GB 18932.22-2003-T 蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法

GB/T 18932.22-2003 月Ii 吕 GB/T 18932的本部分等同采用加拿大ACC-017-V2. 0((蜂蜜中糖类的测定— 液相色谱法》， 只对个别内容作了编辑性修改。 本部分的附录A为资料性附录。 本部分由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。 本部分由中华全国供销合作总社归口。 本部分负责起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。 本部分参加起草单位:国家蜂产品质量监督检验中心。 本部分主要起草人:庞国芳、曹彦忠、李子健、贾光群、范春林、张进杰、李学民、石玉秋。 本部分系首次发布的国家标准。 GB/T 18932.22-2003 蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖 含量的测定方法 液相色谱示差折光检测法 1 范围 GB/T 18932的本部分了蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法。 本部分适用于蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定。 本部分的方法检出限:果糖、葡萄糖、麦芽糖为0.5%，蔗糖为。.2%. 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T 18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB/T 6379 测试方法的精密度 通过实验室间实验确定标准测试方法的重复性和再现性 (GB/T 6379-1986,neq ISO 5725;1981) GB/T 6682 实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696;1987) 3 原理 试样用水溶解，乙睛定容后，经0. 45 pm滤膜过滤，液相色谱示差折光检测器测定，外标法定量 4 试剂和材料 4.1 乙睛:色谱纯。 4.2 水:GB/T 6682规定的一级水。 4.3 果搪、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准物质:纯度)99%. 4.4 果糖、葡萄糖标准储备溶液:准确称取5g果糖标准物质和4g葡萄糖标准物质，精确至。.000 1 g，放 人同一100 mL容量瓶中，加人60 mL水溶解，用乙腊定容至体积，摇匀。 4.5 蔗糖、麦芽糖标准储备溶液:分别称取2g蔗糖和2g麦芽糖标准物质，精确至。. 0001 g，放人同一 100 mL容量瓶中，加人60 mL水溶解，用乙腊定容至体积，摇匀。 4.6 果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准工作溶液:吸取不同体积的果糖、葡萄糖标准储备溶液(4.4)和蔗 糖、麦芽糖标准储备溶液((4.5)，用乙睛十水((40+60)稀释至体积，配成不同浓度的果糖、葡萄糖、蔗糖、 麦芽糖标准工作溶液，用于绘制标准工作曲线。每种标准储备溶液的用量和定容体积见表 l: 表 1 序号 果糖、葡萄糖 储备溶液体积/ .L 蔗糖、麦芽搪 储备溶液体积/ .I 定容体积/ .L 标准工作溶液浓度八g/100 mL) 果糖 葡萄糖 蔗糖 麦芽糖 1 2.0 }} 1.00 0.80 0.050 0.050 2 3.0 0. 500 10 1.50 1.20 0. 100 0. 100 3 4. 0 1.0 10 2.00 1. 60 一一 4 }{ 10 2. 50 2.00 0. 40 { 5 一} 25 3.00 }一 0. 6。 一一 GB/T 18932.22-2003 5 仪器 高效液相色谱仪:配有示差折光检测器。 分析天平:感量0. 1 mg和0. 001 g各一台。 注射器:10 ml,. 有机相过滤膜:0.45 acme 样品瓶:1. 5 MI。 容量瓶:10 mI,,25 mL,50 ml?100 ml.. ? ， ? ? ? ? ， ? ? ???? ? … ? ? ?? ??? ? ?? ?? 5.6 6 试样制备与保存 6.1 试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴 中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出。.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶 中，密封，并做上标记。 6.2 试样的保存 将试样于常温下保存。 7 测定步骤 7.1 提取 称取5g试样，精确至。. 001 g。置于100 ml烧杯中，加人30 mL水，用玻璃棒搅拌使试样完全溶 解，转移至100 ml容量瓶中，然后再用10 mL水洗烧杯三次并转移至上述100 mL容量瓶中，用乙睛定 容至体积，混匀。用。.45 pm滤膜将样液过滤人样品瓶中供液相色谱测定。 7.2 测定 7.2. 1 液相色谱条件 a) 色谱柱:碳水化合物分析柱10 pm, 300 mmX3.9 mm(i. d); b) 流动相:乙睛+水((77+23); c) 流速:1. 0 ml,/min; d) 柱温;25℃; e) 检测器池温度:35`C; f) 进样量,15 1cL, 7.2.2 液相色谱测定 用配制的果搪、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准工作溶液(4.6)绘制以峰高为纵坐标，工作溶液浓度为横 坐标的标准工作曲线，保证样品溶液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的响应值均应在标准工作曲线的线性 范围内，样品溶液与标准工作溶液等体积进样进行测定。在上述色谱条件下，果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽 糖的分离度应大于1.5，其参考保留时间见表1; 表 1 糖类名称 保留时间/min 果糖 7. 804 葡萄糖 8. 973 蔗糖 12.521 麦芽糖 15. 177 GB/T 18932.22-2003 果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准物质色谱图参见附录A中的图A.1, 7.3 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.4 空白试验 除不称取样品外，均按上述步骤进行。 结果计算 结果按式(”计算: V n 二二 ‘ . — 刀1 二‘··.·..······。。··。。⋯⋯(1) 式中: X— 试样中被测组分含量单位为克每百克(g/100 g); c— 从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为克每百毫升(g/100 ML); V一 样品溶液定容体积单位为毫升(mL) ; ，— 所称试样的质量，单位为克(9)。 注 计算结果应扣除空白值 精密度 本部分的精密度数据是按照GB/T 6379的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95%的可信度 来计算。 9.1 皿复性 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(:)，蜂蜜中果糖、葡萄糖、 蔗糖、麦芽糖含量范围及重复性方程见表2. 衰 2 含t范围及重友性和再现性方程 名称 含量范围八g/100 g) 重复性限r 再现性限R 果糖 21. 31- 39. 62 r=一0. 009 5 m+0. 542 0 1g R=0. 452 9 Igm一0. 597 8 葡萄糖 20. 54^ -36. 15 r=一0. 009 4 m+0. 412 7 Ig R=O. 090 5 Igm-0. 423 6 蔗塘 0. 22^ -5. 95 r=一0. 011 5 m+0. 157 9 R=O. 001 1 m+0. 214 9 麦芽糖 0. 98-6.99 r=-0.004 7 m+0. 162 3 Ig R=O. 147 4 Igm一0. 812 2 如果差值超过重复性限((r)，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。 9.2 再现性 在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，蜂蜜中果糖、葡萄糖、 蔗搪、麦芽糖的含量范围及再现性方程见表2, ????? ???????? ? ?? GB/T 18932.22-2003 附 录 A (资料性附录) 标准物质色谱图 果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准物质色谱图，见图A. 1, ? ? ? ? ? ? 7.804 min 为果箱 8.973 min 为荀萄抽 12.521 min 为度箱 15.177 mm 为麦芽箱 图 A