高致病力禽流感综述

!"#$%&’() *+, -’.!&/0 "+,.%&/0 +’ 123 4552 中图分类号：!"#$%& 文献标识码：’ 文章编号：$((")(*$*（+((&）(&)(((,)(+ 禽流感6*789: ":;<=>:?9，*"@是由禽流感 病毒 6*"#@引起的一类烈性传染病，几乎所 有的野生及家养禽类都可感染。高致病力禽 流感 6A-*"@被国际兽医局列为 " 类烈性传 染病，一旦爆发会给养禽业带来毁灭性的危 害。BCD2 年美国禽流感和 BCCE 年墨西哥禽 流感造成相当于现今 B5 多亿美元的经济损 失。BCCD 年伊朗爆发了 AC+4 亚型禽流感， 其损失可达 B555 万美元。BCCC 年 2 月香港 卫生署从患病儿童身上分离到 AC+4亚型禽 源流感病毒，以及 BCCF 年香港禽流感 AE+B 病毒“杀人”事件，赋予了 A-*"# 全新的公 共卫生意义。最近，哈尔滨兽医研究所相继 从家禽中分离到 AE亚型禽流感病毒，并且 均对鸡呈高致病力，说明 A-*" 已经在我国 个别地区出现，并且有在一定范围内爆发的 可能。 $ -./的分类及 01-./的划分 *"# 属 * 型流感病毒，根据表面粘蛋 白的血凝素的不同可分为共 ABGABH 共 BH 个亚型，根据表面糖蛋白的神经氨酸酶的不 同可分为 +BG+C 共 C 个亚型，目前发现的 A-*"# 都是 AE 和 AF3其绝大多数又是非致 病性的。 国际禽病组织 ’"$ 对 A-*"# 从 2 方面 给予了定义：6B@ 任何 *"# 如果给 D 只 IGD 周龄的易感鸡接种 B5 倍稀释的尿囊液毒 5J4K<，于 B5L 内死亡等于或大于 H 只，即认 为是 A-*"#；64@如果一个毒株不是 AE和 AF 亚型，但能致死 BGE 只鸡，则需要做细胞培 养；在不加胰酶的情况下，观察 (-$ 和蚀斑 形成，如果均为阴性则可以认为该毒株不是 A-*"#。 62@ 对所有低致病性 *"# 和其它 *"#，如果不加胰酶能够在细胞上生长，则 要测定血凝素联结肽的氨基酸序列，如果序 列与其他 A-*"# 类似，则认为是 A-*"#， 该定义弥补了过去仅凭死亡率定义的缺陷。 但也有可能出现上述 2 项相互矛盾的情况。 以往曾发生过在试验室证明是非致病性 *"#，在田间却引起了 H5MGD5M的死亡，而 直接实验室证明是高致病性的 *"#，在田间 却仅引起了 B5M的死亡。 + 流行特点 *"# 广泛分布于世界范围内的诸多家 禽和野禽中，同时也感染人和猪、马以及鲸 鱼、雪豹等多种哺乳动物。%N9<< /:>OPN等报 道，已发现的带毒鸟类达 DD 种，实际能感染 的鸟类可能大大超过这个数字。家禽中以火 鸡最为易感。尽管商品鸭中 *"感染较多见， 但也只有 BCFH 年在澳大利亚和 BCD2 年在 爱尔兰发生过 A-*"。 目前，对于 A-*"# 的传播机理尚不明 确。许多研究者认为，无论是通过呼吸道感 染还是肠道感染，病毒传播似乎都与释放出 来的病毒数量有关。但 A-*"# 由于迅速致 死动物，在感染过程中几乎没有排毒过程。 因此，无论在自然界还是通过实验感染， A-*"# 从感染动物传给易感动物的能力都 比 *"# 要差。水可能是重要的传播媒介，鸟 和水禽的粪便是重要的毒源。候鸟迁徙是主 要散毒途径，哺乳动物和其他动物应当考虑 为 A-*"# 的一种潜在毒源，对家禽来讲，人 是最主要的机械传播者，观赏鸟的进出口、 空气传播等也可能为 A-*"# 提供流行途 径。 & 临床症状及病理变化 A-*" 以突然死亡和高死亡率为主要特 征，病程较长者可出现头和面部水肿，冠和 肉垂发绀，脚鳞出血等症状。剖检后，突然死 亡者无明显病理变化，病程稍长者，可见出 血性病变，常见的有喉头气管出血、有粘液， 心冠脂肪点状出血、心包脚厚、心肌迟缓且 柔软。腺胃乳头出血、溃疡，在腺胃粘膜上有 一层脓性分泌物等病变。整个肠道、尤其是 十二指肠、直肠和泄殖腔出血严重。胰脏常 有出血或坏死斑。肾脏常肿胀、有尿酸盐沉 积。脾脏偶有肿胀或出血等。法氏囊有时会 有出血、肿胀或萎缩。青年禽或成禽的生殖 系统病变严重，主要表现为卵黄性腹膜炎， 卵泡膜出血，严重者卵黄变黑、变形、破裂， 输卵管子宫部形成米粒大的水肿。 * 01-./的分子基础及致病机理 *"# 的表面糖蛋白血凝素 6A*@是病毒 致病力的主要决定分子。*"# 感染细胞的先 感染的角色，肺炎支原体感染 后使得蓝耳病病毒和 *-- 等 细菌的感染更加容易。肺炎支 原体感染后，在支气管周围会 有淋巴小结增生聚集，进一步 感染会使机体的中性粒细胞及 淋巴细胞和巨噬细胞趋向集中 到支气管腔及肺部，这样就给 -//% 病毒在肺部持续感染和 破坏营造了良好环境，降低肺 泡巨噬细胞对病原的吞噬和清 除能力，使肺脏对继发细胞感 染的抵抗力下降，导致呼吸道 免疫系统被抑制；感染猪则逐 渐消瘦而后成僵猪或死亡，此 时虽用再好的药物及疫苗往往 也不见效，最好的办法是将重 病猪淘汰，避免病原持续散播。 肺炎支原体与蓝耳病病毒 的关系比较复杂，以下的试验 结果给了我们一些启发：6B@感 染试验：支原体感染，无论在任 何时间6蓝耳病感染前、支原体 与蓝耳病同时感染或蓝耳病感 染后 @，均可使蓝耳病肺炎加 重，病程延长；如受蓝耳病和支 原体双重感染的猪，在感染后 2DL 仍能看到明显症状；若仅 有蓝耳病，感染后 2 周症状就 基本消失。另外蓝耳病感染也 会加重支原体肺炎症状并使病 程拖长。尽管支原体引起的疾 病较轻微，但它却是 -/,( 的 主要诱发者，因此即使猪群发 生低水平支原体感染，也能使 蓝耳病很快表现出临床症状。 64@免疫试验：注射支原体疫苗 可同时降低支原体和蓝耳病混 合感染后的肺炎病变，也就是 说免疫后不但可以预防支原体 感染，而且对减轻蓝耳病病毒 感染也有作用。不过，在注射支 原体疫苗前已受到蓝耳病病毒 感染或注射疫苗后紧接着感染 蓝耳病或一周内再注射弱毒疫 苗，这些都会降低支原体疫苗 的保护效果。 由上可知，两者关系密切， 支原体肺炎的控制成败易受蓝 耳病影响，蓝耳病也会因支原体 感染而变本加厉。总之，肺炎支 原体和蓝耳病病毒在 -/,( 中 扮演着非常重要的角色，这也正 是预防 -/,(的关键所在。 高致病力禽流感综述 杨翠华 宫新城 韩永卫 钟秀会 6河北农业大学，河北 保定 5FB55B@ 收稿日期：4554QB4Q25 ·兽医专辑·疾病综述 HQ Q 畜禽业 !""# 年第 # 期 总第 $%% 期 决条件是 &’ 能否被裂解为 &’$和 &’!。当 ’() 吸附到细胞 膜受体上时，被称为“融合肽”的 &’!* 末端可插入细胞膜的 脂质双层，在病毒囊膜和细胞膜之间形成一个通道，两膜进 一步融合，病毒核酸得以进入宿主细胞。在病毒复制过程中， &’ 基因可指导合成一条约 %+" 个氨基酸肽链，在加工过程 中切除 * 末端信号肽后，剩余的肽链可被细胞内蛋白酶裂解 为 &’$ 和 &’!，这两条肽链以二硫键相连，形成一定的空间 结构位于病毒的囊膜表面。如果细胞内缺乏相应的蛋白酶， &’ 不能裂解为 &’$和 &’!，所产生的病毒离子将不能入侵 其他细胞，这样病毒的感染将局限于一定的细胞内。通过研 究发现 &,’() 血凝素裂解位点上有多个碱性氨基酸，所以可 被组织内多种蛋白酶识别并切割，从而决定了高致病力毒株 在机体的广嗜性，其结果 &,’() 迅速突破器官屏障而造成全 身性感染，甚至导致宿主的死亡。 此外裂解位点附近的糖链也可能影响到酶对 &’ 的裂 解。$-.# 年在美国宾夕法尼亚州流行的低致病性 &%*!与后 来大爆发的高致病力毒株之间的核苷酸及氨基酸分析表明， 两者在裂解位点上均具有相同的碱性氨基酸序列，不同的是 高致病力毒株仅在一个糖基化位点发生病变，失去一个寡糖 链。该寡糖链应位于 &’$和 &’!裂解位点附近。它的存在可 能导致蛋白酶裂解作用的发生。如果裂解位点插入碱性多肽 序列，也可能使其对裂解的敏感性增加，而引起致病性增强， 美国东南禽病研究所的 ,/0123 等对墨西哥中部爆发 &%*!毒 株的研究表明，自然发生的非致病性 ’() 可通过碱性氨基酸 在血凝素蛋白裂解位点的迅速插入而获得高致病性的表现 型。这种外源碱性氨基酸的插入现象在流感病毒的适应和进 化过程中普遍存在，也是高致病力毒株产生的重要原因之 一。 ! 实验室诊断 由于 &,’( 临床症状和剖检变化差异较大且无特异性， 所以确诊要靠病原学和血清学等实验室检查。 !"# 病原学检查 %4$4$ 病原分离：以棉拭子从泄殖腔中采集病料，放入加有抗 生素的无菌培养液中，最好在低温567或89"7:或以液氮或干 冰保存。病料样品在保存或运送前可制成 $"; < =的悬液，低速 离心、澄清。通常用于分离病料的材料是 >,?鸡胚。取处理好 的病料 "4#@A，以尿囊腔途径接种 -B$$ 日龄鸡胚，#97孵化 61，弃去 !6C 死亡鸡胚，收获剩下的活胚及死胚尿囊液。系列 稀释后测定血凝效价，阳性者证明有 ’() 存在，然后进入禽 流感病毒分型鉴定。初代尿囊液和血凝实验结果如为阴性者 再传 $ 代，再测血凝效价，仍为阴性是判为 ’(阴性；传代后测 血凝效价为阳性时，需做进一步鉴定实验。 %4$4! 毒力鉴定：’() 的毒力可以通过实验动物测得，也可利 用分子诊断技术结合序列分析从实验室直接获得。常规实验 中一般采用静脉接种致病指数5(),(:测定法来衡量分离毒的 致病型。其方法为取经纯化的 $" 倍稀释的感染 ’(及胚尿囊 液，以 "4!@A <只的剂量接种 $" 只 +B. 周龄 >,? 鸡，观察 $"1 后计算 (),(值。当 (),(值大于 $4! 时，断定此分离株为 &,’( 病毒株。该方法进行感染病毒的毒力测定需在病毒分离的基 础上，整个过程至少需要 # 周以上。哈尔滨兽医研究所详细 分析了 ’() 遗传变异及其分子结构与致病性的关系，在此基 础上利用 DE8,FD 技术结合序列分析，攻克了 ’( &%和 &9亚 型病毒高低致病力鉴别的分子诊断技术，该法在一周内便可 确定感染的 &%或 &9亚型禽流感是高致病力还是低致病力。 目前一般认为核酸序列分析方法似乎是一种更准确可行 的方法。特别是它能从分子水平提示 &,’() 甚至潜在的 &,’() 毒株。陈福勇等采用 DE8,FD 法从禽流感 ’ <鸡 <北 京 < $ < -+5&-*!:株克隆了核蛋白5*,:基因。将其序列与数株 ’ 型流感病毒 *, 序列进行比较，相互间同源型在 -%46GB -+4+G。这一结果为研究核酸探针和其他方法诊断禽流感奠 定了基础。吴清民等将 ’() &-*!亚型毒株 *,基因 #’端较为 保守的、约 #%"HI 的编码序列通过限制性内切酶 &J/((( 切 割、分离后制备成探针，可特异性的与 ’ 型流感病毒的基因 组 D*’ 或含有该病毒核蛋白基因 3K*’ 的重组载体结合。贾 永清等对 &,’( 分离株 ’ < LMMN/ < L2JO;1MO; < # < -+ 5&%*$:&’ 基因进行了序列测定，并对其核苷酸和所推导的氨基酸序列 与有关的 &% 亚型毒株进行了比较分析。张建林等也对 * < LMMN/ < L2JO;1MO; < $ < -+5&%*$:病毒株进行了全基因克隆和序 列分析。 !"$ 血清学鉴定 ’() 能凝集马、驴、山羊、绵羊的细胞，且血凝性不能被新 城疫和减蛋综合症的抗体抑制，而能被 ’(的抗体所抑制，则 分离的病毒可能是 ’()。’() 血凝素亚型的鉴定必须通过 ’() 与 &$B&$+亚型的抗血清进行 &( 试验，鉴定毒株的血凝 素亚型。也可用酶联免疫吸附试验5P=(>’:以酶标记抗原5抗 体:与抗体5抗原:反应，通过显色反应检测相应抗体或抗原。 全病毒 P=(>’ 和斑点 P=(>’ 长期以来被广泛应用于 ’( 的实验室诊断中。李海燕等以重组杆状病毒表达的禽流感病 毒和蛋白50*,:为包被抗原，建立了 0*,8P=(>’ 诊断技术，可 检测禽流感病毒各亚型阳性血清，并能检出已知各亚型 ’( 病 毒株及所有变异 ’(病毒株的阳性血清。 % 防制 虽然目前 &,’() 毒株比较少，但其危害性相当大，所致 疫病爆发时造成鸡群突然死亡和高死亡率。因此我们应该利 用分子诊断技术及时发现高致病力和潜在致病力的高致病力 毒株，及时捕杀。鉴于水禽在贮存并传播 &,’() 等方面的意 义，定期检测鸭等水禽体内及水中的 ’() 存在情况，对于预 防控制 &,’(的爆发或流行将有十分重要的意义。同时 &,’( 病程较长时，除了与鸡传染性法氏囊、传染性支气管炎、减蛋 综合症等病毒混合感染外，几乎无一例外的存在大肠杆菌的 感染史，在诊断和防制时应引起注意。 目前对 &,’( 仍不主张治疗，而对温和型禽流感也无可 靠的治疗方法。盐酸金刚烷胺对低致病性毒株引起的温和型 禽流感有一定防治效果，可在感染前数日或感染早期应用。而 中药预防和治疗现在仍未见有报道。清热解毒药如板蓝根、葛 根、大青叶、双花、连翘、公英、射干、山豆根等，能否对于预防 和控制 ’() 有一定作用，可能需要进一步的研究。 对于 &%和 &9亚型以外的 ’(防制，应结合我国的国情， 采取预防为主的防制策略。除进行常规防制外，疫苗免疫是控 制禽流感疫情的关键环节、主动措施和最后防线。目前全国 &-亚型禽流感的疫情基本明了；农业部制定研制的禽流感灭 活疫苗安全有效。$--% 年墨西哥 ’( 的有效扑灭正是籍助长 达 # 年的 . 亿 % 千万羽份禽流感灭活疫苗的预防注射。现在 常用的疫苗有：弱毒疫苗、灭活油乳剂疫苗、亚单位疫苗、重组 活载体疫苗、核酸疫苗等。 参考文献&略’ ·兽医专辑· 疾病综述 98 8