强化胎盘因子对细胞因子产生的影响

第 16卷第 3期 1 9 9 5年 9月 西 安 医 科 大 学 学 报 Vol·16 No·3 JOURNAL OF XI’AN MEDICAL UNIVERSITY September·1995 软 7 7 强化胎盘因子对细胞因子产生的影响 堂皇里 工垡 L／李选社 (卫生微生物学与免疫学教研室 西安 710061) 摘要 在观察了强化胎盘因子对淋巴细胞增殖试验影响的基础上，应用 CTLL一2和 7TD．两种细胞株对强化胎盘因子刺激后的小鼠脾脏细胞分泌 白细胞介素一2(IL 2)和白 细胞夼素一6(IL一6)水平分别进行1实验研究。结果明，强化胎盘因子促进 T淋 巴细胞增 殖 ，使小 鼠脾 脏细胞 分泌 IL一2和 IL一6水平均 明显提 高，有增强机体免疫功能的作 用 关键词 强化胎生旦于 监垦塑盟 薛试验；鱼塑堕坌 一2；白细胞介素一6 胎盘因子是从健康妇女胎盘组织中提取 的 一种 小 分子 多肽 物 质，内含 17种 氨基 酸“’。许多基础研究及临床应用报道均表明 其具有良好的免疫调节作用 ” 对免疫缺 陷症、乙型肝炎、哮喘、银屑病 及某些病毒感 染性疾病、恶性肿瘤等有显著疗效。强化胎盘 因子是在胎盘因子 中加入适量的免疫刺激 剂，以强化其免疫调节作用。本文在观察了强 化胎盘因子对淋巴细胞增殖试验的基础上， 通过动物实验对其刺激后的小鼠脾脏细胞分 泌 自细胞介素一2(IL一2)和自细胞介素一6(IL一 6)水平作了进一步研究。 材卑荨与方法 ． I 强化胎盘因子 由本教研室研 制提 供。为无色针剂 ，2ml／支，内含 lmg／ml多肤 物质“ 2 实验动物 昆明种小鼠，6周～8周 龄，体重 20g左右，由本校实验 动物 中心提 供 。 3 淋巴细胞增殖试验 采用 H—TdR掺 人法 ，常规分离 正常人外周血单个核细胞 (PBMc)，以 10 FCS—RPMI 1 640调整细胞 浓度为 1×10‘／ml，每份样品分为两组 ，取细 胞悬液 lml，加入终浓度为 200~g／ml的 PHA 后 ，一组加强化胎盘因子 0．3ml，另一组加等 量 10 FCS RPMI l 640，置 37℃，饱台湿度 的 5 cO 孵箱培育 30min，离心 ，弃上清后 再分别加 lint 10 FCS—RPMI1 640及 PHA Z00~g／ml，于 37℃，饱 台湿度的 5 CO 孵 箱培 育 72h，终止 培养 前 12h加入 H—TdR (18．5GBq／孔)，培养结束后用多头细胞收集 器收集细胞于 49型玻璃纤维滤纸上，烘干，D 液闪计数仪测定，结果以 CPM 值表示 4 IL一2和 IL一6待测标 本制 备 昆 明 种小鼠 24只，随机分为两组。实验组 12只， 每 日腹腔注射强化胎盘因子 0．5ml／只，对照 组 12只，每 日腹腔注射生理盐水 0．Sml／其． 连续注射 1 5d。第 l6d时，将小鼠去眼球放血 处死，无菌取出脾脏 ，制成单个核细胞悬液． 充分洗涤后调整细胞浓度为 5×10 ／ml，加入 24孔培养板(1mlt~[,)，加入终浓度为 5~g／ml 的 ConA，于 37℃，饱 台湿度的 5 CO 孵箱 培育 48h后，无菌收集上清液，即为 IL一2、IL一 6标本 保存于一20℃冰箱内，待冽 。 5 IL一2活性 洲定。 取对数期生长的 IL-2依赖的 CTLL一2细胞 ，充分洗涤后调整 细胞 浓度 为 l×10 ／ml，加入 96孔培 养板 (1OO ／孔)，再加入待测标本及不同稀释度 的 IL一2标准品各 1oovt／孔，每份标本设置 3 个平行孔。同时设仅加 l0 FCS—RPMI1 640 维普资讯 http://www.cqvip.com l ! 臼 f ． 3期 丁晓红 ，张京田．李选杜．强化胎盘嗣子对细胞因子产生的影响 2。9 lOOttI／孔，作为阴性对照孔。于 37"C、5 C0z 孵箱 培 育 2oh后，加 入 H-TdR(18．5GBq／ 孔)，继续培养 6b后收集标本，0液闪计数仪 测定 CPM 值。用刺激指数 (SI )表示 IL一2 活性 。 sI 一样品孔 而 ／阴性对照孔西 丽 6 IL一6活性测定0 取生长状况良好 的 IL一6依赖的 7TD。细胞，充分洗涤后调整 细胞浓度为 2x 10‘／ml，加入 96孔培 养扳 (1oo．~／孔)，加入待测标本及不同稀释度的 IL一6标准品。每份标本设 3十平行孔，同时 设 l0 FC_S RPMI1 640为阴性对 照孔．于 37℃、5 CO 孵箱中培育 70h，加入’H—TdR (18．5GBq／孔)继续培育 1oh．收集样品，于 8 液 闪 计 数 仪测 定 CPM 值 。用 刺激 指 数 (SI¨ )表示 IL一6活性 。 SI 一样品孔CPM／阴性对照孔cPM 结 果 1 叶淋 巴细胞增 殖反应 的促 进作 用 以 H—TdR掺入法做 淋巴细胞 增殖试验，结 果表明强化胎盘因子对 PHA诱导的 PBMC 增殖反应具有协同促进作用．强胎+PHA组 较单纯 PHA组诱导的 PBMC，增殖反应显 著增强 (P< 0．01)，见表 1。 衰 1 不同诱导物的淋巴细胞增殖试验比较 2 对鼠脾知胞分泌 IL一2水平的影响 小鼠腹腔注射强化胎盘因子后 ．其脾脏 细胞 分泌 IL一2活性水平显著提高 (P< 0．01)， 较注射生理盐水组提高 74．2 ，见表 2。 3 对文脾知胞分泌 IL一6书平的影响 小鼠腹腔注射强化胎盘因子后，其脾脏细胞 分泌 IL一6，活性水平显著提高 (P< 0．01)， 较注射生理盐水组提高 57．O 。见表 2。 衰 2 强化胎盘因子促进旦脾细胞分泌 IL一2、IL·6 讨 论 资料表 明，胎盘因子具有广泛的免疫学 活性。如转移迟发型变态反应，增加老龄动物 胸腺的重量，恢复其功能，促进外周血白细胞 增殖，提高小 鼠血清总补体水平，促进吞噬及 增强脾脏合成抗体，以及降低 自身抗体的产 生与脑内的自由基等 ，并认为是一种 良好的 抗衰老制品。～。强化胎盘因子是以胎盘因子 为基础并增强其作用。本实验通过对淋巴细 胞增殖试验，小鼠脾脏细胞分泌IL一2和 IL一6 水平的研究，对强化胎盘因子增强机体免疫 功能的理论依据作了进一步证实。 IL一2是一十免疫应答环节中不可缺少 的细胞因子 ，对 T细胞 的活化、增殖及发挥 其细胞免疫功能具有重要意义。IL一2可加强 T细胞抗病毒活性 ，在免疫缺损状态下可增 进免疫功能，还被 用于肿瘤免疫治疗中 ”。 IL一6是机体内复杂的细胞因子网络中的关 键成份，对维持机体的生理平衡具有重要作 用，主要影响成熟的 B细胞产生 I M、IgG和 IgA。”。IL．6还有抗病毒等作用。李恩善等曾 报道胎盘因子促进淋巴细胞增殖反应 ，提高 PBMC分泌 IL一2水平。’，而其对 IL一6产生 水平的影响尚未见报道。本文结果与李恩善 等的报道一致．淋巴细胞增殖反应增强，动物 体内实验鼠脾细胞分泌 IL一2水平显著提高， 同时鼠脾细胞分泌 IL一6水平亦显著提高，表 明强化胎盘因子不仅提高机体细胞免疫功 能，同时可进一步影响体液免疫功能．从分子 水平上阐明了其调节机体免疫的部分机制。 强化胎盘因子促进淋巴细胞增殖，使 细 胞因子 IL一2和 IL一6的分泌水平显著提高， 维普资讯 http://www.cqvip.com 240 西 安 医 科 大 学 学 报 第 1 6卷 表明其在调节机体免疫功能方面具有重要作 用。同时经动物与人体试验表明无任何毒副 作用。因此，强化胎盘因子作为一种来源广 迂、易于制备 、安全的生物制品 ，在抗感染、抗 衰老、防治肿瘤及提高机体免疫功能等方面 ， 可望 得到广泛应 用。 参考文献 ● 1 刘 月新 ，王勋楚 ，段茂芳 ．等 一种新的免谴调节 剂．中国免疫学杂志．1985{5(1)-51 2 陈云样 ，文美华 ，刘洪．胎盘园子洽疗反复发作性 小儿支气管哮喘 l8倒的疗效观察．中国实验 临 床免疫学杂志，1989I1(1～2)-46 3 马布仁，事豪华．谢秩勋 ．等．胎盘肽免疫活性的 实验研究．解放军医学杂志 ，1 988I13(5)-335 4 贾万钩 ，韩志涛，刘建传．胎盘制剂的抗衰老研究 I(抗衰老免疫指标观察)．老年学杂志．1988}8 (4)}233 5 枥琨 ．金伯泉．李恩善 ，等．胎盘因子对机体细胞 免疫功能的调节作用．中国中西医结合杂志． 1998I12(8)I 487 6 曹金旭，于宪基．张放 中，等．胎盘肽治疗匣复 呼 吸道 感染 儿童的疗 效观察．上簿 免 疫学杂 志 1 992{12(3)：1 67 7 李恩善 ．董邦全 ，扬琨，等．胎盘免疫调节因子理 化性质及生物学活性的实验研究．上簿免疫学杂 志，I 993j18f4)：204 8 案 演 ．临床免疫学技术．上海：上海 科学技术出 版社．I 982：3O9～318 9 Gills S，Ferm M M ．OuW ，et a1．T cell growth factor=paramaters of production and a quanti ra— tire microasssy． J Immunol， I 978{120 l 8) 2027 l0 朱再．金伯泉．孙 比，等．用 7TD．细胞检测 IL一6 生物活性 方法的改 良 上海免疫学 杂志．1992； 12(2) ：106 11 张浦 白细胞介索一8(IL一2)在件 内作用的研究． 国外医学免疫学分册 ，1985}2-70 12 bfurag,,chl A Hiraao T，Taug B，et a1 Tke essential role of B ce]l stimu]atory fact0r 2 (BSF一2I'lL一6)f0f the terminal differentiati0n ot B cells．J Exp M ed，1988_167(1)_332 ／I 994 08 24收搞 1994—07 1l修旧’ THE EFFECT OF ENHANCED PLACETA FACTOR(EPT) 0N THE PRODUCTION OF CYTOKINES Zang Jingtlan'Ding Xiaohong·Lj Xuanshe．et al (Department of Public Health Microbiology and ImmunogoKy) Abstract W e observed the effect ot EPF oa perime~t showed tkat EPF couId pfom tk pr删 thelymphocyte proliferationtest，and usingCT LI-8 eratlon。f T lymphocyt s，the c0n ts 0fIL伽2 d and 7TD】，as the effector cell lines．observed the IL一6 produced by the murine pieen ce】I5 wer siⅡ一 eonaents of IL一2 and IL。8 produced by the murine nificantly elevated ． it c。uId in】pfove th im r|1LlTl spleen cells which were stimulated by EPF．The ex- functl0n ． Key珊 rds enhanced placeta factor(EPF)j lymphocyte proliferation test j inter leukin一2 l in r leukin 一 6 维普资讯 http://www.cqvip.com