山羊子宫内膜炎病理模型的制备
包喜军1 ,2 , 孙 琳1 , 吕俊锦1 , 刘 孟1 , 李建基1 , 王 亨1
(1. 扬州大学兽医学院 , 江苏 扬州 225009 ; 2. 公安部南昌警犬基地 , 江西 南昌 330100)
中图分类号 :S858. 27 文献标识码 :B 文章编号 :052926005 (2009) 0520037202
长期以来 ,对子宫内膜炎的研究大多采用自
然病例 ,由于发病时间和疗效判定标准不尽一致 ,
所以试验结果很难比较。通过实验室建立山羊子
宫内膜炎病理模型 ,保证其发病程度和症状的一
致 ,从而为研究该病的诊断、治疗及防治方法创造
良好条件。
收稿日期 :2008207216
作者简介 :包喜军 (19842) ,男 ,硕士 ,主要从事奶牛疾病的研究 ,
E2mail :xijunb @126. com
通讯作者 :李建基 ,E2mail :yzjjli @163. com 1 材料与方法1. 1 实验动物 健康经产母山羊 12 只 ,年龄 3~5岁 ,体重 20~25 kg。随机分为 2 组 ,每组 6 只 ; Ⅰ组为对照组 , Ⅱ组为试验组 ;实验羊均施行子宫角插管和子宫卵巢静脉插管手术。1. 2 器械与材料 XL230 扫描电子显微镜和FP5012/ 10 透射电镜 (荷兰产) , EMU16 超薄切片机与轮转式切片机 (浙江金华无线电厂 ) , H E2MAV ET950 全自动动物血液分析仪 (英国产) ,医用硅胶管 (日本进口) 外径 2. 0 mm ,内径 1. 0 mm。
表 2 辣木粉对肉鸡血液生化指标的影响
(g/ L)
日龄 项目 对照组 1 %辣木粉组 2 %辣木粉组
7 ALB 17. 84 ±1. 04 17. 24 ±0. 87 19. 85 ±0. 41
TP 64. 63 ±4. 85ab 59. 44 ±5. 24b 66. 88 ±6. 01a
GLB 46. 79 ±4. 32 42. 20 ±4. 15 47. 03 ±3. 48
14 ALB 18. 63 ±3. 47 19. 67 ±2. 74 21. 41 ±2. 24
TP 65. 25 ±4. 54b 65. 82 ±6. 45b 69. 52 ±5. 41a
GLB 46. 62 ±5. 51 46. 15 ±4. 64 48. 11 ±4. 04
42 ALB 14. 34 ±6. 87b 15. 65 ±4. 08ab 16. 04 ±3. 14ab
TP 44. 81 ±7. 61b 59. 56 ±7. 84a 56. 41 ±6. 57a
GLB 30. 53 ±4. 10b 43. 31 ±4. 68a 40. 37 ±5. 42a
3 讨论
红细胞数量的增加对血红蛋白的合成、造血功
能和免疫力的提高都有很大的促进作用[10 ] 。本试
验中 2 %辣木粉添加组肉鸡的红细胞数在 42 日龄
时显著高于 1 %组和对照组 ;而在 7 日龄和 14 日龄
时 ,两个试验组的红细胞数却都显著低于对照组。
产生的原因可能是辣木中含有丰富的铁和铜元素 ,
可以促进红细胞的成熟[11 ] ;但在鸡生长早期红细胞
数低于对照组 ,主要原因可能是幼龄鸡对辣木的消
化吸收较低所致。
2 %试验组鸡体的 AL P , TP 和 GLB 在 7 日龄
时比对照组和 1 % 试验组的略有增加 ,但差异不显
著。14 日龄时 2 %组的 TP 值对比其他两组差异显
著 ( P < 0. 05) ;球蛋白 ( GLB)值比 1 %组和对照组都
高 ,但差异不显著 ( P > 0. 05) ;在 42 日龄时 ,2 %组
和 1 %组的 ALB 值、TP 值和 GLB 值都高于对照
组。特别是 1 %组和 2 %组的 TP 值和 GLB 值显著
高于对照组 ( P < 0. 05) ,说明添加辣木粉能促进免
疫球蛋白的合成 ,进而提高机体的免疫功能 ,特别是
添加量稍大效果较为明显。
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73 Chinese Journal of Veterinary Medicine 中国兽医杂志 2009 年 (第 45 卷)第 5 期
1. 3 子宫卵巢静脉插管术 常规腹中线旁切开腹
壁 ,暴露子宫角和子宫卵巢静脉 ,用手术镊游离子宫
卵巢静脉 0. 5~1 cm。在预插管部位做一荷包缝合 ,
用手术剪在荷包缝合的中央剪一小口 ,将硅胶管迅速
插入血管内 ,待插入近子宫角处时将荷包缝合线拉
紧 ,缝合血管壁与浆膜。将硅胶管另一端引出体外。
1. 4 子宫角插管术与子宫腔人工感染 在输卵管
和子宫角交界处剪一小口 ,将硅胶管从小口内插入
子宫腔。用手隔子宫壁触摸硅胶管已插入子宫角中
部后 ,将荷包缝合线拉紧 ,固定硅胶管。硅胶管另一
端引出体外。
术后 ,试验组的羊立刻经子宫角插管注入大肠
杆菌 (来自羊子宫内膜炎病例 ,血清型 O18 ) 0. 5 ×
1010个 ,隔 2 d 再次注入大肠杆菌 1 ×1010 个。对照
组注入等体积的灭菌生理盐水。
1. 5 临床与实验室观察 术前和术后 1、3、5、7、9、11
d 分别观测实验羊体温、呼吸和脉搏的变化 ,并同时
采集颈静脉血和子宫卵巢静脉血 ,进行白细胞计数。
在子宫内接种大肠杆菌前和接种后 1、3、5、7、
9、11 d 分别经子宫角插管无菌采集子宫分泌物。
若分泌物较少不易采集到时 ,可向子宫角内注入定
量的灭菌生理盐水。取子宫分泌物做涂片 ,按瑞氏
染色法染色镜检并进行细胞计数 ,以此确定子宫内
膜炎的发展进程[1 ] 。将采集到的子宫内分泌物迅速
移入灭菌试管内 ,送实验室进行检测。
手术采取试验前、发病时山羊的子宫壁 ,用于病
理组织学观察和扫描电镜观察。
2 结果
2. 1 临床症状与白细胞计数 实验羊体温、呼吸、
脉搏均有变化 ,但变化不明显 ( P > 0. 05) 。山羊经 2
次接种细菌后 ,出现明显的子宫内膜炎症状 ,血液中
白细胞数明显升高 ;子宫卵巢静脉血液中白细胞数
高于颈静脉血液 ,但发病后前者血液中白细胞数增
加的幅度低于后者 (表 1) 。
表 1 实验羊颈静脉( JV)与子宫静脉( UV)血液白细胞计数 ( X ±S) (109 / L)
组别 试验前 发病后第 1 天 发病后第 3 天 发病后第 5 天 发病后第 7 天 发病后第 9 天 发病后第 11 天
Ⅰ J V 12. 37 ±3. 42 12. 40 ±2. 56 12. 70 ±4. 01 13. 09 ±2. 79 △ 12. 76 ±4. 31 12. 64 ±3. 21 12. 44 ±2. 35
UV 12. 86 ±2. 34 12. 79 ±3. 42 12. 72 ±3. 56 13. 45 ±3. 05 △ 12. 45 ±2. 90 12. 71 ±3. 46 12. 62 ±3. 19
Ⅱ J V 12. 75 ±1. 24 13. 08 ±1. 09 14. 34 ±1. 01 3 16. 80 ±3. 54 33△△ 15. 95 ±2. 58 3△ 16. 56 ±1. 20 3△ 16. 42 ±1. 39 3△
UV 16. 51 ±2. 89 16. 85 ±2. 10 17. 35 ±4. 01 3△ 18. 90 ±2. 89 33△△ 17. 05 ±3. 27 3△ 17. 32 ±1. 29 3△ 17. 21 ±1. 64 3△
与Ⅰ组比较 3 : P < 0. 05 , 3 3 : P < 0. 01 ,与试验前比较△: P < 0. 05 , △△: P < 0. 01
2. 2 子宫分泌物与子宫壁镜检结果 自接种大肠
杆菌后的第 5 天开始 ,子宫分泌物中的白细胞数介
于 11~30 之间 ,子宫内膜炎呈阳性 ,第 11 天时更为
明显 (图 1) 。
图 1 子宫颈口黏液白细胞增多 ( ×1 000)
镜下 ,病羊子宫黏膜损伤 ,上皮细胞变性、坏死 ,毛细
血管充血、淤血和水肿 ,有大量炎性细胞浸润 (图
2) 。子宫内膜上皮分泌细胞微绒毛和纤毛大片脱落
或部分脱落 ,致病细菌、坏死组织、细菌分泌物与纤
维素相互交织 ,凝结成薄膜 (图 3) 。
3 讨论
奶牛发生子宫内膜炎后 ,主要表现为精神不振 ,
食欲减退 ,体温升高 ,前胃弛缓 ,白细胞总数升高等
全身性反应 ,随后或与此同时出现阴门排出大量分
泌物。初期 ,分泌物稀薄 ,随后变为黏液性或黏液脓
性分泌物 ,呈灰白色或黄白色 ,严重病例呈污红色或
棕色。本研究中实验奶山羊均出现了类似症状 ,表
明奶山羊可以用作奶牛子宫内膜炎的实验动物。
图 2 正常子宫(左)与发病子宫(右)组织结构 ( H. E. ×400)
病羊子宫黏膜损伤 ,毛细血管充血
83 中国兽医杂志 2009 年 (第 45 卷)第 5 期 Chinese Journal of Veterinary Medicine
乳炎康对奶牛乳房炎病原菌的体外抑菌试验
及对奶牛隐性乳房炎的疗效
边志丰1 , 储卫华2
(1. 江苏省无锡市祖代鸡场有限公司 , 江苏 无锡 214161 ; 2. 中国药科大学生命科学与技术学院 , 江苏 南京 210009)
中图分类号 :S859. 7 ;S858. 23 文献标识码 :B 文章编号 :052926005 (2009) 0520039201
目前国内对奶牛乳房炎的治疗主要以抗生素为
收稿日期 :2007209214
通讯作者 :储卫华 ,E2mail :chuweihua2002 @yahoo . com. cn 主 ,因此存在诸多不利因素 ,如耐药性细菌的增加 ,使得抗生素的效果不理想 ;抗生素在奶中的存在 ,导致人无病吃药等问题。随着人们生活水平的提高 ,对奶制品的要求也不断提高 ,因此开发无抗生素
图 3 羊子宫内膜的电镜下结构变化
A :正常羊子宫上皮分泌细胞微绒毛均匀分布 ( ×25 000) ;B :发病羊子宫上皮损伤、微绒毛脱落 ( ×10 000) ;
C :子宫腔内细菌、分泌物、纤维素相互交织 ( ×6 400)
子宫内膜炎的诊断主要依据子宫分泌物中的嗜
中性粒细胞的数量[2 ] 。有人局部应用重组人 IL28
或 L TB4 直接诱发子宫内膜炎[ 3 ] ,但这没有病原体
的参与 ,与临床病例存在一定的差异。本试验应用
自山羊子宫内膜炎病例分离的大肠杆菌人工制作单
一感染的子宫内膜炎模型 ,对机体的影响和导致的
病理变化接近自然病例 ,有实际意义。
嗜中性粒细胞是具有非特异性和特异性免疫功
能的嗜菌性白细胞。当病原微生物入侵引起炎症
时 ,感染部位的血液学变化和趋化作用对嗜中性粒
细胞有吸引作用 ,这个趋化过程使嗜中性粒细胞在
化学梯度的作用下到达感染部位 ,然后 ,它们就会粘
附病原体并将其吞噬 ,被吞噬的病原体粘附于嗜中
性粒细胞细胞质内的空泡上而被消化清除[4 ] 。本试
验对颈静脉和子宫静脉白细胞总数比较得知 ,颈静
脉白细胞增幅明显于子宫静脉 ,表明有大量白细胞参
与子宫局部防御 ,使子宫回流血白细胞数减少。
小鼠的肥大细胞能产生 IL23、IL24、IL25、IL26
和 GM2CSF 等细胞因子 , 有广泛的免疫调节作
用[5 ] 。患有子宫内膜炎的妇女 ,其组织中 IL26 含量
较高[ 6 ] 。嗜酸性粒细胞也可释放炎症介质和消灭微
生物的化学物质 ,如过氧化物和溶菌酶等。两种细
胞还可释放能产生激肽的释放酶 ,激肽是一种较强
的血管活性物质 ,能增强血管渗透性 ,从而使血液中
Ig G与子宫组织的微生物抗原结合 ,呈现杀菌作用。
此外 ,两种细胞释放的炎症介质可导致子宫表层上
皮损伤 ,也使血清抗体容易到达宫腔[ 7 ] 。
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