5.丹参中丹参酮ⅡA，丹参酮Ⅰ和隐丹参酮的高效液相色谱分析

丹参中丹参酮ⅡA，丹参酮Ⅰ和隐丹参酮的高效液相色谱分析 丹参中丹参酮ⅡA，丹参酮Ⅰ和隐丹参酮的高效液相色谱分析 ——外标法定量 目的要求 (1) 掌握高效液相色谱梯度洗脱分析方法； (2) 掌握外标法定量。 基本原理 高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出）由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。 本实验采用十八烷基硅烷键合相为固定相，甲醇-水溶液为流动相分离丹参脂溶性提取物。当两组分在固定相和流动相间分配时，极性大的物质在流动相中的溶解度较大，而极性小的物质在流动相中的溶解度较小，组分的流出顺序是极性大的化合物在前，极性小的化合物在后。 1、​ 仪器 岛津LC-20A，恒流泵，脱气机，紫外检测器，高压六通进样阀，色谱工作站，电子天平，超声波仪 2、​ 试剂 超纯水，丹参酮ⅡA对照品，丹参酮Ⅰ对照品，隐丹参酮对照品，甲醇（色谱纯），乙醇（分析纯），磷酸（分析纯） 三、实验条件 1. 色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5 μm） 2. 流动相：A- 0.1% 磷酸水溶液，B- 甲醇；流速0.8mL/min 0~75 min，60%~68% B；75~80 min，68%~70% B 3. 紫外检测器：测定波长254 nm 4. 柱温箱：30℃ 5. 进样量：10μL 四、实验步骤 1. 称取0.2g干燥样品粉末，置于具塞三角瓶中，准确加入25.00mL 80%乙醇，称重，超声提取25min，补重，过滤，得到待测液。 2. 取对照品，加75%甲醇配置成系列液。 2. 将流动相至于超声波清洗器上脱气20min。 3. 根据实验条件，将仪器调节至进样状态，色谱工作站基线呈平直，即可进样 4. 使用一次性针筒过滤器分别将对照品和待测液过滤到进样瓶中，进样对照品和样品并记录数据。 5. 实验结束后，按要求冲洗分析柱，关好仪器。 五、数据记录 tR/min A/mV·s 标准溶液 μg · mL 标准溶液 μg · mL 标准溶液 μg · mL 标准溶液 μg · mL 样品 思考题 1.​ 用标准曲线法定量的优缺点是什么？ 2. 若标准曲线用对照品质量浓度对峰高作图，能给出准确结果吗？与本实验的峰面积-质量浓度标准曲线相比何者优越？为什么？