胆固醇提取

胆固醇的提取 胆固醇的提取 胆固醇，又称为胆固-5-烯-3β-醇，是胆烷醇5，6位脱氢后生成的化合物。它的分子式为C27H46O,分子量380.6，熔点147～150℃。 胆固醇是高等动物体中的主要甾醇，是细胞膜脂质的成分之一，主要在肝脏中合成。动物组织中胆固醇含量以脑组织为最多，在肝、骨、胰脏、脾和胆汁中较多，心脏次之。猪脑和蛋黄中胆固醇含量高达2%，因此可作为综合利用提取胆固醇的原料。 7-脱氢胆固醇主要存在于皮肤和毛发中，经阳光或紫外线照射后，能转变为维生素D3。胆固醇可以通过化学方法脱氢，生成7-脱氢胆固醇，用于生产维生素D3。此外胆固醇还是配制人工牛黄和合成激素的主要原料。 胆固醇具有液晶性质，溶液具有流动性，其分子能在一定条件下非常有规则地像那样排列起来。胆固醇与不同的脂肪酸制成的胆固醇酯是具有显著温度效应的液晶材料。因此，综合利用猪脑制取胆固醇具有重要价值。 （一）原料及试剂 1.猪脑或骨髓 采集新鲜猪脑或骨髓，保证原料不变质。 2.乙醇 见“凝血酶的提取”。这里用作提取溶剂，选用95%的工业乙醇。 3.丙酮 见“凝血酶的提取”。这里用作溶剂，选用工业级。 4.乙醚 见“凝血酶的提取”。这里用作溶剂，选用化学纯试剂。 5.活性炭 见“从毛发中提取胱氨酸”。这里用作脱色剂，选用医用型。 6.硫酸 见“唾液酸的提取”。用于进行测定时的滴定，选用分析纯试剂。 7.三氯化铁 别名氯化高铁或氯化铁，熔点37℃.用于配制测定胆固醇的分析试剂，选用分析纯试剂。 8.碳酸钠 俗称纯碱或苏打，呈白色晶体。选用化学纯试剂。 9.磷酸 见“用猪血及血粉制备食用蛋白”。用于配制测定胆固醇的分析试剂，选用分析纯试剂。 10.酚酞 用作滴定时的指示剂，选用化学纯试剂。 11.氢氧化钠 见“血红素的制备”。选用化学纯试剂。 （二）提取工艺 1.工艺流程 新鲜脑髓（或骨髓）→（原料处理）→脑干→（提取）→ a.滤渣→（提取）→滤渣→脑磷脂→滤液→卵磷脂 b.提取液→（浓缩）→浓缩液→(离心除杂)→滤渣→（沉淀）→沉淀物→（水洗）→粗品→（精制）→湿品→（去湿）→精品 2.操作步骤 （1）原料处理：将新鲜猪脑或骨髓除去膜及血丝等杂质，绞碎成脑浆，在80℃以下真空干燥至含水量在3%以下（平均每头猪可采脑干品约70克或骨髓干品约50克），备用。 （2）提取：将脑干适量移入搪瓷缸中，加入2倍于脑干量的丙酮（密度约0.79）浸泡24小时，不定时地搅拌，用80目的尼龙布过滤，收集丙酮提取液。在滤渣中再加2倍量的丙酮，浸提12小时后过滤。重复浸提两次，合并全部提取液。滤渣留着提取卵磷脂和脑磷脂用。 （3）浓缩：将提取液抽入蒸发罐中，尽量蒸发，回收丙酮。也可以将滤液在56～58.5℃浓缩至原体积的1/10，回收的丙酮可用于提取胆固醇。 （4）除杂：将以上浓缩液在20～60℃离心分离，除去黄色油状物，滤液用乙醇（工业级）洗涤一遍，用80目尼龙布过滤两次，收集滤渣。 （5）沉淀：将留着加入95%以上乙醇适量（按脑干量加入1～1.5倍乙醇），煮沸至全部溶解后放出，冷却至室温，于5℃以下静置24小时，用双层纱布过滤收集结晶。于结晶中加入2～3千克碳酸钠和50～60℃热水适量，静置片刻后装入白细布袋中揉洗，得淡黄色片状的胆固醇粗品。 （6）精制：取胆固醇粗品适量，加10倍量95%乙醇和2%～2.5%（按100毫升溶液加2～2.5克计）左右的活性炭，加热回流30分钟，用双层滤纸保温过滤。滤液冷至室温后，于5℃以下静置24小时，使结晶完全。趁冷真空抽滤或甩干，以适量95%冷乙醇洗涤，70～80℃干燥，即得精品，装于棕色瓶中保存。成品率为4%。 （7）卵磷脂和脑磷脂的提取：把丙酮酸提取胆固醇后的滤渣加2～3倍95%乙醇，在35～40℃下浸泡12小时（不断搅拌），过滤，分别收集滤液和滤渣。 在蒸发罐中浓缩滤液，然后加入0.5倍量的乙醚，静置3～4小时。过滤收集上清液，在快速搅拌下加入1.5倍量的丙酮，等析出沉淀后过滤收集油膏状物，洗涤、干燥，即得卵磷脂成品。 把滤渣移入搪瓷缸，加等量左右的乙醚，搅拌提取12小时。浓缩提取液，在0℃左右静置12小时。于离心机分出上层清液，在上层清液中加入1倍左右95%的温乙醇，静置沉淀。重复“乙醚溶解→乙醇沉淀”几次，最后过滤，收集沉淀，干燥即得脑磷脂成品。 （三）设备 绞肉机 1台 烘干设备 1套 提取缸 1口 蒸发罐 1个 离心机 1台 搪瓷缸 1口 回流装置 1套 干燥器 1个 72型分光光度计 1台 分析天平 1台 抽滤瓶 1个 容量瓶（100毫升） 2个 纱布 2米 80目尼龙布 3米 移液管（1毫升） 5支 棕色瓶 5个 胆固醇是人造牛黄、维生素D3和合成激素的原料，目前国内市场紧缺。从猪、牛、羊大脑中提取胆固醇，150～200个大脑即可制取1公斤产品，全国各生化制药厂均可收购。 　　一、胆固醇的制备 　　(一)取脑：将新鲜脑或脊髓取出5公斤，去膜及血线等杂质，洗净，搅碎。在80℃以 下真空干燥至含水量在3%以下，轧成小块。平均每头猪可采集大脑干品约70克或脊髓干品 约50克。 　　(二)提取：用冷丙酮浸渍5次，每次用工业丙酮6升，不断搅拌4～5小时(若用干料， 丙酮用量为干重的2倍)，尼龙滤布过滤，滤渣留作提取卵磷脂和脑磷脂，滤液在56～58.5 ℃浓缩至原体积的1/10。回收的丙酮可用于提取胆固醇。 　　(三)除杂：浓缩液在20～60℃离心分离，除去黄色油状物，滤液用冰冷酒精(工业级) 洗涤，尼龙滤布过滤二次，收集滤渣。 　　(四)结晶：将滤出的滤渣溶于80℃热酒精中，置冷库或冰箱6小时，使胆固醇结晶。 反复结晶8～12次，直至干燥成品之溶点达到要求。最后真空干燥，装于棕色瓶中，成品率 为4%。 　　二、质量检查 　　(一)形状：成品为白色或淡黄色有珠光的片状结晶，70～80℃时成无形物。 　　(二)熔点：147～150℃，用毛细管法测定。 　　(三)水分：不超过0.3%(60℃，干燥4小时)。 　　(四)酸度：1克成品溶于10毫升乙醚中，加10毫升0.1N氢氧化钠，振摇1分钟，然 后加热除乙醚，煮沸5分钟，冷却，用10毫升水稀释加2滴酚酞，用0.1N硫酸滴定至粉红 色消失。同法做1次空白试验。二者所消耗硫酸的差值不超过0.3毫升。 　　(五)酒精中溶解度：500毫克成品溶于50毫升温酒精中，室温静置2小时，不得有沉 淀或混浊产生。 食物胆固醇含量（每100克所含毫克表） 牛脑 2670 羊脑 2099 鹅蛋黄 1813 鸡蛋黄 1705 鸭蛋黄 1522 皮蛋黄2015 鹅蛋 704 鸡蛋 680 鹌鹑蛋 3640 皮蛋 69 鸭蛋 634 虾子 896 小虾米 738 青虾 158 虾皮 608 对虾 150 凤尾鱼 330 桂鱼 96 鲫鱼 93 鲤鱼 83 青鱼 90 草鱼 81 甲鱼 77 带鱼 97 平鱼 68 大黄鱼79 马哈鱼 86 鳗鱼 186 梭鱼 128 水发鱿鱼265 墨鱼 275 黄鳝 117 桂鱼子 495 鲫鱼子 460 鱼肉松 240 螃蟹 235 海蛰皮 16 水发海蛰皮5 羊肝 161 牛肝 257 鸭肝 515 鸡肝 429 牛肺 234 羊肺 215 牛心 125 羊心 130 羊舌 147 牛舌 125 牛肾 340 羊肾 340 羊肚 124 牛肚 340 羊肥肠 111 牛肥肠 148 肥牛肉194 肥羊肉 173 瘦牛肉63 瘦羊肉 65 兔肉 83 鸡肉 117 填鸭 101 广东腊肠123 北京腊肠72 火腿肠 70 粉肠 69 蒜肠 61 羊奶 34 牛奶 13 酸牛奶12 炼乳 39 全脂奶粉104 脱脂奶粉28 炼羊油 110 炼鸡油 107 奶油 163 人造奶油 0 花生油 0 水果 0 蔬菜 0 马铃薯 0