防治动物子宫内膜炎中药_宫得健方剂的研制

防治动物子宫内膜炎中药 ———宫得健方剂的研制 孙 　琳 , 包喜军 , 吕俊锦 , 刘 　孟 , 胡玉龙 , 周生银 , 李建基 , 王 　亨 (扬州大学兽医学院 , 江苏 扬州 225009) 中图分类号 :S853. 9 　　文献标识码 :B 　　文章编号 :052926005 (2010) 0220074202 　　依据现代中药研究资料及医学验方 ,我们配制 了两个防治动物子宫内膜炎中药方剂 , 方剂取名为 宫得健。通过急性毒性试验、刺激性试验、致敏试 验、抗炎试验、体外抑菌试验及山羊子宫内膜炎病例 治疗试验对两方剂进行了综合比较和试验观测 ,结 果报告如下。 收稿日期 :2009202205 作者简介 :孙琳 (19822) ,女 ,硕士 ,从事奶牛疾病方面的研究 , E2 mail : sunlin198208 @163. com 通讯作者 :李建基 ,E2mail :yzjjli @163. com 1 　材料与方法1. 1 　宫得健方剂 Ⅰ、Ⅱ的组成和制备 　方剂 Ⅰ由黄连、黄柏、枳实、干姜、当归按一定比例组方而成 ;方剂 Ⅱ由黄连、黄柏、枳实、干姜按一定比例组方而成。1. 2 　宫得健的安全性试验、抗炎和抑菌试验 　参考相关文献 ,进行安全性试验。通过预试验无法测出方剂 Ⅰ、Ⅱ的半数致死量 ,改做最大耐受量试验[1 ] ;取家兔 6 只进行眼球刺激性试验 ,分别观察家兔眼结膜有无充血、水肿和分泌物等现象[ 2 ] ;利用豚鼠做 2. 4 　经济效益分析 　见表 3。 表 3 　经济效益分析 组别 饲料价格 (元/ kg) 耗料 (kg) 饲料支出 (元) 净增重 (kg) 肉鸡价格 (元/ kg) 增重收入 (元) 效益 Ⅰ 2. 00 2. 958 5. 916 1. 193 6. 2 7. 397 1. 481 Ⅱ 2. 02 2. 987 6. 034 1. 292 6. 2 8. 010 1. 976 Ⅲ 2. 04 2. 954 6. 026 1. 267 6. 2 7. 855 1. 829 Ⅳ 1. 98 2. 900 5. 742 1. 152 6. 2 7. 142 1. 400 　　由表 3 可知 ,试验组和对照组相比 , Ⅰ组每只鸡 高出 0. 08 元 , Ⅱ组每只鸡高出 0. 576 元 , Ⅲ组高出 0. 429 元 , Ⅱ组 Ⅲ组经济效益明显高于对照组 , Ⅰ组 差异不显著。 3 　讨论与小结 3. 1 　“增食健鸡散”对肉鸡生长性能的影响 ,从试验 结果 (表 2) 可以看出 ,在肉鸡日粮中加入不同剂量 的“增食健鸡散”,都不同程度的促进了 817 商品肉 鸡的生长发育 ,提高了日增重 ,降低了料肉比[1 ] 。从 试验结果 (表 3) 可以看出 ,在肉鸡日粮中增食健鸡 散以 0. 2 %、0. 5 %的剂量能明显提高净增重、饲料 转化率和经济效益 ,尤其是加入 0. 2 %增食健鸡散 效果更明显。 3. 2 　研究和运用中药“增食健鸡散”作为饲料添加 剂不但能解决抗生素及其替代品不能解决的药物残 留问 ,而且能提高饲料适口性 ;增强畜禽肠道分 泌 ,有利于消化吸收 ,提高饲料报酬 ,因而有利于肉 鸡生长性能的提高[2 ] 。中药还能提高机体免疫力 , 增强机体抗病能力 ,无抗药性、无毒副作用[325 ,9210 ] 。 3. 3 　中药添加剂可提高肉鸡的抗病能力和生长性 能 ,但也存在许多问题 ,主要是产品生产落后 , 生产设备简陋 ,加工粗糙简单 ,品种单一 ,使用剂量 普遍偏大 ,通常都在 1 %～2 % ,有的竟高达 5 % (如 松针粉) ,这不仅增加了产品成本 ,浪费药物 ,而且也 影响了饲料的营养配比和适口性[628 ] ,而增食健鸡散 以 0. 2 %的剂量能明显提高净增重、饲料转化率和 经济效益 ,实现“微量、高效”这一饲料添加剂的基本 原则 ,值得推广应用。 参考文献 : [ 1 ] 　黄中利 , 史玉颖 , 傅剑. 中草药添加剂在养禽生产中的应用 [J ] . 山东家禽 , 2003 (3) :49253. 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[ 10 ] 张丽云 , 张媛 , 罗明 ,等. 银翘解毒合剂对鸡免疫功能的影响 [J ] . 中国兽医杂志 , 2001 ,37 (10) :28229. 47 中国兽医杂志 2010 年 (第 46 卷)第 2 期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Chinese Journal of Veterinary Medicine 　　 全身过敏性试验[3 ] ;选体重 20～30 g 的 ⅠCR 小鼠 60 只 ,分别做小鼠耳壳水肿试验、小鼠棉球肉芽肿 试验 ,以肿胀抑制率考察宫得健的抗炎作用[1 ] ;体外 抑菌试验考察其抑菌作用[1 ] 。 1. 3 　治疗试验 　对已经发生子宫内膜炎的山羊经 子宫角插管灌注方剂 Ⅰ、Ⅱ各 20 mL ,每 3 天灌注 1 次 ,连续灌注 6 次为一个疗程 ,观察并检测在治疗过 程中子宫分泌物的数量以及分泌物中炎性细胞的变 化。对照组的山羊注入同剂量的灭菌生理盐水。子 宫分泌物涂片的判断标准 :全视野无白细胞者为 ( - ) ,呈点状散在者为 ( + ) ,全视野白细胞密集者为 ( + + + ) ,介于 ( + )与 ( + + + )之间者为 ( + + ) [4 ] 。 2 　结果 2. 1 　安全性试验 　最大耐受量试验 (MTD) 中每天 测小鼠的饮水量 (mL) 和采食量 (g) 及体重 ,数据用 SPSS软件处理 ,结果与对照组比较 ,差异均不显著 ; 试验结束时 ,处死小鼠剖检 ,肉眼观察 :心、肝、肺、肾、 胰腺、小肠、脑、肾上腺均未发现异常 ;家兔眼球刺激性 试验中方剂Ⅰ、Ⅱ给药后 30 min、60 min、90 min、120 min、 24 h 分别观察家兔的左右眼结膜 ,左、右眼均无充血、 水肿、流分泌物等刺激性反应 ;豚鼠过敏性试验中 ,对 照组和给药组在两次攻击后 ,均未出现抓鼻、咳嗽、喷 嚏、颤抖、竖毛、呼吸困难、抽搐、大小便失禁、休克和死 亡等现象。因此 ,宫得健无毒性、无致敏性、无刺激性。 2. 2 　抗炎试验 2. 2. 1 　小鼠耳壳水肿试验 　由表 1 可知 ,方剂 Ⅰ的 中剂量组和方剂 Ⅱ的中剂量组与高剂量组对二甲苯 引起的小鼠耳壳水肿均有显著抑制作用 ( P < 0. 05) ,方剂 Ⅰ的高剂量组对二甲苯引起的小鼠耳壳 水肿具有极显著抑制作用 ( P < 0. 01) 。 2. 2. 2 　小鼠棉球肉芽肿试验 　将棉球烘干后计算 肉芽肿的重量和抑制率 ,结果见表 2。方剂 Ⅰ的中 剂量组、高剂量组和方剂 Ⅱ的高剂量组能明显抑制 肉芽组织的增生 ( P < 0. 05) 。 表 1 　方剂 Ⅰ、Ⅱ对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响 ( X ±S ,n = 10) 组别 耳肿胀度 (mg) 抑制率 ( %) 对照组　　　 0. 75 ±0. 022 - 方Ⅰ低剂量组 0. 58 ±0. 018 23. 67 方Ⅰ中剂量组 0. 43 ±0. 009 3 42. 67 方Ⅰ高剂量组 0. 36 ±0. 013 3 3 52. 0 方Ⅱ低剂量组 0. 59 ±0. 025 21. 33 方Ⅱ中剂量组 0. 47 ±0. 019 3 37. 33 方Ⅱ高剂量组 0. 39 ±0. 017 3 48. 0 　　注 :与对照组比较 , 3 P < 0. 05 ; 3 3 P < 0. 01。下同 表 2 　方剂 Ⅰ、Ⅱ对小鼠棉球肉芽组织增生的影响 ( X ±S ,n = 10) 组别 肉芽组织重量 (mg) 抑制率 ( %) 对照组　　　 25. 9 ±8. 05 - 方Ⅰ低剂量组 23. 2 ±7. 21 10. 42 方Ⅰ中剂量组 20. 5 ±6. 31 3 20. 85 方Ⅰ高剂量组 19. 7 ±7. 61 3 23. 94 方Ⅱ低剂量组 23. 7 ±4. 93 8. 49 方Ⅱ中剂量组 22. 9 ±6. 93 11. 58 方Ⅱ高剂量组 21. 1 ±5. 17 3 18. 53 2. 3 　体外最低抑菌浓度测定 　对大肠杆菌、金黄色 葡萄球菌、绿脓杆菌和链球菌的最小抑菌浓度 ,方剂 Ⅰ分别为 0. 0125、0. 0125、0. 1、0. 25 g 生药/ mL ,方 剂 Ⅱ分别为 0. 025、0. 1、0. 25、0. 25 g 生药/ mL 。 2. 4 　治疗试验 　用药后第 3～6 天 ,子宫分泌物排 出的数量逐渐减少 ,黏稠度降低 ,透明度升高 ,颜色 由灰白色、黄白色逐渐变为透明并接近无色。方剂 Ⅰ在治疗后第 9 天子宫分泌物嗜中性粒细胞和角质 化上皮细胞明显减少 ,第 12 天消失 ;方剂 Ⅱ在治疗 后第 12 天其嗜中性粒细胞和角质化上皮细胞明显 减少 ,第 18 天消失 ;经过子宫腔内注入宫得健治疗 后 ,所有试验羊子宫内膜炎均达到临床痊愈 (表 3) , 试验前后子宫分泌物嗜中性粒细胞逐渐减少。 表 3 　治疗前后子宫颈排出物细胞学检测结果 　( X ±S ;n = 6) 组别 细胞类型 治疗前 治疗后第 3 天 治疗后第 6 天 治疗后第 9 天 治疗后第 12 天 治疗后第 15 天 治疗后第 18 天 Ⅰ 　 嗜中性粒细胞 + + + + + + - - - 上皮细胞　　 + + + + + + - - - Ⅱ 　 嗜中性粒细胞 + + + + + + + + + + - 上皮细胞　　 + + + + + + + + + + - 对照 嗜中性粒细胞 + + + + + + + + + + + + + + 上皮细胞　　 + + + + + + + + + + + + 　　+ :能抑制细菌生长 ; - :不能抑制细菌生长 3 　讨论 在最大耐受量试验前 ,半数致死量预试验表明 : 方剂 Ⅰ、Ⅱ分别在 0. 4 mL/ 10 g、0. 2 mL/ 10 g 和0. 1 mL/ 10 g 剂量灌胃时 ,所有试验小鼠均无死亡 ,且经 病理切片观察各主要脏器无明显病理变化。故按照 0. 4 mL/ 10 g 的剂量进行小鼠的最大耐受量试验。 两方剂中的多种药物对炎症、过敏反应、毛细血 管通透性等方面都有明显的抑制作用。方剂 Ⅰ中的 当归 ,对多种致炎剂引起的急性毛细血管通透性增 高、组织水肿、慢性炎性损伤均有抑制作用 ,能抑制炎 症后期肉芽组织增生 ,对Ⅱ型、Ⅲ型变态反应性炎症也 有抑制作用[5 ] 。因此 ,方剂Ⅰ的抗炎效果优于方剂Ⅱ。 方剂 Ⅰ对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆 菌的体外抑菌效果略好于方剂 Ⅱ,但两方剂对链球 菌的抑菌效果相似。两方剂中的主要抗菌成分为黄连 和黄柏 ,黄连对由多种细菌引起的子宫内膜炎有较好 57　　Chinese Journal of Veterinary Medicine 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中国兽医杂志 2010 年 (第 46 卷)第 2 期 犬睾丸莱迪希细胞瘤病例 乔俊文 , 苏晓鸥 , 赵德明 (中国农业大学动物医学院 , 北京 海淀 100193) 　　观赏动物医院送检一例比格犬睾丸肿物 ,手术 前单侧睾丸肿物增大 ,且触摸有痛感 ,持续一段时间 后未见好转 ,故手术切除。未发现其他明显临床症 状。据病理观察结果诊断为睾丸莱迪希细胞瘤。 1 　肉眼观察 睾丸肿物表面光滑 ,质地较正常睾丸稍硬。深 层组织颜色铁锈色 ,疑似陈旧性出血斑 ,后经病理诊 断确诊。 2 　显微镜病理诊断 镜下可见睾丸基本结构已经消失 ,代之以大量 增生瘤组织 ;基底侧出血 (见后插彩版图 1) ,呈浸润 生长趋势。瘤细胞胞核较圆 ,居中或偏位 ,排列无 序 ,核仁明显 ,胞浆淡染、空泡化 ,形成许多泡沫样细 胞 (见后插彩版图 2) ;瘤细胞异型性明显 ,高倍视眼 下可见有核分裂像 (见后插彩版图 3) 。部分区域出 现淋巴细胞结节 ,疑似局灶性肿瘤坏死区淋巴细胞 浸润 (见后插彩版图 4) 。根据瘤细胞形态诊断为睾 丸莱迪希细胞瘤。 3 　讨论 临床上睾丸肿瘤从组织来源上划分 ,大致可分 为两大类 :一类来源于睾丸生殖细胞 ,如精原细胞 瘤、绒毛膜癌及内胚瘤等 ;另一类为来源于睾丸性索 间质 ,如睾丸支持细胞瘤和睾丸间质细胞瘤。睾丸 间质细胞瘤 ,也称睾丸莱迪希细胞瘤 ( leydig cell 基金项目 :国家科技支撑 (2006BAD06A14) 通讯作者 :赵德明 ,E2mail :zhaodm @cau. edu. cn t umor) ,是一种较为少发的睾丸肿瘤 ,在人医中它 只占睾丸肿瘤的 1 %～3 % ,发病年龄主要集中在 5～10岁及 30～35 岁两个高峰[1 ] ,动物中睾丸莱迪 希细胞瘤的报道相对更少。 目前关于该肿瘤的病因还不清楚 ,小鼠的研究 结果证实 ,黄体生成素、卵泡刺激素、促性腺激素释 放激素、雄性激素受体和多巴胺受体的拮抗剂、52α 还原酶抑制剂、乳糖等能诱导小鼠发生莱迪希细胞 瘤 ;重金属镉、铅及尼古丁、1、32丁二烯和乙醇等均 可以诱发小鼠 leydig 细胞瘤 ,但这些物质不会诱发 人的睾丸间质细胞瘤 ;此外 ,睾丸组织中的芳香化酶 的高表达可导致 leydig 细胞瘤的产生[1 ] 。 肿瘤诊断中其鉴别诊断非常重要 ,而某些肿瘤 从大体形态及显微病理观察具有某些特征 ,收集、归 纳并总结这些肿瘤的形态特征将有助于新发肿瘤病 例的诊断 ,提高确诊率。本病例中 ,从睾丸外观看 , 外表光滑 ,质地稍硬 ,可见到局灶性出血 ,与李朝争 (2007) [ 2 ] 、唐炎权等 (2006) [3 ]关于人的睾丸间质细胞 瘤外观形态报道基本一致 ;从显微病理观察结果来 看 ,睾丸间质瘤细胞多呈圆形 ,胞核较圆 ,居中或偏 位 ,胞浆空泡化 ,类似浆细胞或泡沫样细胞 ,正常睾丸 组织基本消失 ,与李朝争 (2007) [2 ] 、韩韬等 (2007) [1 ] 关于人的睾丸间质瘤细胞外观形态报道基本一致。 相关研究认为 ,睾丸间质细胞瘤的治疗一般在 将睾丸切除后 ,若进行腹膜后淋巴结清扫术 ,则对于 预防肿瘤的扩散及复发更好。 参考文献 : [ 1 ] 　韩韬 ,陈一戎. 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