犬猫皮肤真菌病的诊断及药物治疗

犬猫皮肤真菌病的诊断及药物治疗 刘　伟, 金艺鹏, 林德贵 (中国农业大学动物医学院, 北京 海淀 100094) 中图分类号: S855. 4　　文献标识码: B　　文章编号: 052926005 (2006) 0420037202 　　犬猫的皮肤真菌病是一种高度接触性的人畜共 患病。病情顽固, 可以造成交叉感染。能够引起皮肤 真菌病的病原菌主要是犬小孢子菌 (M icrosp orum can is)、石膏状小孢子菌 (M icrosp orum gyp seum )、石 膏状毛癣菌 (T richop hy ton gyp seum ) 和疣状毛癣菌 (T richop hy ton verrucous)。随着犬猫等伴侣动物数量 的增加, 它们的皮肤真菌病给人类的公共健康事业带 来的威胁也越来越大。因此, 犬猫皮肤真菌病的诊断 和治疗在兽医临床上也显得更加重要。 1　诊断 1. 1　临床诊断　患有皮肤真菌病的犬猫常常表现为 剧痒, 其外观多种多样, 一般有不同程度的脱屑、脱毛 和结痂。毛发变脆、毛干易断、毛根易脱。毛根萎缩, 在 显微镜下可见其呈高粱穗样, 附有多量竹叶状小孢子, 毛干呈管套状, 毛干周围包裹着致密的孢子。 严重的表现为大面积脱毛, 皮肤上可见到红疹, 脱毛区覆盖着油性结痂, 刮去痂皮裸露潮红或溃烂的 表皮。 1. 2　实验室诊断　用牙刷在犬猫患部、病健结合部 梳刷, 刷梳时稍用力, 其总体方向是从前到后, 从上到 下, 直到牙刷上粘有被毛和皮肤碎屑。刷梳结束后, 再 用塑料外罩将牙刷封好, 送至实验室检验。 1. 2. 1　直接镜检　将病料放于一载玻片上, 加 1 滴 10% KOH 制片, 于显微镜下观察到菌丝和孢子, 即可 诊断为真菌病, 对那些具有特殊形态的真菌可以确 诊。 1. 2. 2　培养　将标本接种于沙氏葡萄糖琼脂培养 基, 置于28℃恒温培养3 周。培养期内逐日观察, 并钩 取单个菌落接种于上述培养基的试管斜面上进行纯 培养。在犬小孢子菌感染时, 可见到培养基中心无气 生菌丝, 覆有白色或黄色气粉末, 周围为白色羊毛状 气生菌丝的菌落。在石膏状小孢子菌感染时, 可见到 中心隆起一小环, 周围平坦, 上覆有白色绒毛样气生 菌丝, 菌落初呈白色渐变为棕黄色粉末状, 并凝成片。 石膏状毛癣菌菌落呈绒毛状, 菌丝整齐, 可表现多种 色泽, 中央突起。疣状毛癣菌在沙氏培养基上生 收稿日期: 2004212217 通讯作者: 林德贵 长极为缓慢, 分离阳性率甚低, 添加盐酸硫胺2肌醇酪 蛋白琼脂培养基或添加硫酸铵2脑心浸液琼脂培养基 37℃分离培养良好。 1. 2. 3　菌种鉴定　根据在培养基上的生长状况、菌 落的性状、色泽、菌丝孢子与特殊器官等形态特征确 定菌种, 必要时用乳酸棉酚蓝染色液进行染色, 制片 镜检。 1. 2. 4　鉴别诊断　如果使用以上方法不能诊断时, 可以使用鉴别培养基进行鉴别培养。常用的鉴别培养 基有米饭培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、1% 葡萄 糖玉米粉琼脂培养基、尿素琼脂培养基。 1. 3　荧光性检查　取病料在暗室里用伍德氏灯 (W ood’s lamp )照射检查。开灯5 m in 得到稳定波长 以后再使用, 可见到犬小孢子菌感染发出黄绿色的荧 光; 石膏样小孢子菌感染则少见到荧光; 须发毛癣菌 感染则无荧光。 1. 4　组织病理学检查　在病变部位活检做病理检 查, 是一种可靠的检查方法。为容易见到菌丝, 可用 PA S 染色, 使菌丝及孢子表面染成红色, 便于观察确 定。近年来, 通过免疫组化及荧光抗体染色法进行诊 断, 使真菌病的组织学检查又向前推进了一步。 1. 5　电镜检查　有些用常规方法无法鉴定的菌种, 可用电镜帮助鉴定。一般使用扫描电镜, 观察真菌细 微结构及产孢方式, 从而鉴定菌种。 1. 6　分子生物学在真菌鉴定中的应用　PCR 技术, 可以少量的真菌细胞及单个真菌孢子, 检测其 DNA , 对一些致病真菌已经出特定的引物来鉴 定菌种; 选择通用寡核苷酸及特异性引物检测其核 苷酸系列。分子生物学方法还处于研究阶段, 尚不能 作为常规方法使用, 但其具有广大的发展前途。 1. 7　现代形态学技术鉴定菌种　如使用自动成缘分 析仪、电子颗粒体积, 利用分数几何学分析形态学特 点来鉴定菌种。但以上技术还不够完善, 尚需进一步 研究。 2　治疗 2. 1　外用抗真菌药　20 世纪 70～ 80 年代研制出的 联苯苄唑、酮康唑霜剂透皮性强, 有一定的疗效。20 世纪90 年代初研制的丙烯胺类药物, 其1% 霜剂或溶 液剂, 对皮肤真菌有较好的抑菌作用, 疗效较前几种 73　　Ch inese Journal of V eterinary M edicine　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 中国兽医杂志 2006 年 (第42 卷)第4 期 药物好。但应注意, 单用外用药不易治愈, 必须口服抗 菌药物治疗。 2. 2　内用抗真菌药物 2. 2. 1　多烯类抗真菌药物, 如制霉菌素、两性霉素B 脂质复合物, 有一定的效果, 但副作用较大。其中, 两 性霉素B 在化疗后的抗真菌中效果较好, 但是副作用 较大、价格十分昂贵。 2. 2. 2　灰黄霉素　此药的超微粒吸收良好, 对皮肤 真菌的效果较好。长期内服会损伤肝脏。使用时可按 每千克体重每天 30～ 40 m g, 拌料, 连用 4 周以上, 妊 娠动物忌用。 2. 2. 3　酮康唑　广谱抗真菌药, 由于对肝脏有一定 的毒性故不能长期服用。使用时, 可按每日每千克体 重10 m g, 分3 次口服, 连用2～ 8 周, 服药期间忌喂牛 奶与碱性食物, 偶有过敏反应。 2. 2. 4　氟康唑　三唑类药物, 既可以口服又可静脉 给药, 抗菌谱广。主要抑制真菌的羊毛固醇C214 去甲 基反应, 使麦角固醇合成受阻, 可抑制浅部真菌病, 并 且肝毒性较小。 2. 2. 5　伊曲康唑　三唑类抗真菌药。其作用机制主 要是干扰麦角固醇的合成, 作用于真菌细胞色素P2 450 酶系统, 使麦角固醇不能合成, 使真菌的细胞膜 的通透性增加及细胞壁的甲壳质合成受影响, 造成真 菌细胞内物质漏出或被宿主的细胞吞噬引起真菌细 胞死亡。此药的毒性很低, 对内分泌无影响。 2. 2. 6　特比萘酚　第二代丙稀胺类的抗真菌药物, 其突出的优点在于它具有杀菌和抑菌的双重作用, 主 要通过抑制真菌角鲨烯环氧化酶, 导致角鲨烯聚集, 脂滴沉积于细胞壁及细胞浆内, 引起细胞膜破裂达到 杀菌的目的; 其次可导致麦角固醇的缺乏, 真菌细胞 膜的生长受干扰, 真菌停止生长, 达到抑菌的目的。抗 菌作用与细胞色素P2450 酶无关, 因此不影响人和动 物的内分泌功能, 肝损害极小。利福平可加速特比萘 酚的代谢, 而西咪替丁可抑制之, 故合用时应调整剂 量。 2. 2. 7　Β2葡聚糖合酶抑制剂　主要通过抑制Β2葡聚 糖合酶, 阻滞组成真菌细胞壁的1, 32Β2D 2葡聚糖合酶 的合成而起作用。因为哺乳动物没有细胞壁, 因此这 类药物不会造成哺乳动物细胞的损伤。这类药物中的 一些已经完成了第三期临床验证。 2. 2. 8　真菌蛋白合成抑制剂　这是一类通过抑制真 菌蛋白的合成而起作用的抗真菌药物, 主要通过与 EF22 相互作用发挥作用。而EF22 是真菌在合成蛋白 时多肽链延长的一个必需的转移延长因子。 3　讨论 临床健康犬猫皮肤上的真菌主要是: 青霉、琏格 孢霉、曲霉、毛霉、枝孢霉等腐生菌。但这些腐生菌一 般不认为是犬猫皮肤真菌病的病原菌。而那些寄生或 腐生于人和动物表皮角质、毛发、指甲、爪角质蛋白组 织中的犬小孢子菌、石膏状小孢子菌、石膏状毛癣菌 和疣状毛癣菌等, 因其具有嗜角质性, 在皮肤上大量 繁殖以后通过机械性刺激和有害代谢产物的作用, 引 起局部的炎症和病变。 目前, 尽管对真菌病的诊断手段有了大大的提 高, 但是国内能做真菌检查和菌种鉴定的单位并不 多, 主要集中于一些较大的动物医院和科研机构。并 且, 皮肤真菌病尤其是浅在性真菌病和系统性真菌病 还没有引起人们足够的重视, 因此, 需要不断培训技 术人员, 开展真菌学检查, 提高诊断率。 到目前为止, 能够治疗真菌病感染的药物的种类 还比较少, 抗真菌药物的价格也比较昂贵, 并且治愈 或控制真菌感染所需的时间很长, 药物中毒率也相当 高。如果机体没有有效地免疫功能, 真菌感染就会经 常复发, 彻底治愈真菌病是相当困难的或者说这是不 可能的。目前认为, 在抗真菌感染中机体起主要作用 的是细胞免疫: 即侵入体内的真菌会使胸腺依赖型淋 巴细胞 (T 细胞) 致敏, 以后再遇到这种抗原, T 细胞 会变形或者产生淋巴因子, 引导吞噬细胞, 使毛细血 管的通透性增加, 使未致敏的淋巴细胞致敏增生, 并 产生细胞毒作用, 从而杀灭侵入机体的真菌。 传统的抗真菌药 (如两性霉素B ) 主要作用于真 菌细胞膜主要成分的麦角甾醇, 这类药物的选择性主 要基于它们对真菌细胞膜麦角甾醇的亲和力比对哺 乳动物细胞膜中胆固醇的亲和力大得多。但是, 这种 选择性只是减少了它们对哺乳动物细胞膜的作用, 而 没有完全消失。为了避免这个问, 理想的抗真菌药 应该是只作用于病原体, 而对其他真核细胞没有任何 作用。真菌细胞壁对真菌来说是比较独特的、非常重 要的结构, 故那些作用于真菌细胞壁组成物 (如Β2葡 聚糖合酶)的抗真菌药物将是未来抗真菌药物发展的 一个焦点。 真菌病在治疗过程中的一个难点问题是, 当我们 对患病动物用药以后, 真菌受到药物的作用而启动了 其菌体中的某个 (些)基因使其转化成了孢子, 因孢子 对各种化学物质的抵抗力很强, 这样就大大降低了药 物杀灭真菌的作用。如何寻找一种药物来抑制真菌这 种自我保护性的转化, 提高抗真菌药物的作用, 有赖 于更深入的研究。 利用分子生物学方法研究真菌病的发病原因、研 究抗真菌药物靶点及药物流出泵的表达等, 将促进人 们对真菌病的发病机理、真菌耐药机理及寻找新型的 抗真菌药物等方面的研究。 (参考文献略) 83 中国兽医杂志 2006 年 (第42 卷)第4 期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Ch inese Journal of V eterinary M edicine