人脐带Wharton's jelly源间充质干细胞培养中碱性成纤维细胞生长因子的作用

中国组织研究与临床康复笏，4誊笏79期2010—05—07出版 JournalofClinicalRehabilitativeTissueEngineeringResearchMay7-2010VoL14,No．19 零历露 ,kJJ黼Wharton’sjeIly源间充质干细胞培养中碱性成纤维细胞 生长因子的作用料★◆ 巴云涛t2，关方霞3．胡祥4．5，杨波他，杜英6，张天祥1，田毅1，乔晓俊1，王成春3，谷晨熙7，雷宁静3，王晓薇8 Effectsofbasicfibroblastgrowthfactorincultureofmesenchymalstemcellsderivedfrom Wharton’sjellyofhumanumbilicalcord BaYun-tao他，GuanFang．xia3，HuXian94’’，YangB01’2，DuYin96，Zhang"13an-xian91，"lianYil，QiaoXiao-junl，WangCheng-chun3， GuChen．xi7，LeiNingdin93。WangXiao-wei8 Abstract BACKGROUND：Duringcultureofmesenchymalstemcells(MSCs)der．ⅣedfromWharton’sjellyofhumanumbilicaIcord．MSC morphologytendstobi羌,omehypertrophicandirregular．MSCswerefoundtohavehigherrateofdeathandnotbeadapttobe adherentafterpassage．1tisnecessarytofindamethodtomaintainitsstability． 0BJECTIvE：TojsolateMSCsfromhumanumbilicaIcordwharton’sjellybytissueblockmsU／尬d。andtoinves口gatebasJc fibrobtastgrowthfactor(bFGF)effectsonbiologicalcharacteristicsofMScs． METHODS：Humanumbjlicacordmasenchymalsterncells(hUCMSCs)wereseparatedbytissueblockmethod．rissue fragmentsincontroIgroupwereculturedingrowthmediumconsistingofDulbecco’sModifiedEssential／F12Media(DMEM／F12) and1O％volumefractionoffetaIbovineserum．Ti$suefragments；nexperimentgroupwereculturedingrowthmediumincluding 20pg／LbFGFbesidestheseincontroIgroup．Timeoftissueblocksemigrating胁cellsandmorphologyofcellswereobserved． Themediumwaschangedevery3—4days．Whenthecellsreached80％一90％confluency，theyweredetachedwith0．25％trypsin andwerepassagedataratioofl：20r1：3． RESULTSANDCONCLUSl0N：Afewlongspindle0rflatfibroblast-likecellswerepresentedfirstlyafter8-1OdaysofincubatJon incontrolgroup．whileinexperimentgroupjttook6—8days．0118weekIater．10tsoflongspindleorfiatflbroblast-likecellslike whirlpoolaroundmJcro-masswerepresentedjntwogroups．Inthefirst3passages。celImorphousweresimilarandcellswere passagedatapproximatelyequivalentlime．Afterpassage3。cellsinexperimentgroupwereeasiertobeadherent，Iowerrateof deathandbetterproliferationability(shownbygrowthCUIWe)incomparisonwiththeseincontrolgroup．Flowcytometryrevealed thatcellcycleat仇epassages3and6showedthepercentageofGo／G1wasmorethan70％respectively．C1344andCD29were highlyexpressedOnthesurfaceofpassages3and6cells．whereastheexpressionofHLA-ABCwasJeaspos卅ve．butlherewas negativeforCD34，CD45andHLA-DRCells仃omWharton’sjellyofthehumanumbilicalcords，whichhavethebielogical characteristicsofMSCs．havebeenisolatedbytissueculturemethod．bFGFcanshortenthetimethatMSCsarepresentedfirstly, improveitsadherenceandproliferationabilityandmaintainitsmorphologicalstabilityinsoftiedegree．morQoverkeepsurface markerexpressionstabilityofMSCs． BaYT．GuanFX，HuX，YangB，DuY．Zhang"IX．"l'ianY，QiaoXJ，WangCC，GuC)(，LeiNJ，WangXW．Effectsofbasicfibroblast growthfac【orincultureofmesenchymalsterncellsderivedfromWharton’sjellyofhumanumbilicalcord．ZhongguoZuzhi GongchengYanjiuyuUnchuangKangfu．2010；14(19)：3513-3517，fhttpJ／www．Orter．cnhttpJ／en．zglckf．com] 摘要 背景：培养脐带源间充质干细胞过程中，细胞形态常易变得宽大不规则，传代不易贴壁，死亡率商，找到一个维持细胞稳 定的方法是有必要的。 目的：拟采用组织块培养法从人脐带Wharton’sjelly中分离培养间充质干细胞，观察碱性成纤维细胞生长因子对其生物学 特性的影响。 方法：采用组织块法分离培养和扩增脐带组织问充质于细胞，对照组用DMEM／F12培养摹+体积分数为10％胎牛血清培养， 实验组用DMEM／F12培养基+体积分数为10％胎牛血清+20pg／L碱性成纤维细胞牛长因子培养。观察组织块游出细胞的 时间和细胞形态，每隔3d或4d更换培养液，待细胞达到80％一90％融合时，用0．25％胰酶消化后，按1：2或1：3的 比例传代。 结果与结论：倒置显微镜下观察对照组中从8-10d开始有细胞从组织块四周游出见占壁，实验组中从6-8d开始有细胞从组 织块四周游出贴壁。1周后可见多数争长梭形或扁平形的成纤维样细胞，围绕组织块成旋涡状，前3代细胞形态及传代间隔 时间两组基本相同i3代以后实验组细胞较对照组易于贴壁，传代死亡率低，生长曲线提示增殖能力强。流式细胞术两 组细胞周期显示第3，6代70％以上的细胞处于Go／G1期，且第3。6代细胞均阳性达CD29。CD44，弱表达HLA-ABC， 不表达CD34、CD45和HLA-DR。结果提示采用组织块培养法可从人脐带Wharton’sjelly中分离出具有间充质于细胞特 性的细胞，且碱性成纤维细胞生长因子能使细咆从组织块游出时间提前和有助于促使细胞贴壁，一定程度上维持细胞形态 稳定性，提高增殖能力，并且不改变细胞的表面标志物表达。 关键词：碱性成纤维细胞生长因子：同充质千{驵胞：人脐带；Wharton’sjel|y；干细胞 doi：10．3969／j．issn．1673_8225．2010．19．019 巴云涛，关方霞，胡祥，杨波，杜英，张天祥。田毅，乔晓俊。王成春，谷晨熙，雷宁静，王晓薇．人脐带Wharton’sjelly 源间充质干细胞培养中碱性成纤维细胞生长因子的作用【J】．中国组织工程研究与临床康复。2010。14(19)：3513—3517． [http：／／www．crter．orghttp：／／cn．zglckf．coml ISSN1673-8225CN21—1539／RCODEN：ZLKHAH 。Depatlmentof Neurosurgerf,First 朋liatedHospital． Zhengzhou University, Zhengzhou450052． Ha-ianProvince， China；ZOpening LaboratoryforKey Subject,Henan InstJtuteofClinicel Meaicine．动engzhou 450052．Henan Province．China； ∞epartmentof Bioengineering。 办engzhou Un．~ersity, Zhengzhou45咖'． I'慨anProvince． China；‘Jiangsu PublicTechn0Iogy ServicePlatformof SternCelIsand Bio廿1erapy,倒曲Ou 225300．Jiangsu Province，China； 鼍hanzhanBeikeCelI Ef、gineering|nstitute。 Shenzhen518000． GuangdangProvince。 China；"Department ofMicrobiologyand ImmunolegY．College ofBasicMedical Sciences．Zhangzhou University, 办engzhou4500敛． H蜘1anProvince． China；’Oepartment o『CliniceIMedicine． Zhengzh伽 University, Zhengzhou450001． HananProvince． China．。Collegeof LifeScience，Hunan NormaIUniversi饥 Changsha410081． HunanProvince。 China 3513 万方数据 Administrator 高亮 醌露删矾矾呷 巴云涛，等．人脐带Wharton；sje#y灞两壳殛于组强培葬中碱性戒纾维细匏生长陶f的作黾 BaYun-teo★． Studyingformaster’e degree，Attending physicJan。 Departmentof Neurosurgery．First AffiliatedHcepltel。 Zhengzhou University, ZhengzhdJ4∞O鸵． HenanProvinCe． China．Opening LaboratoryforKey Subjact，Henan lnstituteofClinicel Medicine，Zhengzhou 450052，Henan ProvinCe，China bayunte0790421@ 126corn GuanFang-，da☆． DoctonProfeesor, Departmentof Bioengineering， Zhengzhou University, Zhengzhou4500们． HenanProvince。 China guanfang订a@126． corn BaYun-taoandGuan Fang-xiacen臼1buteq equallytothisarticle． Correspondenceto： YangBo，Master, Professor,Doctoral supervisor, Departmentof Neurosurgery,First AmliatedHospitaI． Zhengzhou University, Zhengzhou4500鸵． HenanProvince， China；Opening LaboratoryforKey Subject，Henan JnstituteofClinicaI Medicine．Zhengzhou 450052。Henan Province．China yengb096@128．coon Supportedby： Third-Stage ConstructJonProjSOt o『211Progt'atT=In Zhengzhou University’：tha JiangsuTaizhou PublicTechnology ServicePlatformof MedJcine．Nn BM2008146* 0引言 间充质干细胞目前主要来源于骨髓，但是骨 髓间充质干细胞存在污染的可能，骨髓细胞必须 通过侵入的途径获得，且其随着年龄的增长，干 细胞数量显著减少I_¨。许多研究机构已经在其他 组织中寻找到多能干细胞，人脐带Wharton’s ielly来源的间充质干细胞以其取材范围广，非侵 入性，培养方法简便，细胞数量多，较强的分裂 增殖能力使其被大量应用存在可能，因而备受关 注。传统的组织块分离培养法是将剪碎的小组织 块接种于DMEM，F12培养基+体积分数为10％ 胎牛血清培养液中，然而作者在培养过程中发现 传至三四代后的细胞形态变得宽大而不规则，不 易贴壁，死亡率高。Majore-等[2]曾报道同一子代 的脐带源间充质干细胞中体积小的细胞比体积 大的细胞有更强的增殖能力，且在长期的培养扩 增过程中体积小的细胞有朝向体积大的细胞转 化的～种趋势，这就需要寻找一种尽量维持细胞 形态稳定的方法；实验中发现加入一定量的碱性 成纤维细胞牛长因子能在一定程度上缓解这些 情况的发生，那么两种培养液培养的细胞生物学 特性是否有区别呢? 1材料和方法 ：细胞学体外实验。 时间与地点：于2009-06／12在郑州大学医 学院实验中心完成。 材料： 人脐带标本来源：正常剖宫产的健康产妇志愿 捐献的脐带12份，孕38-42周，检测乙肝5项、 HCV、HIV、梅毒等其他相关传染性指标均呈阴性。 主要试剂及仪器： Received：2010-02-03试剂及仪器 Accepted：2010-03-27．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．一 DMEM，F12培养基 胎牛血清 碱性成纤维细胞生长因子 3514 来源 流式抗体CD29-PE、CD44-FITC、 HU、．ABC．FITC、CD45．PerCP、 HLA．DR-FITC、CD34·PE， CD45-PerCP 流式细胞仪 IX71型例置相差显微镜 G旧COBRL公司 杭州四季青公司 北京双鹭药业 有限公司 美国BD公司 美国Becton Dickinson公司 Olympus。日本 实验方法： 脐带组织间充质干细胞的分离、培养和扩增： 无菌条件下取12份新鲜脐带，每根长约10cm， 将脐带外膜剥离并将两条脐带动脉和一条脐 带静脉去除，用PBS液将充分冲洗后保留 Wharton’sje,y，并将其剪碎至约1mmx1mmX 1mm大小组织块，将组织块直接接种于75c一 培养瓶中分实验组和对照组，两组均加入含 体积分数10％胎牛血清和DMEM，F12培养基 5mL，其中实验组再加入终质量浓度20pg／L 碱性成纤维细胞生长因子，于含有体积分数为 5％C02、37℃饱和湿度培养箱中培养，以相 差显微镜观察组织块游出细胞的时间和细胞 形态，每隔三四天更换培养液，待细胞达到 80％-90％融合时，用1：1的2．5g／L胰蛋白酶 和2．0g／LEDTA混合液消化后按1：2或1：3 的比例传代。 酶标仪测量细胞生长曲线：分别选择两组生 长良好的3，6代的细胞，消化离心后加入含体 积分数为10％胎牛血清的DMEMF，12培养基， 调整细胞浓度至1x10 7 L．1，接种于96孔板， 每孔200pL，另外实验组再加入终浓度20pg／L 的碱性成纤维细胞生长因子，于37℃、体积分 数为5％的C02培养箱内培养0(立即检测)，1， 3，5，7，9d，在各时间点作用结束前2h每 ；fL)J【]CCK-820pL。加入2h后，用酶标仪(波 长450nm)钡,JJ定各孔吸光度值(A值)。结果以A 值代表细胞的相对数量，绘制生长曲线。 流式细胞仪检测细胞周期及表型：分别收集两 组培养的3，6代脐带源问充质干细胞1x10。， 固定于体积分数为70％的冷乙醇中，4℃过夜 后，作流式细胞仪检测，计算各期细胞所占比 例；选取两组生长状态良好第3，6代细胞弃去 培养液，PBS洗2遍，消化离心后制成浓度为 1x10”L-1单细胞悬液，Eppendo僭ij[1100IJL 的细胞悬液。采用直接法分别加入20UL鼠抗 人的CD29-PE、CD44-FITC、HbkABC-FITC、 CD45．PerCP、HLA．DR．FITC、CD34一PE、 CD45-PerCP，对照管分别加入同量的鼠抗 人FITC—IgGl、PerCP-IgGl和PE-IgGl避光 室温孵育20rain，PBS洗2次，1300r，min 离心5min，重新制成细胞悬液，流式细胞仪 检测。 主要观察指标：细胞形态学观察；CCK．8 细胞生长曲线测定：流式细胞仪检测间充质干 细胞的细胞周期及表面抗原鉴定。 设计、实施、评估者：实验设计和评估为 户DIBox1200,Shenyang110004cn．zglckf,corn 万方数据 Administrator 高亮 Administrator 高亮 Administrator 高亮 Administrator 高亮 Administrator 高亮 Administrator 高亮 Administrator 高亮 Administrator 高亮 Administrator 高亮 巴云涛．等．A聃带Wharton；sjem／源阀充磕平纳船螭荐中碱性戏钟缝维匏奄长甚f躺fFflZ 第一、三作者，实施干预为全部作者，均经过 系统培训，未使用盲法评估。 统计学分析：由第一作者应用SPSS10．0 软件进行统计处理，两组均数间比较采用配对 t检验分析，a=0．05。 2结果 2．1脐带源间充质干细胞的分离．原代及传代 培养两组中均有细胞从组织块四周游出贴 壁，细胞多为双突起的长梭形或扁平形的成纤 维样细胞，折光度好，核仁明显，贴壁1周后 达80％-90％融合，围绕组织块成旋涡状，然 而两组开始出现贴壁细胞的时间不同，对照组 为8—10d，实验组为6-8d；前3代细胞形态及 传代『日J隔时间两组基本相同，三四代以后，对 照组细胞形态变得宽大扁平不规则样，传代死 亡率高，不易贴壁，实验组细胞形态大致维持 原样，较对照组体积小，传代死亡率低，易于 贴壁。见图1。 2．2脐带源问充质千细胞的细胞生长曲线 取第3，6代细胞进行生长曲线测定发现两组潜 伏期24-48h，之后进入对数生长期。第3，6 代细胞生长曲线见图2。 ISSN1673-8225CN21—1539,'RCODEN：ZLKHAH Figure2 GrowthcurvesofP3andP6mesenchymal stemcells(MSCs)derivedfromhuman umbilicalcordintwogroups：thenumberof MSCspeakedat7d．whilethepeakvalue incontrolgroupwaslowerthanthatin experimentgroup 图2两纽脐带源问充质干细胞分别在第3，6代时 的牛长曲线：细胞增殖约7d达到峰值。对 照组的峰值均较实验组低 2．3脐带源间充质干细胞的细胞周期检测流 式细胞术分析细胞周期显示，各组第3，6代脐 带间充质干细胞，70％以上的细胞处fGc]01期。 2．4脐带源间充质干细胞的细胞免疫表型测定 各组第3，6代细胞CD29、CD44均呈阳性表达， HLA-ABC呈弱阳性表达，两组的阳性表达率差 异无显著性意义(P>0．05)，见表1。 表1 两组第3．6代细胞CD29，CD44。HLA抽C 平均阳性表达率 Table1 Averagepositiverateofe)日pressionof CD29，CD44，HLA-ABCinP3andP6cells inbothgroups (娃s．n=12．％) Controlgroup Experimentgroup Index P3 P6 P3 P6 CD29 7013±585髓．26±60268．38±6236681±641 CD44 48．12±63047．31±5．9351．01±5．615329±5．38 HL≯PABC9．02±3．218．87±3．818．31±288 792±271 。郑州大学第一附 属医院神经外科， 河南省鄯州市 450052；‘河南省 高等学枝临床医 学重点学科开放 实验室，河南省郑 州市450052" ’郑州是学生物工 程系，河南省郑州 市45(3001：4江 苏省千细胞与生 物治疗公共技术 服务平台，江苏省 泰州市225300： 。深圳市北科细胞 工程研究所，广东 省 深 圳 市 518000；。郑州走 学基础医学院微 生物与免疫学教 研室，河，白省郑州 市450052：。郑 州走学：：$床医学 系，河南省郑州市 450001；4考南J币 范大学生命科学 学院，觏南省长沙 甫410081 巴云涛★，男， 1979年生，河南 名郫域县人，汉 族，郑州大学医学 院在读硕士，主治 医师，主要从事问 充质干细胞和脑 肿瘤干细胞方面 的研究。 bayunta0790421 @126．com 并列第一作者：关 方霞☆。女，1969 年生，陕西墙西安 市人，援族，1999 年山东医科赶擘 毕业，博士，教授． 主要从事问质干 细胞与肿瘤干细 胞方面的研究。 guanfangxia@ 126．Gore 通讯作者：扬 波，硕士，教授， 博士生导师，郑州 大擘第一附属医 院神经外科，河南 省 郑 州 市 450052 yangb096@126． com 中囤分类号：R394．2 文献标识羁B 文审堀号：1673-8225 (2010)19-03513-05 收辐El期：2010-02-03 修回日期：2010-03-27 住0100203004／ M 01 3515 万方数据 《醪忍7易2～∞砜。母 巴云涛．等．人瞵带Whartonlsjeny源嘲充囊l：细咆培养中碱性成纡维镏程生长离子的作嚼 CD34、CD45、H擤DR呈阴性，说明实验所分离 培养的细胞具有间质干细胞的表型特征。流式分析见图 3-5。 3516 3讨论 人脐带Wharton’sjelly来源的间充质干细胞以其取 材范围广，非侵入性，培养方法简便，细胞数量多，免 疫原性低刚，且取材方便，无伦理学争议HJ，较强的 分裂增殖能力使其被大量应用存在可能，因而备受关 注。通常它的分离方法包括酶消化分离法和组织块分离 法删，前者消化过于繁琐，经济成本高，消化液较为黏 稠，离心时不易分离出细胞，而后者过程简便易行，经 济成本低，能够短期内得到大量细胞。通常的组织块法 是将剪碎的小组织块接种于DMEM，F12培养基+体积 分数为10％胎牛血清培养液中，然而却发现传至三四代 后常常出现细胞形态宽大而不规则，不易贴壁，死亡率 高，随着代数的增高而越发明显，这给获得大量稳定活 力好的细胞带来一定的困难。而体积小的细胞其活力和 增殖能力要比体积大的细胞强，前者将极有可能成为再 生和移植医学领域应用的对象【zJ，这就需要找到一种保 持细胞形态稳定的方法。而加入终质量浓度20pg／L碱性 成纤维细胞生长因子后，细胞形态学观察这些情况明显 减轻。这可能是由于碱性成纤维细胞生长因子是重要的致 有丝分裂原，可以促进神经干细胞增殖，推迟其分化M01， 促进干细胞子代细胞的存活与增殖111J；与受体结合后可 能通过以下途径将信号传至胞核：①激活腺苷酸环化酶 与鸟苷酸环化酶，磷脂酶C(PLC-r1)磷酸化，又使磷脂酰 肌醇-4，5-磷酸(PIP2)分解为甘油二酯(DG)和三磷酸 户o．Box1200,Shenyang110004cn．zgP．kf．corn万方数据 Administrator 高亮 Administrator 高亮 Administrator 高亮 Administrator 高亮 巴6涛．等i人聩借Whadonjsjelly源慨充质卜细瞻培莽串碱{生减餐维缅豫牛长陶ji魄彳乍惰 肌醇(IP3)，导致蛋白激酶C激活和Cap内流。②与受体 结合后定位于细胞核，影响RNA聚合酶I，加强核蛋白 体基因的转录，以加速细胞由Go—G1和一G1一S期的转 换，刺激细胞的DNA合成增强，促进细胞的分裂与增殖， 维持细胞的纤维样生长。 CCK．8法检测细胞生长曲线方法简便易行，检测快 速，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂； 灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；客观性强。细 胞生长曲线图可以看出：同组细胞而言，随着代数的增 加生长峰值有所下降；针对同一代细胞，加入碱性成纤 维细胞生长因子者其生长峰值明显较未加者高。这说明 随着代数的增加，细胞形态有所变大，单位面积上细胞 数量减少；也可能与随代数的增加细胞增殖能力有轻度 下降，而碱性成纤维细胞生长因子恰能改善这些有关。 流式细胞仪分析显示：两组第3，6代细胞均有70％ 以上的细胞处于Go／G，期，组间以及代数之间无显著性 差异，表明细胞具有维持原有干细胞特性；各组第3，6 代细胞阳性表达CD29，CD44，弱表达HLA—ABC，这 表明分离得到的细胞具有问充质干细胞特性瞄叫，不表 达造血干体细胞及血管内皮细胞的表面抗原标志 CD34、白细胞抗原CD45，这证明其为非造血、非内皮 类细胞【1H4J；CD29阳性表达率60％-80％，CD44阳性 表达率在40％-60％，组间差异无显著性意义(P> 0．05)，这表明加入碱性成纤维细胞生长因子后间充质干 细胞特性未发生变异；HLA-ABC弱阳性表达，HLA-DR 阴性表达，表明此类间充质干细胞免疫原性很低，给细 胞移植带来有利条件。 因此，在培养人脐带Wharton’Sjelly来源的间充质 干细胞过程中加入一定量的碱性成纤维细胞生长因子能 够增强细胞的增殖及活力，维持其成纤维细胞样细胞样 生长而不发生变异，这对以后科研乃至临床应用此类间 充质干细胞，特别是体积小的间充质干细胞大量的应用 提供了一个可行的途径。当然对这些细胞具体的更深一 层次的特性，比如其具体向某一类细胞的分化能力以及 未来再生和移植领域的应用等，还需要进一步的研究。 4参考文献 【11 RagMS，MattsonMPStemcellsandaging：expandingthe possibilities．MechAgeingDev．2001：122(7)：713-734． 121 MajoreI。MorettiP’HassR，eta1．IdentificationofsubpopulatiOf'iS inmesenchymalstemcell—likeculturesfromhumanumbilicalCOrd． CelICommunSignal．2009；7：6． 【31 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CavanaghJF,MioneMC．PappaslS，eta1．Basicfibroblastgrowth fac【orprolongstheproliferationofratcorticaJprogenitorcellsin vitrowithoutaltenngtheircelIcycleparameters．CerebCortex． 1997；7(4)：293-302． 【1伽VaccadnoFM。SchwartzML．RaballoR，烈a1．Changesincerebral codexsizearegovernedbvfibroblastgrowthfactordunng embryogenesis．NatNeurosci．1999；2(3)：246-253． 1111 SunD，BullockMR，McGinnMJ，eta1．Basicfibroblastgrowth fadoPenhancedneurogenesiscontributestocognitiverecoveryin ratsfollowingtraumaticbraininjury．ExpNeur01．2009；216(1)： 56—65． 【12l LuLL，UuYJ．YangSGeta1．Isolationandcharacterizationof humanumbilicaICOrdmesenchymalstemceilswith hematopoiesis-supportivefunctionandotherpotentials． Haematologice．2006：91(8)：1017—1026． 【13]RegerRL，TuckerAH，WolfeMR．Differentiationand characterizationofhumanMSCs．MethodsMolBi01．2008；449： 93．107． 【14] RoubelakisMG，PappaKl，Bitsikav，eta1．MoIecularand proteomiccharacterizatJonofhumanmesenchymalstemcells derivedfromamnioticfluid：compansontobonemarrow mesenchymalsterrcelIs．St鲫CellsDev．2007；16(6)：931-9鸵． 来自本文课题的更多信息一 塞金；锄：郑州大学。211工程”三期建设项目；江苏 泰州医药科技公共服务平台(BM2008146)。 要方崩甓感谢郑州大学第一附属医院妇产科的全体工作人 员在提供标本方面给予认真细致的帮助；感谢郑州大学第一 附属医院检验科的全体工作人员在流式细胞仪检测细胞方 面给予的无私帮助和耐心教导；感谢本研究小组成员胡炜博 士、焦红亮博士．李远博士等给予的耐心指导和帮助。 影盏坤凳基金资助无利益冲突。 壤霹脱未必实验采用脐带沃顿胶的组织块直接培养出 间充质干细胞。通过本实验可以找到一种既能提高脐带源问 充质千细胞增殖能力，又能保持其干细胞特性相对长期稳定 的方法，这对以后科研乃至临床大量应用此类问充质干细 胞，提供了一个可行的途径。 瀑题评估的“金”：CD29。CD44是黾氯公认 的间充质干细胞相对特异性抗原，截止到目前为止，脐带源 问充质千细胞的鉴定还没有真正意义上的金标准，鉴定间充 质千细胞应采用综合的方法。包括①CD29、CD44等相对 特异性抗原的鉴定。②造血干细胞．内皮类细胞的排除。⑦ 向多种组织细胞分化能力的鏊定等。 坦纡群壤髫矽缔搿与石足：①虽然利用组织块培养法成 功分离，培养，扩增脐带源间充质千细胞．但未进一步体外 诱导人脐带源性问充质干细胞定向分化为成骨细胞．脂肪细 胞、软骨、肌琏．肌细胞、神经细胞和肝细胞等多种组织细 胞，以比较两组在体外诱导分化的能力有无差别。②未经过 长期培养后再进一步鉴定两组细胞的特性有无变化．即没有 比较两组细胞的特性在长期培养后有无差异。④以现阶段的 的发展条件问充质干细胞尚未有找到一个能够鉴定的金标 准，这造成鍪定结果可能存在偏移． 提供黼詹≥餐的防爸近几年来。国内外已经有不少关 于间充质千细胞移植治疗多种疾病应用的报道，未来脐带源 问充质千细胞的应用具有独特的优势．有报道认为体积小的 脐带源问充质干细胞较体积大的具有更强的增殖能力，而此 种培养方法在一定程度上恰能相对维持其形态的长期稳定 性，而且提高增殖能力，这为以后临床应用此类细胞，特别 是体积小的细胞提供一个可能可行的途径． 3517 万方数据 人脐带Wharton's jelly源间充质干细胞培养中碱性成纤维细 胞生长因子的作用 作者： 巴云涛， 关方霞， 胡祥， 杨波， 杜英， 张天祥， 田毅， 乔晓俊， 王成春， 谷晨熙 ， 雷宁静， 王晓薇， Ba Yun-tao， Guan Fang-xia， Hu Xiang， Yang Bo， Du Ying ， Zhang Tian-xiang， Tian Yi， Qiao Xiao-jun， Wang Cheng-chun， Gu Chen-xi， Lei Ning-jing， Wang Xiao-wei 作者单位： 巴云涛,杨波,Ba Yun-tao,Yang Bo(郑州大学第一附属医院神经外科,河南省郑州市 ,450052;河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室,河南省郑州市,450052)， 关方霞 ,王成春,雷宁静,Guan Fang-xia,Wang Cheng-chun,Lei Ning-jing(郑州大学生物工程系,河 南省郑州市,450001)， 胡祥,Hu Xiang(江苏省干细胞与生物治疗公共技术服务平台,江苏省 泰州市,225300;深圳市北科细胞工程研究所,广东省深圳市,518000)， 杜英,Du Ying(郑州 大学基础医学院微生物与免疫学教研室,河南省郑州市,450052)， 张天祥,田毅,乔晓俊 ,Zhang Tian-xiang,Tian Yi,Qiao Xiao-jun(郑州大学第一附属医院神经外科,河南省郑州 市,450052)， 谷晨熙,Gu Chen-xi(郑州大学临床医学系,河南省郑州市,450001)， 王晓薇 ,Wang Xiao-wei(湖南师范大学生命科学学院,湖南省长沙市,410081) 刊名： 中国组织工程研究与临床康复 英文刊名： JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH 年，卷(期)： 2010,14(19) 参考文献(14条) 1.Rao MS.Mattson MR Stem cells and aging:expanding the possibilities 2001(7) 2.Majore I.Moretti P.Hass R Identification of subpopulations in mesenchymal stem cell-like cultures from human umbilical cord 2009 3.Moretti P.Hatlapatka T.Marten D Mesenchymal Stromal Cells Derived from Human Umbilical Cord Tissues:Primitive Cells with Potential for Clinical and Tissue Engineering Applications 2009 4.Kode JA.Mukherjee S.Joglekar MV Mesenchymal stem cells:immunobiology and role in immunomodulation and tissue regeneration 2009(4) 5.Fu YS.Cheng YC.Lin MY Conversion of human umbilical cord mesenchymal stem cells in Wharton's jelly to dopaminergic neurons in vitro:potential therapeutic application for Parkinsonism 2006(1) 6.Weiss ML.Troyer DL Stem cells in the umbilical cord 2006(2) 7.Wang HS.Hung SC.Peng ST Mesenchymal stem cells in the Wharton's jelly of the human umbilical cord 2004(7) 8.Kestendjieva S.Kyurkchiev D.Tsvetkova G Characterization of mesenchymal stem cells isolated from the human umbilical cord 2008(7) 9.Cavanagh JF.Mione MC.Pappas IS Basic fibroblast growth factor prolongs the proliferation of rat cortical progenitor cells in vitro without altering their cell cycle 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