸清我地区猪弓形虫病的感染情 况, 为今后制定猪弓形虫病的防制措施提供科学依 据。 1　材料与方法 111　被检血清　均由预防兽医学教研室提供, 分别 采自图们市 (40 份)、敦化市 (4 份)、和龙市 (12 份)、 延吉市 (6 份) 和龙井市 (6 份) 等部分猪场, 共 68 份, 保存在- 20℃。 112　弓形虫病乳胶凝集诊断试剂盒　由日本荣研化 学株式会社研制, 内含弓形虫乳胶凝集抗原、标准阳 性血清和缓冲液等。 113　乳胶凝集试验步骤及判定标准　按照诊断试剂 盒说明书进行被检血清的检测, 并记录结果。根据诊 断试剂盒说明书, 抗体滴度 (为半凝集的最高稀释倍 数)小于 1ö16, 判为阴性; 抗体滴度等于 1ö16, 判为可 疑; 抗体滴度大于 1ö16, 判为阳性。 2　结果 211　68 份被检血清的检测结果　对延边地区部分 猪场 68 份血清用乳胶凝集试验检测了弓形虫抗体。 结果表明, 弓形虫抗体阳性率为 1312% , 最高抗体效 价达 256 倍以上。 212　不同地区被检血清的检测结果　来自图们市、 敦化市、和龙市、延吉市和龙井市等不同地区被检血 清的乳胶凝集试验检测结果见表 1。 　　收稿日期: 2004201218 表 1　不同地区被检血清的乳胶凝集试验检测结果 地点 样本数 阳性数 阳性率 (% ) 图们市 40 5 1215 敦化市 4 0 0 延吉市 6 1 1617 朝阳川 6 1 1617 和龙市 12 2 1617 合计　 68 9 1312 213　不同年龄猪血清的乳胶凝集试验检测结果　将 68 份被检血清的乳胶凝集试验检测结果, 按不同年 龄分组制表, 见表 2。 表 2　不同年龄猪血清的乳胶凝集试验检测结果 样本数 阳性头数 阳性率 (% ) 仔猪　 60 5 813 成年猪 8 4 5010 合计　 68 9 1312 3　小结与讨论 311　本试验用乳胶凝集试验对延边地区猪弓形虫病 进行了初步的血清学调查。试验结果表明, 弓形虫抗 体阳性率为 1312% , 证实了近年来我地区猪有弓形 虫感染, 望有关部门引起重视。 312　除敦化外 (样本少) , 其他地方的阳性率之间未 见显著差异, 而成年猪的感染率显著高于仔猪, 这可 能由于成年猪接触病原体的机会比仔猪多所致。 313　目前只发现猫科的山猫属和猫属动物为弓形虫 的终宿主, 而且众多报道表明该病的发生与猫、犬等 有直接关系。因此, 在养猪场禁养猫、犬以及禁止猫犬 等宠物进入养猪场, 是预防该病发生的一种重要措 施。 后, 共有 6 头猪出现呼吸道症状, 剖检后可见肺炎和 胸膜炎病变, 发病率为 20%。 3　讨论与小结 3. 1　该猪场此次发生的传染病, 根据流行病学、临床 症状、剖检变化结合病原分离、生化试验、卫星生长现 象、溶血试验、动物实验确诊为胸膜肺炎放线杆菌感 染。 3. 2　试验结果表明, 猪场发病后, 使用自家血清同时 配合敏感抗生素, 治疗效果良好, 在进行免疫预防时, 使用自家油乳剂灭活苗预防效果良好, 单纯采用抗生 素预防和治疗效果均不甚理想。 3. 3　该病主要通过空气传播, 合理调节饲养密度, 搞 好猪舍环境卫生, 保持良好的通风和适宜的温度, 也 是预防猪传染性胸膜肺炎发生的重要因素。 62 中国兽医杂志 2005 年 (第 41 卷)第 2 期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Ch inese Journal of V eterinary M edicine