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血清K_ras基因突变检测联合CA19_9测定在胰腺癌诊断中的应用

2011-05-20 3页 pdf 276KB 14阅读

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血清K_ras基因突变检测联合CA19_9测定在胰腺癌诊断中的应用
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KKK S ! 离心 ’$ B68,分离血清,T JKU保存备用。 ’R !R ! 血清 ,+-./基因第 ’!密码子突变的检测 按 VW*.B? M@77= ,65 2VW*X91,).5 17R !"’KL,X<-B.8A > 操作步骤抽提 01*。采用突变富集 F)G+GHIF法,对 ,+-./基因第 ’!密码子突变进行检测 & ! (。简述如下, 设计错配引物 F’、F!,对血清 01*进行第一次 F)G 扩增,以产生一个 "#$!酶切位点。扩增产物经 "#$ !限制酶(3MW H<-B<85./,9GK$$’)酶切后,稀释 ’KK 倍用 F!及另一引物 FO进行第二次 F)G,对产物进 行 "#$!限制酶酶切。取酶切产物进行高分辨率的 3<5.?;7-琼脂糖(H3) M67?-7=4:5/,).5 17R $K’Y’)凝 胶电泳分析。电泳结果出现 ’O$Z?条带为突变阳性, ’K#条带为野生型酶切产物。 ’R !R O 血清 )*’"+"测定 采用放免法(本院核医 学实验室)进行测定。按试剂合 2 W,XW’试剂合,天津 德普生物技术和医学产品有限公司 > 说明设定正常 值上限 OK[ \ B@,超过正常值上限判定为阳性,反之 则定为阴性。 ’R !R L 统计处理 利用 ]*]软件 (#R ’!)进行 "! 检验。 # 结 果 #" ! 血清 $%&’(突变检测结果 按突变富集 F)G+GHIF法,当 ,+-./基因第 ’! 密码子发生突变时,F)G富集产物(’O$ Z?)不能被 "#$ W酶所酶切。而未发生突变时,酶切后的产物为 ’K# Z?,见图 ’。 #" # 血清 $%&’( 突变结果与血清 )*!+%+ 检测结 果比较 O"例胰腺癌患者中,检测出 ,+-./突变 !Y例,血 清 )*’"+"升高者 !Y例,上述两项指标单独检测胰腺 癌的敏感性均为 J’R J"%,特异性则分别为 YYR !L% 和 $YR Y!%,系列联合法敏感性为 $’R !Y%。,+-./基 因突变在胰腺癌中明显增加,与慢性胰腺炎等胰腺疾 病 (’’R J#%)相比差异有显著性 (% ^ KR KK’)。 )*’"+"值在胰腺癌中也明显升高 (% & KR K$),但在 其它胰腺疾病中也有 L’R ’Y%的阳性率,因此特异性 相对较低。在对照组的血清中未检测到 ,+-./突变, )*’"+"测定值也在正常范围,见 ’。应用平行法联 合检测 (即两项指标中有一项为阳性即为阳性)可提 张 奕,等 R 血清 ,+-./基因突变检测联合 )*’"+"测定在胰腺癌诊断中的应用 图 ’ 突变富集 F)G+GHIF法检测 ,+-./基因第 ’!密码子突 变电泳结果 H6DR ’ 9@<:5-7?;7- 5&46%&< ?" 2# !2 @’6.67&4 !A ! B 3&/767C* %.6* DE F #2G #". 22G #H BG BB 3&/767C* %*/’<6 D I ?BJ K +< F !A # B 3&/767C* %.6* DE F #2G #"L M2G 2A BG BB N&6* .O ,-%./ +’6.67&4 P./ &LC7&’/<> :7QQ*%*46 L*6P**4 (.45%*.675 5.%574&+. .4: L*4794 (.45%*.675 :7/*./*(!! R 2#G ! " S BG BB2); LO 012"-" (&/767C* %.6* P./ /6.67/675.<<> :7QQ*%*46 L*6P**4 (.45%*.675 5.%574&+. .4: L*4794 (.45%*.675 :7/*./*(!! R MG # " # BG BT) U*6*56*: +*6=&: )*4/767C76> )(*57Q7576> , V %./ 012" V " 3.%.<<<*< 5&+L74*: *W.+74.67&4 )*%7.< 5&+L74*: *W.+74.67&4 #2G #" #2G #" "MG A#. T2G !A AAG !M TAG A! T!G "M "MG 2!L 3&/767C* (%*:7567C* C.<’* "?G ?? ABG BB A!G !! "TG !M N*9.67C* (%*:7567C* C.<’* T#G H" M#G H! A2G A! MTG #2 N&6* .O X=* /*4/767C76> &Q (.%.<<*< 5&+L74*: *W.+74.67&4 7/ &LC7&’/<> =79=*% 6=.4 6=.6 &Q ,-%./ &% 012"-" :*6*567&4(!! R #G 2Y " S BG B2);LO X=* /(*57Q7576> &Q /*%7.< 5&+L74*: *W.+74.67&4 7/ &LC7&’/<> =79=*% 6=.4 6=.6 &Q ,-%./ &% 012"-" :*6*567&4(!! R HG 2$ " S BG BT) 表 ! 胰腺癌患者 "#$%&突变与 ’()*#* 检测结果比较 +,- .%/0 ! (1%23&4& 56 789 :92%7451&84; /97<991 "#$%& =919 >?7%7451 %1@ A29B%79@ ’()*#* +,- 表 ) 血清 "#$%&突变检测结果和血清 ’()*#*检测结果 .%/0 ) C979D7451 :9&?27& 56 "#$%& =919 >?7%7451 %1@ ’()*#* 高检测的敏感度("MG A#E)和阴性预测值(A2G A!E), 但采用系列法联合检测 (两项指标必须均为阳性)则 提高了检测的特异度 ("MG 2!E)和阳性预测值 ("TG !ME),但降低了敏感性和阴性预测值,见表 !。 ! 讨 论 随着细胞和分子生物学研究的不断进展,许多 胰腺癌相关的肿瘤标记物及敏感特异的基因标记相 继被发现,其中以血清 012"-"测定和 ,-%./基因密 码子 2!突变的检测最具代表性。前者在临床上已被 广泛应用,在胰腺癌中明显升高,具有一定的诊断价 值,但其在急、慢性胰腺炎、肝胆疾病以及胃肠道恶 性肿瘤中都有超过 !BE的检出率,因此对胰腺癌诊 断的特异性相对较低 Z ? [。另外,012"-"在早期胰腺 癌中常不升高,因此单用 012"-" 进行胰腺癌的筛 查会造成较高的假阳性率与漏诊率。,-%./癌基因则 弥补了这方面的不足,,-%./在胰腺癌患者中有#TE \ "TE的突变率,且几乎都集中于第一外显子的2! 密码子,且被认为突变发生在胰腺癌的早期 Z M [,这使 得检测 ,-%./ 基因第 2! 密码子突变胰腺癌早期诊 断成为可能。近年来有许多文献报道从胰腺癌患者 的各种标本 (包括胰腺细针穿刺组织、胰液、十二 指肠引流液以及血清)中检测 ,-%./基因第 2!密码 子的突变来探讨对胰腺癌进行早期诊断的可能 性。如 @&%.等 Z T [以胰腺癌组织细针穿刺物为标本, 用30]-]^_3法进行 ,-%./突变检测,检测到 "!E (22 K 2!)的突变率。8*%6=*<*+>等 Z H [用同样的方法检 测 !!例胰腺癌患者纯胰液标本,突变率为 ##E。 @’<5.=>等 Z # [ D对 !2例晚期胰腺癌患者的血样进行 了检测,突变率为高达 A2E。除血清标本外,其它方 法因取材困难,难以在临床上推广。本研究中有 #2G #"E的胰腺癌患者血清中可测到 ,-%./ 基因第 2!密码子的突变,而且特异性较高,与文献报道结 果相近 Z A [。本组胰腺癌患者血清 012"-"的阳性率亦 为 #2G #"E,与 ,-%./结果的符合率为 T2G !AE,说明 两者具有较大的互补性,当做平行联合检测时,可以 提高胰腺癌诊断的敏感性和阴性预测值,减少漏诊 的概率,由于特异性较差,此法较适用于门诊病人的 筛选。而系列联合检测则可提高诊断的特异度和阳 性预测值,提高诊断的正确性。如果血清 ,-%./基因 突变和 012"-"均为阴性时,则胰腺癌的可能性极小 (S TG 2?E)。我们认为可以将 ,-%./做为一种潜在的 肿瘤标志物与 012"-"联合应用于胰腺癌的筛查中, 这将使胰腺癌的早期诊断变得快速、准确、及时。 本研究还发现,,-%./突变率在胰腺癌以外的其 它胰腺疾病,远低于血清 012"-" 阳性率。这提示 ,-%./突变检测可能对胰腺癌与良性胰腺疾病的鉴别 诊断有帮助,但此方面的研究文献报道不一,尚有待 进一步研究。 Z参 考 文 献 [ ‘.%/=.P 1_Y ^*%4.4:*a-:*< 0./67<<& 0G 3.45%*.675 5.%574&+. Z b [ G N c49< b @*:Y 2""!Y ?!H(#)O MTT V MHTG 奉典旭,韩天权,蒋 渝,等 G 胰腺癌患者血浆 ,-%./基因突 变检测的研究 Z b [ G 中华外科杂志,!BBB,?A(2B):#H# V ##BG )5=+7*9*< ‘G X’+&% +.%d*%/ 74 (.45%*.675 5.45*%-5’%%*46 5&45*(6/ Z b [ G ;*(.6&9./6%&*46*%&<&9>Y 2"A"Y ?H DH F O MMH V MM"G _*+&74* N]Y b.74 )Y ;’9=*/ 0@Y *6 .Y 2""!Y 2B! D2 F O !?B V !?HG @&%. bY 3’79 3Y 8&.:./ bY *6 . ’/749 6P& 6*5=47e’*/ P76= :7QQ*%*46 :*6*567&4 <7+76/ Z b [ G 0<74 0=*+Y 2""AY MM D22 F O !!M? V !!MAG 8*%6=*<*+> 3Y 8&’7//&4 @Y c/5&’%%&’ bY *6 . :7.94&/7/ &Q (.45%*.675 5.45*% Z b [ G 144 f46*%4 @*:Y 2""TY 2!? D? F O 2AA V 2"2G @’<5.=> ;cY _>.’6*> bY _*:*%%*> 0Y *6 . &Q ,-%./ +’6.67&4/ 74 6=* (<./+. &Q (.45%*.675 5.45*% (.67*46/ Z b [ G 0<74 0.45*% ]*/Y 2""AY M D! F O !#2 V !#TG X=*&:&% _Y @*
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