大肠埃希菌

·论　著· 大肠埃希菌、克雷伯菌产超广谱 Β2内酰胺酶 的检测及耐药性分析 张润梅, 刘国栋 (山西医科大学第二医院, 山西 太原 030001) 摘要: 目的　研究本院 3 年中大肠埃希菌、克雷伯菌 ESBL s 的检出率及对常用抗生素的耐药情况。方法　对山 西医科大学第二医院 2001～ 2003 年分离的 837 株大肠埃希菌、216 株克雷伯菌用纸片扩散确证法检测其 ESBL s 产生率; 采用 K2B 法进行药敏检测。结果　大肠埃希菌产 ESBL s 分离率为 2001、2002、2003 分别为 12. 27%、15. 90%、30. 85% ; 克雷伯菌产 ESBL s 分离率为 2001、2002、2003 分别为 23. 88%、28. 81%、30. 00% ; 产 ESBL s株对头孢菌素类、氨基糖苷类、氟喹喏酮类耐药率均高于非产 ESBL s 菌株; 未发现对亚胺培南耐药的菌 株。结论　近年来大肠埃希菌、克雷伯菌产ESBL s菌株逐年升高, 应引起足够的重视, 采取有效措施控制产 ESBL s 菌的感染。 关键词: 克雷伯菌; 大肠埃希菌; 耐药性; 超广谱 Β2内酰胺酶 中图分类号: R 378. 2　　文献标识码: A 　　文章编号: 100524529 (2004) 1121305203 D etection of Extended- spectrum Beta Lactama ses and Ana lys is of An tib iotic Resistance in Cl in ica l Isola ted Stra in s of K lebs iella and E scher ich ia coli ZHAN G R un2m ei, L IU Guo2dong (T he S econd C lin ica l H osp ita l, S hanx i M ed ica l U n iversity , T a iy uan 030001, Ch ina) Abstract: OBJECTIVE To invest igate the drug resistance and the p roductive sta tu s of ex tended2spectrum beta lactam ases (ESBL s) in K lebsiella and E scherich ia coli, w h ich w ere iso lated in ou r ho sp ita l from 2001 to 2003. M ETHOD S A to tal of 216 strain s of K lebsiella and 837 strain s of E. coli w ere co llected from clin ical specim ens. ESBL s p roduction w as perfo rm ed by the standard disk diffu sion m ethod, drug suscep tib ility w as detected by K irby2Bauer disk diffu sion m ethod. RESUL TS ESBL s p roductive rate of K lebsiella (E. coli) increased sign ifi2 can tly from 23. 88% (12. 27% ) , 28. 81% (15. 90% ) to 30. 00% (30. 85% ) during the years from 2001, 2002 to 2003. T he resistance of ESBL s p roduction stra in s to mo st an tim icrob ials w ere m uch h igher than tho se of non ESBL s p roducing stra in s. N o strain s w ere found to be resistan t to im ipenem. CONCL USIONS ESBL s p roduction of bacteria has sign ifican tly increased, so it shou ld be paid a great at ten t ion. Im ipenem cou ld be of the first cho ice to treat the infect ion caused by ESBL s p roduction K lebsiella and E. coli. Key words: K lebsiella; E. coli; ESBL s; D rug resistance 　　超广谱 Β2内酰胺酶 (ESBL s)主要产于大肠埃希 菌及克雷伯菌属。ESBL s 能水解绝大多数的头孢菌 素类、青霉素类和单酰胺类抗生素, 且对氨基糖苷 类、氟喹诺酮类和磺胺类交叉耐药, 已成为细菌耐药 的突出问题。近年来, 克雷伯菌、大肠埃希菌产 ES2 BL s 菌株逐年增多, 耐药菌的流行和交叉感染现象 时有报道。而不同地区流行的基因型、耐药性也不尽 相同。我们对 2001～ 2003 年本院分离的大肠埃希 菌、克雷伯菌 ESBL s 的产生率及药敏情况进行总 收稿日期: 2004201215 ; 　修回日期: 2004205226 结, 以其对临床治疗提供指导。1　材料与方法1. 1　材料　标本、菌株来源: 收集 2001、2002、2003年山西医科大学第二医院药剂科药敏实验室分离的患者各类标本。包括痰液、血液、尿液、脓液、胆汁等。质控菌株: 肺炎克雷伯菌A TCC 700603 和大肠埃希菌A TCC 25922。主要仪器和试剂: 细菌鉴定用法国生物梅里埃A TB 微生物鉴定仪; 药敏实验纸片为O xo id 公司的产品。培养基为M 2H 琼脂由O xo id公司提供。 ·5031·中华医院感染学杂志 2004 年第 14 卷第 11 期 1. 2　方法　ESBL s 检测采用美国临床实验室标准 化委员会 (N CCL S) 1999 年推荐酶抑制剂增强纸片 扩散法 1 。用纸片扩散法 (K2B )进行常规药敏检测, 药敏结果判断及质量控制采用美国N CCL S 1999 年 标准。统计方法:W HON ET 25 软件系统。 2　结　果 2. 1　ESBL s 检出率　临床共分离 837 株大肠埃希 菌和 216 株克雷伯菌属。大肠埃希菌 ESBL s 分离率 2001、2002、2003 分 别 为 12. 27%、15. 00%、 30. 85% , 克雷伯菌属 ESBL s 分离率 2001、2002、 2003 分别为 23. 88%、28. 80%、30. 00%。见表 1。 表 1　大肠埃希菌与克雷伯菌属产 ESBL s 株的检出率 (% ) 年　份 大肠埃希菌 n ESBL s+ 检出率 克雷伯菌属 n ESBL s+ 检出率 2001 163 20 12. 27 67 16 23. 88 2002 264 42 15. 90 59 17 28. 81 2003 410 125 30. 85 90 27 30. 00 2. 2　ESBL s 的耐药率　产 ESBL s、大肠埃希菌、克 雷伯菌属菌株对氨基糖苷类、头孢菌素类、氟喹诺酮 类耐药程度明显高于非产 ESBL s 大肠埃希菌、克雷 伯菌属菌株。产 ESBL s 大肠埃希菌、克雷伯菌属菌 株对酶抑制剂复合剂药物的耐药性逐年增长。大肠 埃希菌、克雷伯菌属对氟喹诺酮类药物的耐药性均 呈增高趋势。见表 2、表 3。 表 2　2001～ 2003 年大肠埃希菌产 ESBL s 株与 非产 ESBL s 株耐药率 (% )比较 抗菌 药物 2001 ESBL s- ESBL s+ 2002 ESBL s- ESBL s+ 2003 ESBL s- ESBL s+ IPM 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 T ZP 12. 00 25. 00 12. 35 34. 25 13. 30 33. 30 SCF 0. 00 3. 00 0. 00 5. 92 0. 00 7. 20 FEP 8. 00 12. 02 13. 02 46. 92 46. 70 87. 50 CA Z 8. 20 62. 25 8. 25 89. 82 8. 10 94. 20 CTX 8. 43 63. 71 10. 05 92. 93 14. 32 98. 00 PRL 37. 00 77. 31 41. 20 79. 20 52. 90 98. 36 A TM 12. 00 80. 60 18. 02 84. 00 47. 40 87. 50 AM K 5. 00 21. 80 7. 63 31. 05 10. 00 55. 60 C IP 14. 02 47. 30 19. 72 54. 00 22. 70 95. 00 L EV 9. 21 51. 80 13. 25 70. 21 21. 10 84. 00 CN 20. 02 67. 00 40. 00 74. 29 42. 00 90. 00 3　讨　论 　　随着三代头孢菌素的广泛使用, 产 ESBL s 菌株 临床检出率逐年增高。由于 ESBL s 的基因编码位于 质粒上, 可以通过转化、转导、接合转移等多种方式 在不同细菌之间传递, 因此易造成流行 2 。尤其是多 重耐药性的出现, 常导致临床抗生素治疗的失败和 病程迁延 3 。国内有地区报告 ESBL s 的产生率可达 > 60%。从我院 3 年中ESBL s 阳性率可看出到 2003 年, 大肠埃希菌、克雷伯菌属产 ESBL s 检出率均已 高达 30% , 对经济不发达地区来说应引起高度重 视。 表 3　2001～ 2003 年克雷伯菌属产 ESBL s 株与 非产 ESBL s 株耐药率 (% )比较 抗菌药物 2001 ESBL s- ESBL s+ 2002 ESBL s- ESBL s+ 2003 ESBL s- ESBL s+ IPM 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 T ZP 18. 23 36. 17 22. 70 33. 94 16. 00 20. 00 CSF 8. 15 16. 37 6. 37 19. 34 8. 54 25. 00 FEP 10. 55 60. 35 13. 07 70. 00 19. 72 78. 60 CA Z 11. 67 56. 29 13. 49 62. 34 18. 23 85. 40 CTX 13. 07 62. 57 18. 50 86. 47 23. 68 94. 40 PRP 50. 80 73. 43 53. 26 90. 72 68. 74 92. 30 A TM 25. 27 62. 63 27. 56 69. 35 23. 35 73. 30 AM K 10. 50 50. 00 16. 60 50. 00 25. 10 73. 00 C IP 61. 80 88. 73 68. 90 87. 50 62. 87 82. 00 L EV 42. 33 60. 07 65. 10 82. 40 71. 18 81. 07 CN 48. 74 76. 35 58. 10 80. 00 69. 00 86. 73 　　药敏分析表明, 产 ESBL s 菌株对头孢菌素类、 氨基糖苷类、单酰胺类抗生素耐药性明显高于非产 ESBL s 菌株。产 ESBL s 菌株仅对碳青酶烯类、四代 头孢菌素及三代头孢菌素与 Β2内酰胺酶抑制剂复合 物敏感。其中亚胺培南仍然为最有效的抗生素, 耐药 结果与国内外报道的相同 4, 5 。本调查显示大肠埃希 菌、肺炎克雷伯菌产 ESBL s 株对头孢吡肟的耐药率 高于其他地区的报道 6 , 有待于进一步探讨。从药敏 结果可看出产 ESBL s 菌株对部分 Β2内酰胺酶抑制 剂复合物的敏感率有下降趋势。原因可能与菌株同 时产其他酶有关。从产 ESBL s 菌株的耐药表型推测 本地区主要流行 CTX2M 株, 有待分子流行病学研 究分析。 从表 2 大肠埃希菌、克雷伯菌属非产 ESBL s 对 各类抗菌药物的耐药率逐年提高上可看出, 广谱抗 生素氟喹诺酮类环丙沙星、左氧氟沙星, 耐药率已达 到> 80% , 而且 3 年中有逐年上升的趋势。这与临床 医生经验选药及对广谱抗生素氟喹诺酮类的大量应 用可能有关。临床微生物实验室面临重大的挑战。快 速、准确、合理的检测病原菌并提供可靠的药敏试验 结果是降低耐药菌产生的重要途径。同时也提醒临 床医生要重视病原菌的检测及药敏试验结果的分 析。 ·6031· Ch in J N o socom io l V o l. 14 N o. 11 2004 参考文献: 1 　N ational Comm ittee fo r C lin icalL abo rato ry Standards. Perfo r2 m ance standards fo r an tim icrob ial suscep tib ility test ing [ S . 9th Info rm ation standard M 1002S9. Pennsylvan ia: N CCL S, 1999. 12103. 2 　李真, 戴丽, 张亚莲, 等. 下呼吸道感染产超广谱 Β2内酰胺酶革 兰阴性菌耐药性分析及临床意义, 中华医院感染学杂志, 2002, 12 (1) : 13215. 3 　沈定霞, 周贵民. 产超广谱Β2内酰胺酶细菌的研究进展[J . 国 外医学临床生物化学与检验学分册, 1999, 20 (1) : 24226.4 　Q uale JM , L andm an D , B radfo rd PA , et a l. M o lecu lar ep i2dem io logy of a cityw ide outbreak of ex tended spectrum 2beta2lactam ase2p roducing K lebsiella p neum oniae infection [J . C linInfect D is, 2002, 35 (7) : 8342841.5 　倪语星. 质粒介导的超广谱 Β2内酰胺酶的耐药问题及检测[J . 中华检验医学杂志, 1999, 22 (5) : 3162317.6 　刘朝辉, 陈劲龙, 叶慧芬, 等. 克雷伯菌产超广谱 Β2内酰胺酶的检测及耐药分析 [J . 中华医院感染学杂志, 2003, 13 (4) :3752376. 自含式生物指示剂在干热灭菌效果监测中的研究 朱杏花, 梁金秀, 陈健玲, 郑翠云, 蔡晓云 (中山大学附属一院, 广东 广州 510080) 关键词: 自含式生物指示剂; 干热灭菌; 生物监测 中图分类号: R 472. 1　　文献标识码: B　　文章编号: 100524529 (2004) 1121307201 　　于 2001 年 2～ 12 月采用了 3M 公司型号为 1294 的环氧 乙烷, 自含式枯草芽胞杆菌黑色变种芽胞生物指示剂作干热 灭菌生物指示剂进行生物监测, 同时把同炉灭菌后的石蜡油 送检验科做细菌培养, 并将两者的结果进行了比较, 现将试 验过程报告如下。 1　材料与方法 1. 1　材料　干热灭菌器 1 台, 3M 快速培养器 1 台, 3M 自 含式枯草芽胞杆菌黑色变种芽胞生物指示管 4 支, 需灭菌的 石蜡油、小玻璃瓶 4 个, 眼科镊子 1 把。 1. 2　方法　 (1) 灭菌方法: 取灭菌器上层内、外角各 60 例, 下层内、外角各 60 例做自含式生物指示剂监测, 同时取上 下、层各 60 例送检验科做细菌培养。取 3M 自含式枯草芽胞 杆菌黑色变种芽胞生物指示剂 4 支, 打开生物指示管盖子, 用镊子取出芽胞菌片, 分别放进 4 个小玻璃瓶里。盖上生物 指示管盖子, 用纸塑袋包装, 把空管送环氧乙烷灭菌。把石蜡 油放入干热灭菌器内, 将装有芽胞菌片的 4 个小玻璃瓶分别 置于灭菌器与每层门把手对角线内、外角处。 (2) 实验时间: 经温度 170℃, 灭菌 1 h。待温度降至 80℃, 开门取出芽胞菌 片, 在无菌操作下将菌片放回经环氧乙烷灭菌的生物指示管 内, 置 3M 快速培养器培养, 4 h 后观察结果。在灭菌器上、下 层, 分别取出 2 份已灭菌的石蜡油送检验科做细菌培养。 2　结果与讨论 　　自含式生物指示剂监测结果, 在灭菌器上层内、外角, 下 层内、外角的各 60 例, 全部合格。上、下层均无菌生长。 收稿日期: 2004202219 2. 1　缩短干热生物监测时间, 确保灭菌效果　传统的干热 生物监测法是把灭菌后的芽胞菌片送检验科培养, 7 d 才得 到培养结果, 影响了物品的使用。本研究采用了 3M 自含式 枯草芽胞杆菌黑色变种芽胞生物指示剂, 培养 4 h 可得结 果, 大大缩短了生物监测时间, 确保灭菌效果, 保证物品供 应, 满足临床的需要。 2. 2　完善了干热灭菌的效果监测 　灭菌效果的监测方法, 通常分为物理监测、化学监测和生物监测, 并且只有充分地 将 3 种监测方法有机地结合起来, 才能最有效地表达灭菌过 程的成功, 从而确保灭菌的质量。干热灭菌已有完善的物理 监测和化学监测, 而生物监测只能使用传统的监测方法, 不 能满足临床需要。通过本实验研究, 确立了干热灭菌生物监 测的快速方法, 也证明了监测效果的可靠性, 与传统的监测 方法相比较, 大大缩短了监测时间, 也完善了干热灭菌的监 测方法。 2. 3　灭菌过程要密切观察灭菌温度和时间　干热灭菌重 要的是做好工艺监测, 即灭菌温度和所需时间是否达到要 求。按消毒技术规范要求设定灭菌条件, 灭菌温度 170℃, 灭 菌时间 1 h。为确保灭菌效果, 防止灭菌过程温度下降, 要密 切观察温度和时间, 并做好记录。操作时挂上安全警示牌, 灭 菌过程中不得中途开门放入新的物品, 待温度降至< 80℃才 能开门取物, 以防炸裂。 2. 4　严格无菌操作　将灭菌后的芽胞菌片放回经环氧乙 烷灭菌的生物指示管时, 必须要严格无菌操作, 避免人为污 染而引起假阳性反应。 ·7031·中华医院感染学杂志 2004 年第 14 卷第 11 期