间接荧光法测定维生素=

第!"卷#第$期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 %&’(!"#)&($#**"+,-.// !//"年 $月 0*1234&52&*67890*12347’:87’65;5 :*4;’ <<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<< #!//" 间接荧光法测定维生素= 童裳伦#项光宏#刘维屏 浙江大学环境科学研究所#浙江 杭州 >?//!+ 摘 要 实验发现#抗坏血酸在水溶液中能将无荧光的铈@AB离子还原成能发射特征荧光的铈@CB离子# 加入六偏磷酸钠溶液#可使体系的荧光强度大大增强#由此建立了灵敏间接测定抗坏血酸的新D用?2E 石英比色池在激发和发射波长分别为>/>和>$/8E处测定其荧光强度F抗坏血酸在?(/G?/HIJ,(/G?/H. E&’KLH?浓度范围内与体系的荧光强度呈良好的线性关系#相关系数为/(+++I#检出限为?(.G?/H,E&’K LH?@MNOP>BD 主题词 抗坏血酸F铈@AB离子F六偏磷酸钠F荧光分析法 中图分类号QR."I(> 文献标识码Q: 文章编号Q?///-/"+>@!//"B/$-/"+,-/> 收稿日期Q!//$-/?-?>#修订日期Q!//$-/"-?> 基金项目Q国家自然科学基金S浙江省自然科学基金与浙江省分析测试基金资助项目 作者简介Q童裳伦#?+.+年生#浙江大学环境科学研究所副教授 引 言 维生素T化学名称为抗坏血酸#主要用于预防和治疗坏 血病#也可用于各种急慢性传染性疾病及紫癜等的辅助治 疗D抗坏血酸在人体内有重要作用#能参与糖代谢及氧化还 原过程#能促使组织产生细胞间质#减少毛细血管的通透 性#且具有抗组织胺的作用及阻止致癌物质@亚硝胺B生成的 作用等D 目前用于抗坏血酸测定的方法主要有分光光度法U?#!VS 滴定法U>VS生物传感器法U$VS高效液相色谱法U"#.VS荧光 法UIVS化学发光法U,V等D本文利用抗坏血酸在水溶液中能将 无荧光的铈@AB离子还原成能发射特征荧光的铈@CB离子# 同时加入六偏磷酸钠溶液#可使体系的荧光强度大大增强# 由此建立了灵敏间接测定抗坏血酸的新方法D该方法用于维 生素T片的测定#结果令人满意D ? 实验部分 W(W 试剂 抗 坏血酸标准溶液Q准确称取/(,,/IX抗坏血酸标准 品@汕头新宁化工厂#分析纯B#用蒸馏水溶解并定容至 "/ EL#制得浓度为?(/G?/H?E&’KLH?抗坏血酸储备液#保存 于冰箱@$YB中备用D使用时用蒸馏水按所需浓度进行适当 稀释#经稀释的标准液使用不超过一天D 铈@AB标准溶液Q准确称取 /(!/!!X二硫酸铈标准品 @上海跃龙有色金属有限公司#分析纯B#用蒸馏水溶解并定 容至?//EL#制得浓度为"(/G?/H>E&’KLH?的铈@AB离子 储备液D使用时用蒸馏水按所需浓度进行适当稀释D 六 偏磷酸钠标准溶液Q准确称取/(.?!/X六偏磷酸钠 标准品@温州市东升化工试剂厂#分析纯B#用蒸馏水溶解并 定容至!"/EL#制得浓度为?(/G?/H!E&’KLH?的六偏磷酸 钠储备液D使用时用蒸馏水按所需浓度进行适当稀释D W(Z 仪器 [\-"$/荧光分光光度计@日本岛津公司B#*]0-+%型酸 度计@杭州华光无线电厂BD W(^ 实验方法 在!"EL比色管中#分别加入?EL一定浓度的抗坏血 酸溶液#?EL浓度为>(/G?/H$E&’KLH?的铈@AB离子标准 溶液和?EL浓度为?(/G?/H>E&’KLH?的六偏磷酸钠标准溶 液#然后用蒸馏水稀释定容至?/(/EL#摇匀并放置!/J>/ E;8D在激发波长为>/>8E#发射波长为>$/8E处#于?2E 比色池中测定荧光强度#狭缝宽度为?/8ED ! 结果与讨论 Z(W 荧光光谱 T1@AB-抗坏血酸ST1@AB-六偏磷酸钠ST1@AB-抗坏 血酸-六偏磷酸钠体系的激发和发射光谱如图?所示D由图? 可见#在激发波长>/>8E下#T1@AB-六偏磷酸钠体系在>$/ 8E处并无明显的T1@CB特征荧光峰#而T1@AB-抗坏血酸体 系则发射出微弱的T1@CB特征荧光峰#这明抗坏血酸将T1 @AB还原成T1@CBD加入六偏磷酸钠后#体系荧光强度大大 增强#表明六偏磷酸钠对体系的荧光强度起明显的增敏作 用D 万方数据 !"#$% !&’()*+,*-,*+.*,/)0 123456789:;<=>?;9;?@A B2345678:<@?CDE4F9D4G9HE<:HE9G4A I23456789:;<=>?;9;?@8:<@?CDE4F9D4G9HE<:HE9G4 J$J 体系荧光强度的影响因素 B$B$1 HK对荧光强度的影响 试验了HK在B$LM11$N范围内对体系荧光强度的影响 情况2结果如图B所示O由图B可以看出2荧光强度在HKB$L MP$L范围内保持稳定2而当HKQP$L后荧光强度略有增强2 但增加不大O基于体系荧光强度在HKB$LMP$L范围内保持 稳定2而待测溶液与加入试剂溶液的HK均能控制在该HK范 围内2因此未采用缓冲溶液来调节体系HK值2同时也避免 了由于使用缓冲溶液而引入的干扰因素O !"#$J RSS*,/(S.T(-/U*S&’()*+,*-,*"-/*-+"/V !"#$W RSS*,/(SX*5Y7,(-,*-/)0/"(-(-/U* S&’()*+,*-,*"-/*-+"/V 3?;9;?@\ ]2N^ 1L_‘D设计

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