HPLC法测定头孢呋辛钠的聚合物

中华临床医药 2004年第 5卷第 3期 Journal。f Chinese ClinicaI Medicine ， 2004，v。I．5， No．3 HPLC法测定头孢呋辛钠的聚合物 艾则孜 (新疆药品检验所，新疆 乌鲁木齐 830002) 摘要：目的 采用 HPLC法测定头孢呋辛钠中聚合物。方法 采用外标法，色谱柱：葡聚糖凝胶 G-10色谱柱 (42X 1 ． 3cm)，流 动相：A，0．1mol‘L。磷酸盐缓冲液 (pH 7．0)，B，0．01％十二烷基硫酸钠溶液，流速：1． Oml·min‘，波长：254nm，进 样量：50Il 1，柱温：室温。结果 线性范围为 10—60Il g·ml ，r=O．9994，精密度试验的相对标准差 (n=5)为 1．7％，重复性 实验的相对标准差 (n=5)为 2．2％，高中低浓度平均回收率分别为 99．2％，100．1％，99．7％；RSD分别为 1．9％，1．5％，2．4％(n：3)。 结论 本法操作简单，准确，灵敏度高，适用于该制剂的质量分析检验。 关键词：HPLC聚合物；凝胶色谱；头孢呋辛钠 中图分类号：R978。1。1 文献标识码 ：A 文章编号：1562—9023(2004)一03—0028—02 Determination of the Polymer in Cefuroxime Sodium by HPLC AI Ze·zi(Xinjinag Institute for Drug control，Urumqi 830002，China) Abstract：Objective To establish a HPLC method for determination of the polymer in Cetizroxime sodium．Methods in the method a Sephad。( G-1 0column(42×l_3an)，mobile phase A，0．1 mol‘L phosphate buffer(pH 7．0)，B a solution of 0．0 1％ Sodium dodecyl sulphate,the flow rate was 1．0ml‘min。。，the detection wavelength Was 254nm，the i~ection volume Was 50 u l，column temperature Was room temperature．Results 11he linearity range wasfrom l 0 to 60 u g‘ml-I ,r-~0．9994，the RSD of precision Was 1．7 n=5)’che RSD of reproducibility was 2．2％，11he average rescoveries of high，middle and low concenffmion werc 99-2％，l O0．1％，99．7％ with RSD 1．9％，1．5％，2．4％(n=3)respectively．Conclusion Then assay method is simple，accuracy，sensitive and call be used for the quality control ofCefumximesodium． Key words：HPLC polymer．Gelfiltratrion chromatograpy．Cefuroxime sodium B一内酰胺类抗生素临床中最常用的基本药物， 同时也是较易发生不良反应药物之一，多年来的研 究已证明，抗生素所致的速发型过敏反应并非由药 物本身所致，而是与药物中存在的高分子聚合物有 关⋯。中国药典 2000年版己对头孢他啶，头孢哌酮 钠等头孢类抗生素中的聚合物制订了限量标准 ‘，采 用简单凝胶色谱系统，由于本方法实验时间过长， 重现性差，色谱柱容易堵塞。因此本文对头孢呋辛 钠的聚合物利用内填葡聚糖凝胶G一10为填料的不锈 钢色谱柱进行测定。 1 仪器与试药 1．1仪器 SSI Series IV泵，SSI Model525紫外 检测器，Rhcaodyne7725I进样阀，Anastar(V5．2) 色谱工作站，Sartorius_卜万分之一电子天平。 1．2试药 蓝色葡聚糖 2000为 Pharmacia公司产 品，头孢呋辛钠对照品 (编号：0493—200001，中国 药品生物制品检定所)，注射用头孢呋辛钠 (4批： O11006、020502、010801、010305)，磷酸二氢钠， 磷酸氢二钠，十二烷基硫酸钠均为分析纯，试验用 水为超纯水。 2 色谱条件 CP2000-I型不锈钢色谱柱 。 2．2流动相 A，0．1mol·L 磷酸盐缓冲液 (oH 7．0) (取磷酸二氢钠 5．83，磷酸氢二钠 21．85，加水 1000ml溶解，混匀，调节 pH值为 7．0)；流动相B， 0．01％十二烷基硫酸钠溶液。 2．3检测波长与其他 检测波长 254r~，柱温是室 温 ，流速 1．0ml·min ，进样量 50 la 1。 2．4系统适用性实验 用ling 1nl 蓝色葡聚糖2000 溶液，以流动相 A为流动相，进行测定，理论板数 n 为 1120，拖尾因子 1．19(见图 1)。 3 方法与结果 3．1线性关系 精密称取蓝色葡聚糖 2000适量， 加入水溶解后，稀释成 lmg·ml 的溶液，再用水 将此溶液稀释，配制浓度为 10，20，30，40，50， 60 la g·ml 的溶液，按上述色谱条件，以流动相 A 为流动相，分别进样 50 la 1，记录各浓度的色谱峰 面积，以浓度为 X，峰面积为 Y，求得回归方程： Y：45016X一151040，严0．9994，结果明，蓝色葡 聚糖 2000溶液的浓度在 10—60 ll g·ml 范围内具有 良好的线性关系。 2．1色谱柱 内填 SephadexG-10~ (40-120um) 收稿日期：2003—10—03；修回日期：2003—11—13 维普资讯 http://www.cqvip.com 中华临床医药 2004年第 5卷第 3期 Journal of Chinese Clinical Medicine，2004，Vo1．5， No．3 ·29· 3．2精密度试验 按上述色谱条件，以 lmg·ml。 取蓝色葡聚糖 2000溶液，重复进样 5次，测得峰面 积的相对标准差 (RSD)为 1．7％。 3．3重复性试验 分别精密称取蓝色葡聚糖 2000 适量，用水稀释成 img·ml。的溶液，以流动相A为 流动相 ，取 50 ll 1进样 ，测得平均峰面积值为 图 I 图 2 图 1蓝色葡聚糖色谱图 A=1924902，RSD为 2．2％。 3．4回收率实验 取蓝色葡聚糖 2000分别制成 1．2mg·ml。、1．Omg·ml。、0．8mg·ml。高，中，低 3个浓度的溶液，按上述色谱条件，以流动相 A为流 动相，依法测定。回收率分别为 99．2％，100．1％， 99．7％；RSD分别为 1．9％，1．5％，2．4％(n：3)。 图 3 图2头孢呋辛钠对照品液 图3头孢呋辛聚合物 3．5样品聚合物的测定 精密称定头孢呋辛钠对照 品约 25mg，置 250ml量瓶中，加水溶解，稀释至刻 度，摇匀，以流动相 B为流动相，进样 50 ll 1，记 录色谱图 (见图 2)，另精密称定头孢呋辛钠样品约 200mg，置 lOml量瓶中，加流动相 A溶解，稀释至 刻度，摇匀，以流动相 A为流动相，进样 50 ll 1， 记录色谱图 (见图 3)，按外标法以峰面积计算，测 定结果 (见附表)。 附表 样品聚合物测定结果 (n=3) 4 讨论 实验结果表明，采用葡聚糖凝胶 G-IO不锈钢色 谱柱，进样量改为 50ll 1时，能改善峰形，缩短检 (k接 37页) 耐药性的产生，以控制耐药菌株的形成、播散和流行。 参考文献： [1] Livermore DM．Beta—lactamases in laboratory and cl inical resistance．C1 in Microbiol Rev，1995， 8：557-584． [2] National committee for cl inical laboratory standars，Performance standards for ant imico— rbial susceptibi1 ity testing．MIO0一s9，NCCLS， l999．19：32～36． [3] Bradford PA，Urban C，Mariano N。et a1．Imipenem resistance in K1ebsiel la pneumoniae is associated with the combination of ACT一1，a plasmid—mediated AmpC beta—lactamase，and the foss of an outer membrane protein．Amtimicrob 出时间，减少拖尾因子，提高分离度。流动相 A的 选择 进行色谱系统选择时，分别用 0．imol·L 磷酸盐缓冲液 (pH 7．0)和 0．Olmol·L。磷酸盐缓 冲液 (pH 7．0)对样品进行分离，结果以0．imol·L。 磷酸盐缓冲液 (pH 7．0)的分离聚合物的效果为佳。 纯水为流动相 B的色谱过程中，色谱峰扩散，拖尾， 以 0．01％十二烷基硫酸钠溶液替代纯水作为流动相 后色谱峰变窄，拖尾现象消失。 参考文献： [1] 胡昌勤．高效液相色谱法在抗生素质控分析中的应用 ()[M]．北京：气象出版社，2001，7． [2] 中华人 民共和国药典委员会．中华人 民共和国药典 2000年版二部[S]．北京化学工业出版社． [3] 李军，黄萍．用 HPLC法测定头孢曲松钠、头孢噻肟钠、 头孢哌酮钠聚合物[J]．中国药品标准，2002，3(3)：50． (编辑 于胜) Agents Chemother，1997，41：563—569． [4] Coudron PE KS．Occurrence anddetection of~anpC beta—lactamase among Escherichia col i， Klebsiella pneumoniae，and Proteus mirabi1is isolates at a veterans medical center．J C1 in Microbi01，2000，38：1791—1796． [5] Bush K．A functional classification scheme for Beta—lactamases and its correlation with molecular structure．Antimicrob Agents Chemother， 1995，39：121 l一1233． [6] 周志慧，李兰娟．两种检测阴沟肠杆菌 AC酶方法的比 较 [J]．中华检验医学杂志，2002，25：88-90． [7] 倪语星．革兰阴性菌一内酰胺酶的耐药性问题 [J]．中华 检验医学杂志，2001，24：201-203． (编辑 于胜) 维普资讯 http://www.cqvip.com