残留溶剂测定

1 附录 Ⅷ P 残留溶剂测定法 药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使 用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。药品中常见的残留溶剂及限度 见附表 1，除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留限度应符合表中的规 定；对其它溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品规范、 药品生产质量管理规范（GMP）或其它基本的质量要求。 本法照气相色谱法（附录 V E）测定。 色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱 1．毛细管柱 除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互换使用。 （1）非极性色谱柱 固定液为 100％的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。 （2）极性色谱柱 固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱。 （3）中极性色谱柱 固定液为（35%）二苯基-（65%）甲基聚氧硅烷、（50%） 二苯基-（50%）二甲基聚氧硅烷、（35%）二苯基-（65%）二甲基聚氧硅烷、（14%） 氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷、（6％）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅 氧烷的毛细管柱等。 （4） 弱极性色谱柱 固定液为（5%）苯基-（95%）甲基聚氧硅烷、（5%） 二苯基-（95%）二甲基硅氧烷共聚物的毛细管柱等。 2．填充柱 以直径为 0.25-0.18mm 的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其它适 宜的填料作为固定相。 系统适用性试验系统适用性试验系统适用性试验系统适用性试验 （1）用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数一般不低于 5000；填 充柱法的理论板数一般不低于 1000。 （2）色谱图中，待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于 1.5。 （3）以内标法测定时，对照品溶液连续进样 5 次，所得待测物与内标物峰面 积之比的相对偏差(RSD)应不大于 5％；若以外标法测定，所得待测物峰面 积的 RSD 应不大于 10％。 删除的内容删除的内容删除的内容删除的内容: : : : 代 2 供试品溶液的制备供试品溶液的制备供试品溶液的制备供试品溶液的制备 1.顶空进样 除另有规定外，精密称取供试品 0.1~1g；通常以水为溶剂；对于非水溶性药 物，可采用 N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其它适宜溶剂；根据供试品和待 测溶剂的溶解度，选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。根据品种项下残 留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测定的需要。 2.溶液直接进样 精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；根据品种项下残留溶 剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测定的需要。 对照品溶液的制备对照品溶液的制备对照品溶液的制备对照品溶液的制备 精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用与制备供试品溶液相同 的溶剂制备对照品溶液；如用水作溶剂，应先将待测有机溶剂溶解在 50％二甲 亚砜或 N，N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀释。若为限度检查，根据残留 溶剂的限度规定确定对照品溶液的浓度；若为定量测定，为保证定量结果的准确 性，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度；通常对照品 溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过 2 倍 为宜。必要时，应重新调整供试品溶液或对照品溶液的浓度。 测定法测定法测定法测定法 第一法第一法第一法第一法 毛细管柱顶空进样等温法毛细管柱顶空进样等温法毛细管柱顶空进样等温法毛细管柱顶空进样等温法 当需要检查的有机溶剂的数量不多，并极性差异较小时，可采用此法。 色谱条件 柱温一般为 40~100℃；常以氮气为载气，流速为每分钟 1.0~2.0ml；以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为 70~85 ,℃顶空瓶平衡时间为 30~60 分钟；进样口温度为 200℃；如采用火焰离子化检测器（FID），温度为 250℃。 测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于 2 次，测定待测 峰的峰面积。 对色谱图中未知有机溶剂的鉴别，可参考附表 2 进行初筛。 第二法第二法第二法第二法 毛细管柱顶空进样系统程序升温法毛细管柱顶空进样系统程序升温法毛细管柱顶空进样系统程序升温法毛细管柱顶空进样系统程序升温法 当需要检查的有机溶剂有机溶剂数量较多，且极性差异较大时，可采用此法。 色谱条件 柱温一般先在 40℃维持 8 分钟，再以 8 /min℃ 的速度升至 120 ,℃ 删除的内容删除的内容删除的内容删除的内容: : : : 如为非极性色 谱系统， 删除的内容删除的内容删除的内容删除的内容: : : : 30 删除的内容删除的内容删除的内容删除的内容: : : : 7 3 维持 10 分钟；以氮气为载气，流速为每分钟 2.0ml；以水为溶剂时顶空瓶温度平 衡温度为 70~85 ,℃顶空瓶平衡时间 30~60 分钟；进样口温度为 200℃；如采用 FID 检测器，温度为 250℃。 具体到某个品种的残留溶剂检查时，可根据该品种项下残留溶剂的组成调整 升温程序。 测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于 2 次，测定待测 峰的峰面积。 对色谱图中未知有机溶剂的鉴别，可参考附表 3 进行初筛。 第三法第三法第三法第三法 溶液直接溶液直接溶液直接溶液直接进样法进样法进样法进样法 可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱 测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样 2~3 次，测定待测峰的峰 面积。 计算法 (1) 限度检查：除另有规定外，按品种项下规定的供试品溶液浓度测定。以 内标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积与内标峰面积之比不得大于对照 品溶液的相应比值。以外标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积不得大于 对照品溶液的相应峰面积。 (2) 定量测定：按内标法或外标法计算各残留溶剂的量。 【【【【附注附注附注附注】】】】 （1）除另有规定外，顶空条件的选择： A. 应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空平衡温度。对沸点较高的残留 溶剂，通常选择较高的平衡温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免 供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。 B. 顶空平衡时间一般为 30~45 分钟，以保证供试品溶液的气-液两相有足够 的时间达到平衡。顶空时间通常不宜过长，如超过 60 分钟，可能引起顶空瓶的 气密性变差,导致定量准确性的降低。 C. 对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件。 (2) 定量方法的验证 当采用顶空进样时，供试品与对照品处于不完全相同 的基质中，故应考虑气液平衡过程中的基质效应（供试品溶液与对照品溶液组成 删除的内容删除的内容删除的内容删除的内容: : : : 15 删除的内容删除的内容删除的内容删除的内容: : : : /min 删除的内容删除的内容删除的内容删除的内容: : : : 为 4 差异对顶空气-液平衡的影响）。由于标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照 品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的 准确性；当标准加入法与其它定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果 为准。 (3) 干扰峰的排除 供试品中的未知杂质或其挥发性热降解物易对残留溶 剂的测定产生干扰。干扰作用包括在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降 解物与待测物的保留值相同（共出峰）；或热降解产物与待测物的结构相同（如 甲氧基热裂解产生甲醇）。当测定的有机溶剂残留量超出限度，但未能确定供试 品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用时，应通过试验排除 干扰作用的存在。对第一类干扰作用，通常采用在另一种极性相反的色柱系统中 对相同供试品再进行测定，比较不同色谱系统中测定结果的方法。如两者结果一 致，则可以排除测定中有共出峰的干扰；如两者结果不一致，则表明测定中有共 出峰的干扰。对第二类干扰作用，通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来 加以判断。 （4）含氮碱性化合物的测定 普通气相色谱的不锈钢管路、进样器的衬管 等对有机胺等含氮碱性化合物具有较强的吸附作用，致使其检出灵敏度降低。应 采用惰性的硅钢材料或镍钢材料管路；采用溶液直接进样法测定时，供试品溶液 应不呈酸性，以免待测物与酸反应后不易汽化。 通常采用弱极性的色谱柱或其填料经碱处理过的色谱柱含氮碱性化合 物，如果采用胺分析专用柱进行分析，效果更好。 对不宜采用气相色谱法测定的含氮碱性化合物，如 N-甲基吡咯烷酮等，可 采用其它方法如离子色谱法等测定。 （5）检测器的选择 对含卤素元素的残留溶剂如氯仿等，采用电子捕获检 测器(ECD)，易得到高的灵敏度。 （6）由于不同的在测定同一供试品时可能采用了不同的实验方法， 当测定结果处于合格不合格边缘时，以采用内标法或标准加入法为准。 (7) 顶空平衡温度一般应低于溶解供试品所用溶剂的沸点 10℃以下，能满 足检测灵敏度即可；对于沸点过高的溶剂，如甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基 乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等, 用顶空进样测定的灵敏度不如直接进样，一 删除的内容删除的内容删除的内容删除的内容: : : : 内标及 5 般不宜用顶空进样方式测定。 （8）利用保留值定性是气相色谱中最常用的定性方法。色谱系统中载气的流 速、载气的温度和柱温度等的变化都会使保留值改变，从而影响定性结果。调整 相对保留时间（RART）只受柱温和固定相性质的影响，以此作为定性分析参数 较可靠。应用中通常选用甲烷测定色谱系统的死体积（t0）： RART= [tR-t0]/[tR (参比物)- t0] 式中 tR为组分的保留时间。 附表 1 药品中常见的残留溶剂及限度 溶 剂 名 称 限 度/% 溶 剂 名 称 限 度/% 第一类溶剂（应该避免使用） 苯 四氯化碳 1, 2-二氯乙烷 1, 1-二氯乙烯 1, 1, 1-三氯乙烷 第二类溶剂（应该限制使用） 乙腈 氯苯 氯仿 环己烷 1, 2-二氯乙烯 二氯甲烷 1, 2-二甲氧基乙烷 N, N-二甲基乙酰胺 N, N-二甲基甲酰胺 1, 4-二氧六环 2-乙氧基乙醇 乙二醇 甲酰胺 正己烷 甲醇 2-甲氧基乙醇 甲基丁基酮 甲基环己烷 N-甲基吡咯烷酮 硝基甲烷 吡啶 四氢噻吩 四氢化萘 0.0002 0.0004 0.0005 0.0008 0.15 0.041 0.036 0.006 0.388 0.187 0.06 0.01 0.109 0.088 0.038 0.016 0.062 0.022 0.029 0.3 0.005 0.005 0.118 0.053 0.005 0.02 0.016 0.01 第三类溶剂（药品 GMP 或其他质量要求限制使用） 醋酸 丙酮 甲氧基苯 正丁醇 仲丁醇 醋酸丁酯 叔丁基甲基醚 异丙基苯 二甲亚砜 乙醇 醋酸乙酯 乙醚 甲酸乙酯 甲酸 正庚烷 醋酸异丁酯 醋酸异丙酯 醋酸甲酯 3-甲基-1-丁醇 丁酮 甲基异丁基酮 异丁醇 正戊烷 正戊醇 正丙醇 异丙醇 醋酸丙酯 第四类溶剂（尚无足够毒理学资料）② 1, 1-二乙氧基丙烷 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 6 四氢呋喃 甲苯 1, 1, 2-三氯乙烯 二甲苯① 0.072 0.089 0.008 0.217 1, 1-二甲氧基甲烷 2, 2-二甲氧基丙烷 异辛烷 异丙醚 甲基异丙基酮 甲基四氢呋喃 石油醚 三氯醋酸 三氟醋酸 ① 通常含有 60%间二甲苯，14%对二甲苯，9%邻二甲苯和 17%乙苯。 ② 药品生产企业在使用时应提供该类溶剂在制剂中残留水平的合理性论证报告。 附表附表附表附表 2 常见有机溶剂在等温法测定时相对于丁酮的保留值常见有机溶剂在等温法测定时相对于丁酮的保留值常见有机溶剂在等温法测定时相对于丁酮的保留值常见有机溶剂在等温法测定时相对于丁酮的保留值参考值参考值参考值参考值 非极性色谱柱非极性色谱柱非极性色谱柱非极性色谱柱 极性色谱柱极性色谱柱极性色谱柱极性色谱柱 溶剂名称溶剂名称溶剂名称溶剂名称 tR（（（（min）））） RART 溶剂名称溶剂名称溶剂名称溶剂名称 tR（（（（min）））） RART 柱温柱温柱温柱温 40℃℃℃℃ 柱温柱温柱温柱温 40℃℃℃℃ 甲醇 1.828 0.126 正戊烷 1.682 0.032 乙醇 2.090 0.268 正己烷 1.787 0.075 乙腈 2.179 0.315 乙醚 1.842 0.097 丙酮 2.276 0.368 异辛烷 1.926 0.131 异丙醇 2.356 0.411 异丙醚 1.943 0.138 正戊烷 2.487 0.481 叔丁基甲基醚 2.005 0.163 乙醚 2.489 0.482 正庚烷 2.021 0.169 甲酸乙酯 2.522 0.501 环己烷 2.159 0.225 二甲氧基甲烷 2.584 0.534 1,1-二氯乙烯 2.209 0.245 1,1 二氯乙烯 2.609 0.547 二甲氧基甲烷 2.243 0.259 乙酸甲酯 2.635 0.561 甲基环己烷 2.405 0.324 二氯甲烷 2.655 0.572 丙酮 2.876 0.515 硝基甲烷 2.807 0.654 甲酸乙酯 2.967 0.551 正丙醇 2.982 0.748 乙酸甲酯 3.000 0.564 1，2-二氯乙烯 3.109 0.817 1，2-二氯乙烯 3.347 0.705 叔丁基甲基醚 3.252 0.894 四氢呋喃 3.403 0.727 丁酮丁酮丁酮丁酮 3.449 1.000 甲基四氢呋喃 3.481 0.758 仲丁醇 3.666 1.117 四氯化碳 3.635 0.821 正己烷 3.898 1.242 1,1,1-三氯乙烷 3.653 0.828 异丙醚 3.908 1.247 乙酸乙酯 3.810 0.891 乙酸乙酯 3.913 1.250 乙酸异丙酯 3.980 0.960 氯仿 3.954 1.272 甲醇 4.062 0.993 四氢呋喃 4.264 1.439 丁酮丁酮丁酮丁酮 4.079 1.000 异丁醇 4.264 1.440 1，2-二甲氧基乙烷 4.604 1.212 1,2-二氯乙烷 4.517 1.576 甲基异丙基酮 4.716 1.257 1,1,1-三氯乙烷 4.808 1.733 二氯甲烷 4.758 1.274 甲基异丙基酮 4.976 1.823 异丙醇 4.822 1.300 1，2-二甲氧基乙烷 4.985 1.828 乙醇 4.975 1.362 苯 5.281 1.988 苯 4.977 1.362 乙酸异丙酯 5.311 2.004 乙酸丙酯 6.020 1.784 正丁醇 5.340 2.019 三氯乙烯 6.643 2.035 7 四氯化碳 5.470 2.089 甲基异丁基酮 7.202 2.261 环己烷 5.583 2.150 乙腈 7.368 2.328 甲基四氢呋喃 5.676 2.201 乙酸异丁酯 7.497 2.380 三氯乙烯 6.760 2.785 氯仿 7.985 2.577 二氧六环 6.823 2.819 仲丁醇 8.390 2.740 异辛烷 6.957 2.891 甲苯 8.746 2.884 正庚烷 7.434 3.148 正丙醇 9.238 3.083 乙酸丙酯 7.478 3.172 二氧六环 10.335 3.526 甲基环己烷 8.628 3.792 1,2-二氯乙烷 10.827 3.724 甲基异丁基酮 8.738 3.851 乙酸丁酯 11.012 3.799 3-甲基-1-丁醇 8.870 3.922 甲基丁基酮 11.486 3.990 吡啶 9.283 4.145 甲烷 1.602 甲苯 11.180 5.168 柱温柱温柱温柱温 80℃℃℃℃ 正戊醇 11.382 5.276 异丁醇 3.577 3.045 甲烷甲烷甲烷甲烷 1.594 正丁醇 4.460 4.334 柱温柱温柱温柱温 80℃℃℃℃ 硝基甲烷 4.885 4.948 乙酸异丁酯 3.611 2.099 异丙基苯 5.288 5.543 甲基丁基酮 3.859 2.345 吡啶 5.625 6.035 乙酸丁酯 4.299 2.778 3-甲基-1-丁醇 5.934 6.486 氯苯 5.253 3.726 氯苯 6.439 7.223 甲氧基苯 7.436 5.890 正戊醇 7.332 8.527 异丙基苯 8.148 6.589 丁酮 2.176 1.000 丁酮丁酮丁酮丁酮 2.502 1.000 甲烷 1.491 甲烷甲烷甲烷甲烷 1.493 柱温柱温柱温柱温 120℃℃℃℃ 柱温柱温柱温柱温 120℃℃℃℃ 甲氧基苯 3.837 9.890 四氢化萘 8.067 29.609 四氢化萘 7.427 24.484 丁酮 1.630 1.000 丁酮 1.650 1.000 甲烷 1.405 甲烷 1.404 附表附表附表附表 3：：：：常见有机溶剂在程序常见有机溶剂在程序常见有机溶剂在程序常见有机溶剂在程序升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值 非极性色谱柱非极性色谱柱非极性色谱柱非极性色谱柱 极性色谱柱极性色谱柱极性色谱柱极性色谱柱 顺序 溶剂名称 tR(min) RART 顺序 溶剂名称 tR(min) RART 1 甲醇 1.846 0.127 1 正戊烷 1.691 0.033 2 乙醇 2.121 0.272 2 正己烷 1.807 0.076 3 乙腈 2.201 0.314 3 乙醚 1.856 0.094 4 丙酮 2.303 0.367 4 异辛烷 1.957 0.131 5 异丙醇 2.401 0.419 5 异丙醚 1.966 0.135 6 正戊烷 2.512 0.477 6 叔丁基甲基醚 2.053 0.167 7 乙醚 2.519 0.481 7 正庚烷 2.063 0.171 8 甲酸乙酯 2.544 0.494 8 环己烷 2.217 0.228 9 二甲氧基甲烷 2.611 0.529 9 1，1-二氯乙烯 2.267 0.246 10 1，1-二氯乙烯 2.623 0.535 10 二甲氧基甲烷 2.303 0.260 11 乙酸甲酯 2.665 0.558 11 甲基环己烷 2.488 0.328 12 二氯甲烷 2.674 0.562 12 丙酮 2.988 0.513 13 硝基甲烷 2.839 0.649 13 甲酸乙酯 3.094 0.552 14 正丙醇 3.051 0.760 14 乙酸甲酯 3.126 0.564 15 1，2-二氯乙烯 3.128 0.801 15 1，2-二氯乙烯 3.511 0.707 8 16 叔丁基甲基醚 3.302 0.892 16 四氢呋喃 3.561 0.725 17 丁酮丁酮丁酮丁酮 3.507 1.000 17 甲基四氢呋喃 3.653 0.759 18 仲丁醇 3.756 1.131 18 四氯化碳 3.821 0.822 19 正己烷 3.966 1.241 19 1，1，1-三氯乙烷 3.833 0.826 20 异丙醚 3.971 1.244 20 乙酸乙酯 4.017 0.894 21 乙酸乙酯 3.981 1.249 21 乙酸异丙酯 4.207 0.964 22 氯仿 4.005 1.262 22 甲醇 4.295 0.997 23 四氢呋喃 4.387 1.462 23 丁酮丁酮丁酮丁酮 4.303 1.000 24 异丁醇 4.397 1.468 24 1，2-二甲氧基乙烷 4.875 1.212 25 1,2-二氯乙烷 4.6124 1.581 25 甲基异丙基酮 5.005 1.260 26 1，1，1-三氯乙烷 4.843 1.702 26 二氯甲烷 5.041 1.273 27 甲基异丙基酮 5.087 1.830 27 异丙醇 5.069 1.284 28 1,2-二甲氧基乙烷 5.099 1.837 28 乙醇 5.275 1.360 29 苯 5.380 1.984 29 苯 5.275 1.360 30 乙酸异丙酯 5.398 1.994 30 乙酸丙酯 6.437 1.790 31 正丁醇 5.402 1.996 31 三氯乙烯 7.108 2.039 32 四氯化碳 5.501 2.048 32 甲基异丁基酮 7.735 2.271 33 环己烷 5.649 2.126 33 乙腈 7.892 2.329 34 甲基四氢呋喃 5.739 2.173 34 乙酸异丁酯 8.068 2.394 35 三氯乙烯 6.815 2.738 35 氯仿 8.533 2.566 36 异辛烷 6.928 2.798 36 仲丁醇 8.848 2.683 37 二氧六环 6.928 2.798 37 甲苯 9.156 2.797 38 正庚烷 7.563 3.131 38 正丙醇 9.461 2.910 39 乙酸丙酯 7.583 3.142 39 二氧六环 10.183 3.177 40 甲基环己烷 8.581 3.666 40 1,2-二氯乙烷 10.446 3.274 41 甲基异丁基酮 8.830 3.797 41 乙酸丁酯 10.543 3.310 42 3-甲基-1-丁醇 8.968 3.870 42 甲基丁基酮 10.801 3.406 43 吡啶 9.178 3.980 43 异丁醇 11.606 3.704 44 甲苯 10.259 4.548 44 正丁醇 13.046 4.237 45 正戊醇 10.448 4.647 45 异丙基苯 13.258 4.315 46 乙酸异丁酯 10.638 4.747 46 硝基甲烷 13.396 4.367 47 甲基丁基酮 11.025 4.951 47 吡啶 13.949 4.571 48 乙酸丁酯 12.175 5.555 48 3-甲基-1-丁醇 14.519 4.782 49 氯苯 13.166 6.076 49 氯苯 14.562 4.798 50 甲氧基苯 15.270 7.181 50 正戊醇 15.516 5.151 51 异丙基苯 15.724 7.420 51 甲氧基苯 17.447 5.866 52 四氢化萘 22.409 10.933 52 四氢化萘 21.708 7.444 甲烷 1.604 甲烷 1.602 注： 附表 2、3 中数据为非极性的 SPB-1 柱（30m×0.32mm×1.0µm）和极性的 HP-INNOWAX 柱 （30m×0.32mm×0.5µm）测定的结果。