糖化血红蛋白测定方法学评价

检验医学与临床 2007年 5月第 4卷第 5期 Lab Med Clin，May 2007，Vol 4，No 5 糖化血红蛋白测定方法学评价 李顺君，黄文芳，饶绍琴，董 魏 (四川省人民医院检验科，成都 610072) 【摘要】 目的 采用 自动生化仪免疫抑制比浊法测定糖化血红蛋白(HbAlc)的可靠性。方法 根据美国 国家实验室委员会 EP5一A、EP9一A文件要求进行精密度、准确度和线性范围的评价实验。结果 该方法的批内 和批间CV％4．00％，实验总不精密度：HbAlc为 4．85 0A时，CV为 2．8O％；HbAlc为 1O．7O 时，CV为 1．90 。 HbAlc在 3．00％ 一21．00％范围内线性 良好 。与 BioSystems(Spain)公司的微柱法进行方法学比较( 一84，Y一 1．038 5x+0．050 4，r一0．966 8，P>0．05)。结论 按照美国临床实验室进修正案 88的要求，以美国糖尿病协会 要求的允许误差标准，HbAlc的总不精密度不超过 5％来判断，免疫抑制比浊法测定 HbAlc的结果符合临床对糖 尿病患者的治疗监测要求，该方法能进行自动化分析 ，免去手工操作，具有快速、准确、简便等优点，可推广使 用 。 【关键词】 免疫抑制比浊法； 糖化血红蛋 白； 微柱法 中图分类号：R446．111 文献标志码：A 文章编号：1672—9455(2007)05—381—01 糖化血红蛋白(HbAlc)作为糖尿病筛选、诊断、血糖控制、 疗效考核的有效监测指标，在临床中得到了广泛使用，2002年 美国糖尿病协会已将其作为监测糖尿病血糖控制的金标准 。 检测 HbAlc的方法很多，有高效液相色谱法(HPLC)、离子交 换层析微柱法 、免疫抑制比浊法、电泳法等，HPLC被列为参考 方法 ，但需要非常昂贵的仪器；离子交换层析微柱法基本上是 手工操作 ，影响因素多。本科引进免疫抑制比浊法在自动生化 分析仪上检测 ，为了检测结果准确可靠 ，在投入使用之前 ，进行 了基本性能的分析评价。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 实验对象的选择 收集本院门诊和住院的糖尿病患者 和健康体检者的乙二胺四乙酸二钾抗凝血，共 84例，其浓度选 择按照美国国家实验室标准化委员会(NCCLS)EP5一A、EP9一A 文件中的要求 。 1．1．2 试剂和仪器 HbAlc免疫试剂盒，相应的校准品和质 控 品，由 Roche公 司提 供。微 柱 法 试 剂 盒 由 BioSystems (Spain)公司提供。仪器为 日立 7060全自动生化分析仪。 1．2 方法 1．2．1 免疫抑制比浊法和微柱法测定 HbAlc，根据试剂盒使 用对全血标本作预处理和检测。自动分析仪主要测定 参数 ，见表 1。 表 1 自动分析仪主要测定参数 1．2．2 准确度评价 根据 NCCLS EP9一A文件要求，作方法 381 学比对实验。每天收集标本 8～10例，分别用免疫抑制比浊法 和微柱法测定，连续测定 5 d，共计 84例标本。两种方法测定 结果做好记录，以免疫抑制比浊法测定结果为 Y轴，对 比方法 微柱法为 X轴 ，进行回归分析和卡方检验。 1．2．3 精密度评价[2 根据 NCCLS EP5一A文件要求，作精 密度评价实验。选择具有医学决定水平的正常和异常浓度的 样本，为 Roche公司 的 HbAlc正常质 控物 和异常 质控 物 (HbAlc百分率分别为4．85 和 1O．7O％)。在校准的当天每 隔 1 h测定 1次，共测定 1O次，计算出均值、标准差和CV值为 批内精密度 ；批间精密度每天取出这两种质控物各 1例 ，放置 室温均匀混合后，用免疫抑制比浊法测定，连续测定 20 d，所有 测定均为双管平行测定，计算出均值 、标准差和 CV值为批间 精密度。 1．2．4 线性评价[3 从本院收集 HbAlc高的糖尿病患者的 全血，混合后为 H标本，当天同时收集本院健康体检者 的全 血，混合后为 L标本。按照 5／5 L、415 L+1／5 H、3／／5 L+2／5 H、2／5 L+3／5 H、1／5 L+4／5 H、5／5 H的比例配制成一系列 浓度的样本。对每例样本作 3次重复测定 ，记录结果。根据 配制关系可以计算出 6例样本的 HbAlc百分率 ，为这些样本 的预期值，将这些样本检测得到的检测值为实测值。以预期 值作横坐标，实测值作纵坐标 ，作直线 回归分析，观察其线 性范围。 2 结 果 2．1 精密度 该方法批内和批间 C <4．O0 ，实验总不精密 度：HbAlc为 4．85 时，CV为 2．8O ；HbAlc为 1O．7O％时， CV为 1．90 。HbAlc百分率越大 ，CV值越小 ，按照 NCCLS 文件要求的批内批间不精密度水平应小于 5．00％，该方法符 合要求。 2．2 准确度(方法 比对实验) 该方法与 BioSystems(Spain) 公司的微柱法进行方法学比较( 一84， 一1．038 5x+0．050 4， r一0．966 8，P>O．05)，其中6—1．038 5， (下转第 383页) 维普资讯 http://www.cqvip.com 检验医学与临床 2007年 5月第 4卷第 5期 Lab Med Clin，May 2007，Vol 4，No 5 mmol／L测得的CE／TC(~±s)0．716±0．025比较，差异无统 计学意义(P>O．05)，这表明若肝脏细胞尚无损害，肝功能正 常时，不论胆 固醇水平高低，胆 固醇的脂化也能正常进行 ，使 CE／TC保持正常水平。对照组与肝功能实验阳性各组的 CE／ TC比较，差异有统计学意义(P或 <5．65"mmol／L时，肝功能实验阴性组其 CE／TC为阳性者分 别 占9．1 、11．5 ；而肝功能实验阳性组中其 CE／TC为阳性 者分别 占94．4 、93．8 ，均显著高于肝功能实验阴性组。若 将 CE／TC<0．687作为阳性指标，显示为肝功能异常；CE／TC >／o．687作为阴性指标 ，显示为肝功能正常。则实验测得 CE／ TC结果阳性可确定肝功能异常的概率(即阳性预告值+预告 值)为 0．92[5 ；实验测得 CE／TC结果阴性能排除肝功能异常 的概率(即阴性预告值一预告值)为 0．91。在肝功能实验异常 组的 166例临床血清标本中，仅 1O例 CE／TC≥0．687，为假阴 性结果 ，其临床灵敏度为 0．94；在肝功能实验正常组的 120例 血清标本中，仅 13例 CE／TC<0．687，为假阳性结果 ，其临床 特异性为 0．89。在测定 286例血清标本中，有 156例肝功能 383 异常，同时 CE／TC<0．687，为真阳性结果；有 107例肝功能正 常，同时 CE／TC~0．687，为真阴性结果，其准确度为 0．92。因 此，通过对血清胆固醇及其酯的测定，其 CE／TC作为肝功能 实验的 1项指标，临床灵敏度、特异性都很好，准确度较高，可 以将 CE／TC的0．687值作为临床肝脏患者的诊断和鉴别诊断 的参考指标。 参考文献 1 豫北医学专科学校．传染病与流行病学[M]．北京 ：人民卫 生出版社，1994．27． 2 黄大有．实验诊断的理论基础和临床意义[M]．第 2版．北 京：人民卫生出版社，1995．912． 3 朱忠勇．临床医学检验[M]．上海：上海科学技术出版社， 1998．316． 4 龚兰生．内科手册[M]．上海：上海科学技术出版社，1991． 949． 5 安乙敏．生化检验学[M]．成都：四JIf科学技术 出版社， 199O．5． (收稿 日期：2007—02—07) (上接第 381页) 口一0．050 4，b接近 1，口接近 0，r>O．95，符合临床实验要求。 2．3 线性范围 该方法 HbAlc在 3．00 ～21．00 范围内线 性 良好 ，将预期值和实测值 进行 比较 ，相 关方 程 Y一1．012x+ 0．096，r一0．976， 一18。其中 6—1．012，口一0．096，b接近 1，口 接近 0，r>O．95，符合临床实验要求。 3 讨 论 HbAlc是血红蛋白的成分之一，生成缓慢，与血液中葡萄 糖浓度持续 升高成正 比，而与采 血当时的血糖浓度并不相 关[4]。由于葡萄糖可 自由透过红细胞膜，血红蛋白的半衰期为 60 d，HbAlc可反映测定前 1～2个月内血糖的平均水平，所以 HbAlc可作为糖尿病长期监测的良好指标[5]。 目前，HbAlc的测定方法主要有 ：离子交换高效液相色谱 法、亲何层析法、免疫测定、电泳法等，有些方法需要贵重的仪 器，有些方法手工操作太不方便，而本科引进的免疫抑制比浊 法操作简便、快速，能在 自动生化分析仪上进行 自动化分析。 从本科工作人员对其性能评价指标观察，其精密度高，重复性 好，线性范围宽，批内和批间 CV<4 ，与 BioSystems(Spain) 公司的微柱法进行方法学比较，相关性良好。完全满足临床对 糖尿病患者的监测要求，可在使用自动生化分析仪的各型医院 推广使用。 参考文献 1 王笠 ，李琳．糖化血红蛋白的检测和临床应用[J]．上海医学 检验杂志，2003，18(2)：119—121． 2 杨昌国，许叶．线性评价和干扰试验中NCCLS评价

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的 应用[J]．临床检验杂志，1999，17(3)：47—49． 3 杨昌国，许叶．精密度评价和方法比较中 NCCLS评价方案 的应用[J]．临床检验杂志，1999，17(1)：184—198． 4 王玉明，段勇．乳胶增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白[J]． 现代检验医学杂志，2003，18(4)：6-8． 5 Krishnamuyti U，Stelfes MW ．Glycohemoglobin：a primary predictor of development or reversal of complications of dia— betes mellitrick[J-]．Clin Chem，2001，47(5)：1157—1165． (收稿日期：2006—11—13) 维普资讯 http://www.cqvip.com