上海口腔医学

[收稿日期]2005-12-15;[修回日期]2006-02-24 [基金项目]青岛市科技局资助项目[2001(市)-038] [作者简介]邓婧(1963-),女 ,硕士,副教授 [通讯作者]邓婧,Tel:0532-82911213,E-mail:dengjing3333@yahoo. com.cn c2006年版权归《上海口腔医学》编辑部所有 [文章编号]1006-7248(2006)02-0210-03 醇取丹参液对几种口腔致病菌的体外抑菌作用 邓婧,张岱尊,杨文静 (青岛大学医学院附属医院 口腔内科,山东 青岛 266003) [摘要] 目的:研究95%醇取丹参溶液对几种口腔常见致病菌的体外抑菌作用。方法:采用杯碟法检测丹参提取液对 牙龈卟啉菌、伴放线放线杆菌、变形链球菌、乳酸杆菌的抑菌活性及最小抑菌浓度,并检测 pH值的改变对其抑菌作 用的影响。采用SPSS10.0统计软件包进行t检验。结果:95%醇取丹参液对牙龈卟啉菌、伴放线放线杆菌、变形链球 菌、乳酸杆菌均有抑菌作用,最小抑菌浓度分别为15.62、15.62、62.50和15.62mg/ml。pH值由3.5上升到7.0时,对伴 放线放线杆菌、变形链球菌、乳酸杆菌的抑菌活性减弱(P<0.05),对牙龈卟啉菌的抑菌活性无影响(P>0.05)。结论: 95%醇取丹参溶液对口腔常见致病菌有抑制作用。 [关键词] 丹参;口腔致病菌;抑菌实验 [中图分类号]R781.1 [文献标识码]A Aninvitroexperimentontheantimicrobialeffectsofethanolextractfromsalviamiltiorrhizabungeonseveral oralpathogenicmicrobesDENGJing,ZHANGDai-zun,YANGWen-jing. (DepartmentofStomatology,TheAffiliated HospitalofMedicalCollege,QingdaoUniversity.Qingdao266003,ShandongProvince,China) [Abstract]PURPOSE:Tostudytheinvitroantimicrobialactivityofethanolextractofsalviamiltiorrhizabungeonsev- eraloralpathogenicmicrobes.METHODS:Antimicrobialactivitiesofethanolextractofsalviamiltiorrhizabungeforpor- phyromonasgingivalisATCC33277,A.actinomycetescomitansATCC24523,Streptococcusmutans,andLactobacillus weredeterminedusingthecup-platemethod.Theminimumantibacterialconcentrationsofethanolextractofsalviamiltior- rhizabungeweremeasured.SPSS10.0softwarepackagewasusedforStudent'sttest.RESULTS:Ethanolextractofsalvia miltiorrhizabungehadantimicrobialactivitiesonPorphyromonasgingivalis,A.actinomycetemcomitans,Streptococcusmu- tans,Lactobacillus,andtheminimuminhibitoryconcentrationswere15.62mg/ml,15.62mg/ml,62.50mg/mland15.62mg/ ml;ThepHofthesolutionwasinfluentialtoitsantimicrobialactivity.CONCLUSION:Ethanolextractofsalviamiltior- rhizabungehasanantimicrobialactivityonoralpathogenicmicrobes.SupportedbyResearchProjectofScienceand TechnologyBureauofQingdaoCity(2001-038). [Keywords]Salviamiltiorrhizabunge;Oralpathogenicmicrobes;Antimicrobialactivity ShanghaiJStomatol,2006,15(2):210-212.http://www.omschina.org.cn/sjs/ 丹参(radixsalviaemiltiorrhizae)为唇形科鼠尾草 属植物丹参(salviamiltiorrhizabunge)的干燥根及根 茎,是祖国药学中应用广泛、价值较高的药物之一, 具有活血化淤等功效。丹参的有效成分可分为水溶 性及脂溶性2部分。用95%的乙醇提取的丹参主要 是脂溶性成分丹参酮[1]。研究证明[2,3],丹参酮对革兰 阳性球菌有明显的抑菌作用,目前已在许多临床科 室用于感染性疾病的治疗,且经长期应用无毒副作 用出现[4]。由于口腔感染性疾病多伴有厌氧菌或微需 氧菌的存在,而丹参酮对这些细菌的抑菌性尚未见 报道。本实验选用常见的几种口腔致病菌作为实验 菌,进行体外抑菌实验,观察醇取丹参液的抑菌作 用,为其在口腔感染性疾病中的应用提供依据。 1 材料及方法 1.1 材料 1.1.1 丹参生药 由青岛大学医学院附属医院中 草药房提供。产地:山东。规格:饮片统货。 1.1.2 菌株 牙龈卟啉菌 (Porphyromonasgingi- 上海口腔医学 2006年4月 第15卷 第2期 ShanghaiJournalofStomatologyVol.15No.2April,2006210· · 表1.不同浓度醇取丹参液对各细菌抑菌环直径测定值的影响(菌环直径mm,x±s,n=6) Table1.Theinhibitionoftanshinoneofdifferentconcentrationsondifferentbacteriae(mm,x±s,n=6) 注:F=298.89、93.53、485.04、119.70,P<0.001 药物浓度组(mg/ml) 牙龈卟啉菌 伴放线放线杆菌 变形链球菌 乳酸杆菌 95%醇取丹参液 4000.00 22.00±0.89 14.95±0.23 18.58±0.80 15.23±0.52 2000.00 14.67±0.82 14.03±0.33 16.33±0.52 11.15±0.23 1000.00 13.75±0.76 12.50±0.45 14.67±0.52 13.32±0.40 500.00 21.83±0.75 16.50±0.55 12.00±0.32 12.83±0.26 250.00 18.22±0.45 15.00±0.32 10.42±0.49 12.08±0.20 125.00 13.50±0.45 14.33±0.41 9.17±0.26 12.58±0.49 62.50 13.67±0.61 13.17±0.41 8.42±0.38 13.92±0.20 31.25 11.37±0.53 12.28±0.23 8.00±0.00 11.10±0.47 15.62 8.31±0.40 11.50±0.55 8.00±0.00 9.33±0.52 95%乙醇对照组 8.00±0.00 8.00±0.00 8.00±0.00 8.00±0.00 valis,Pg)ATCC33277,变形链球菌(Streptococcus mutans,S.C)InbrittC,伴放线放线杆菌(A.actino- mycetemcomitans,A.a) ATCC24523和乳酸杆菌 (Lactobacillus,LB)均由首都医科大学附属北京口腔 医院口腔医学研究所提供。 1.1.3 培养基 MSA培养基,CDC培养基,均由首 都医科大学附属北京口腔医院口腔医学研究所自配。 1.2 方法 1.2.1 丹参液的提取 将500g丹参生药用 95%乙 醇 3L浸泡 12h后过滤,再加入 95%乙醇 3L浸泡 1.5h后过滤,合并滤液,并在真空负压、温度 50℃的 条件下,应用旋转蒸发仪回流乙醇,得到125ml原液 (即 4000mg/ml,相当于每毫升醇取原液含 4000mg 丹参生药)。 1.2.2 丹参液的稀释及分组 按倍比稀释原则,将丹 参醇取原液(4000mg/ml)用95%乙醇稀释成8个浓度 (2000、1000、500、250、125、62.5、31.25和15.62mg/ml) 作为实验组;95%乙醇作为对照组。将2组药物用过 滤器(D=0.22μm)过滤消毒。4℃保存备用。 1.2.3 抑菌实验 变形链球菌采用 MSA平板培养 基,置于厌氧罐中,微需氧环境(N290%、CO25%)、 37℃温箱孵育48h。牙龈卟啉菌、伴放线放线杆菌采 用CDC平板培养基,置于厌氧罐中,厌氧环境(N2 80%,H210%,CO210%)、37℃温箱孵育120h。乳酸杆 菌采用 CDC平板培养基,置于厌氧罐中,微需氧环 境、37℃温箱孵育120h。用取菌环取菌种分别均匀 密布于各自的培养基上,进行培养、传代、增菌;用取 菌环从各平板培养基上取新鲜的细菌,将其溶于一 定量的生理盐水中,制成108～109CFU/ml的细菌悬 液;在每个新配好的各平板培养基中滴入0.1ml菌 悬液,用三角棒均匀涂布;每一平板培养基内放入 4 个钢管(钢管内径 6mm、外径 8mm、高 10mm),钢管 与钢管间留有一定的距离,在钢管内加入不同浓度 的测试溶液。37℃温箱孵育,变形链球菌孵育 48h, 乳酸杆菌、牙龈卟啉菌、伴放线放线杆菌孵育 120h 后,取出观察并记录抑菌环直径。每次实验中每一药 物浓度重复2遍,实验重复3次。 1.2.4 pH值对丹参液抑菌效果的影响 用酸度计 测定 95%醇取丹参原液(pH值为 3.5),在 2ml丹参 原液内加入6mol/LNaOH数滴,使其pH值为7.0,用 pH值分别为 3.5、7.0的 2种丹参原液对变形链球 菌、乳酸杆菌、牙龈卟啉菌、伴放线放线杆菌进行抑 菌实验,方法同上。 1.3 统计学处理 实验数据用x±s表示,各浓度间比较采用方差分 析,不同 pH值的抑菌性比较采用 t检验,以上统计 学处理均采用SPSS10.0统计软件包完成。 2 结果 2.1 95%醇取丹参溶液的抑菌效果 醇取丹参液对牙龈卟啉菌、伴放线放线杆菌、变 形链球菌、乳酸杆菌均有抑菌性,其最小抑菌浓度分 别为15.62、15.62、62.50和15.62mg/ml。对变形链球 菌的抑菌作用随丹参液浓度的增加而增加(P<0.05)。 对牙龈卟啉菌的抑菌性,4000mg/ml与 500mg/ml 2种浓度无显著差别(P>0.05);其余浓度之间有显 著差别(P<0.05)。对伴放线放线杆菌的抑菌性, 4000mg/ml与 250mg/ml、125mg/ml无显著差别 (P> 0.05);而 500mg/ml的抑菌环最大,与其他浓度差 别显著(P<0.05)。对乳酸杆菌的抑菌性,各浓度之间 差别有统计学意义(P<0.05),4000mg/ml的抑菌性最 强。95%乙醇对照组无抑菌环(表1)。 2.2 pH值对醇取丹参原液抑菌效果的影响 95%醇取丹参溶液 pH值由 3.5上升到 7.0后, 邓婧,等.醇取丹参液对几种口腔致病菌的体外抑菌作用 DENGJing,etal.Aninvitroexperimentontheantimicrobialeffectsofethanol extractfromsalviamiltiorrhizabungeonseveraloralpathogenicmicrobes 211· · 对牙龈卟啉菌的抑菌效果无显著影响 (P>0.05),而 对变形链球菌、伴放线放线杆菌、乳酸杆菌的抑菌效 果降低(P<0.05)(见表2)。 3 讨论 丹参有效成分的提取方法有多种,不同提取方 法提取的丹参有效成分不同。研究证实:95%乙醇提 取的丹参液中主要为脂溶性成分丹参酮,如丹参酮 ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮等 [1],水溶性成分极少。 中医认为:中药的功效与其中的多种成分的共 同作用密不可分,单取一种物质往往减弱或使其原 有的功效消失。近年来,有学者应用丹参的水取物或 醇取物治疗某些口腔黏膜病,取得了一定疗效。我们 课题组将丹参 (含量为 2000mg/ml)提取物制成药 膜,治疗口腔扁平苔藓,取得较好的临床效果。基于 此,本实验用相关浓度(含量)的丹参醇取液(水取液 的抑菌作用已另文报道)进行抑菌实验,观察不同浓 度对几种常见口腔致病菌的抑菌作用,并探求其最 低抑菌浓度。 本实验所选牙龈卟啉菌、伴放线放线杆菌为厌 氧菌,在牙周炎的发病中起重要作用,变形链球菌及 乳酸杆菌为微需氧菌,与龋病的发生、发展密切相 关。本实验显示:95%乙醇提取的丹参液对4种细菌 均有抑菌作用,对变形链球菌的抑菌性随浓度的增 高而增强,对牙龈卟啉菌、伴放线放线杆菌的抑菌作 用并未随浓度的升高而增强。对伴放线放线杆菌的抑 菌作用以500mg/ml浓度组的抑菌性最强 (P<0.05)。 对牙龈卟啉菌,较低药物浓度(500mg/ml、250mg/ml) 与高浓度(4000mg/ml)抑菌效果无显著差别(P>0.05), 其结果尚需进一步研究。由于本实验药物浓度为每 毫升提取液中所含丹参的生药量,而非丹参酮纯品 的含量,因此其抑菌浓度数值比纯品丹参酮的抑菌 浓度大[3]。 进一步研究发现,当醇取丹参液pH值由3.5上 升至 7.0时,对变形链球菌、伴放线放线杆菌、乳酸 杆菌的抑菌效果降低(P<0.05),但对牙龈卟啉菌无 影响。正常口腔唾液pH的平均值为6.8,而口腔有 病变或系统性疾病患者,口腔 pH值往往偏酸性[5,6]。 此时,口腔局部应用丹参的醇取物,可更好地发挥醇 取丹参在酸性环境下抑菌作用较强的特性。本实验 用95%乙醇进行多次预实验均未出现抑菌环,说明 95%乙醇无杀菌作用,与其浓度过高,使细菌表面蛋 白快速脱水凝固变性,形成保护层,乙醇不能渗入到 细菌内部而影响抑菌效果有关。 口腔内感染多为厌氧菌为主的混合性感染,目 前,临床上应用的抗厌氧菌药物多为硝唑类药物,其 副作用较大,不能长期使用。丹参作为一种对需氧菌 和厌氧菌均有抑制作用且经临床应用证实无副作用 的传统药材,若将其制成不同的剂型,用于牙周病、 龋病、黏膜病的预防和治疗,其前景广阔。 [参考文献] [1] 刘重芳,张钰泉,戴居云,等.丹参不同提取工艺比较[J].中成药, 1999,21(8):385-388. [2] 高玉桂,宋玉梅,杨友义,等.丹参酮的药理[J].药学学报,1979,14: 75. [3] 朱嘉蓉,罗厚蔚.丹参酮ⅡA的抑菌活性研究[J].中国药科大学学 报,2004,35(4):368-370. [4] 王定邦,刘爱生.丹参酮治疗痤疮的初步报告[J].中国医学科学院 学报,1980,2(3):187-188. [5] 田耘,杨明,袁凤仪,等.口腔并发症患者口腔pH值变化及护理 探讨[J].护士进修杂志,2002,17(3):171-172. [6] 谢德荣,陈岱佳,谢雪霞,等.化疗患者口腔炎的高危因素及应用 数学模型对口腔炎的预测[J].肿瘤防治杂志,2002,9(1):79-81. 表 2. 不同 pH值醇取丹参液(4000mg/ml)的抑菌效果(菌环直径 mm,x±s,n=6) Table2. TheinhibitionoftanshinoneunderpH3.5and7.0on differentbacteriae(mm,x±s,n=6) pH值 伴放线放线杆菌*变形链球菌 * 牙龈卟啉菌 乳酸杆菌* 3.5 14.95±0.23 18.58±0.80 22.00±0.89 15.23±0.52 7 12.92±0.92 16.58±0.49 22.92±0.80 13.50±0.45 注:t=5.26、5.21、1.87、0.62,*示2种pH值丹参液的菌环直径有显著 性差别(P<0.05) 口腔种植专业术语、词汇规范研讨会通知 随着口腔种植学临床的迅速发展,外来专业词汇大量涌入。目前中文相关术语、词汇的使用极不统一和规范,给学术交流, 杂志投稿、审稿均造成极大不便。为便于交流,规范学科词汇,促进学科进一步健康发展,中华口腔医学会种植专业委员会决定 于2006年6月4日在北京召开口腔种植专业术语、词汇规范研讨会。 敬请中华口腔医学会口腔种植专业委员会各位委员参加,并欢迎广大口腔种植专业医师报名参加。研讨会免费,安排食宿, 费用自理。 联系人:北京大学口腔医学院种植中心袁禧英、张宇,地址:北京市海淀区中关村南大街 22号,邮编:100081。电话:010- 62179977-2344/2355,传真:010-62173402。 上海口腔医学 2006年4月 第15卷 第2期 ShanghaiJournalofStomatologyVol.15No.2April,2006212· ·