中国耳鼻咽喉颅底外科杂志

基金项目 :国家 863 计划资助项目 (2001AA217181) 作者简介 :张俊毅 ,男 ,主治医师 ,博士。 通讯作者 :赵素萍 ,Email :zhaosp1950 @126. com. ·基础研究· yCDgly T K融合自杀基因前药系统对鼻咽癌 CN E22 细胞株放射增敏作用的研究 张俊毅1 ,赵素萍1 ,肖健云1 ,夏 　昆2 ,唐爱发2 ,陈主初3 (11 中南大学湘雅医院 耳鼻咽喉科 ,湖南 长沙 　410008 ; 21 中国医学遗传学 国家重点实验室 ,湖南 长沙 　 410078 ;31 中南大学 肿瘤研究所 ,湖南 长沙 　410078) 　　摘 　要 : 　目的 　研究 yCDglyT K融合自杀基因前药系统对人鼻咽癌细胞株 CN E22 细胞的放射增敏作用。 方法 　pcDNA3. 1 ( - ) CMVe·Egr21yCDglyT K质粒经电穿孔法转染 CN E22 细胞 ,给予不同剂量γ射线照射及不同 剂量前药 ,通过免疫组化、高效液相色谱、细胞存活率测定 (M TT 法)及克隆增殖实验 ,观察不同剂量辐射对自杀基 因阳性 CN E22 细胞中自杀基因表达及功能的影响 ,并观察前药干预及γ射线对 CN E22 细胞生长的影响。结果 　 电离辐射可诱导增强自杀基因阳性细胞株中 yCDglyT K基因的表达 ;电离辐射与前药的联合大大增强了对自杀基 因阳性 CN E22 细胞的杀伤作用 ,其杀伤作用大于单独自杀基因前药系统和单独放射。结论 　yCDglyT K融合自杀 基因前药系统对 CN E22 细胞有放射增敏作用 ,其与放射联合使用对 CN E22 细胞有明显协同杀伤效应。 关 　键 　词 :yCDglyT K;放射增敏 ;鼻咽肿瘤/ 放射疗法 中图分类号 :R739. 63 ;R730. 231. 3 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :1007 - 1520 (2005) 02 - 0072 - 06 Radiosensitization by yCDglyTK fusion suicide gene/ prodrug system in human nasopharyngeal carcinoma CNE22 cell l ine ZHAN G J u2yi , ZHAO Su2ping , XIAO Jian2yun , et al. ( Depart ment of Otolaryngology , Xiangya Hospital , Cent ral South U niversity , Changsha 410078 , China) 　　Abstract : 　Objective 　To investigate the radiosensitization by yCDglyT K fusion suicide gene/ prodrug system in human nasopharyngeal carcinoma cells ( CN E22) . Methods 　The plasmid vector of pcDNA3. 1 ( - ) CMVe ·Egr2 1yCDglyT K was introduced into CN E22 cells by electroporation. Then the cells were exposed to various doses of radiation and prodrug. Observation was made for the change of expression and function of fusion suicide gene in yCDglyT K2 expressing cells through immunohistochemistry , HPLC , M TT and clonogenic assay. The influence in growth of CN E22 cells was observed too. Results 　Ionization radiation can induce an increased expression of yCDglyTK gene in suicide2gene positive cells ; Combined with ionization radiation andprodrug showed greater toxicity to yCDglyTK2expressing CNE22 cells than disposed with ionization radiation or prodrug alone. Conclusion 　The yCDglyTKfusion suicide gene/ prodrug system can enhance the radiosensitivity of CNE22 cells , and show synergistic killing effect when combined with ionization radiation. Key words :yCDglyT K; Radiosensitization ; Nasopharyngeal neoplasms/ radiothor 　　鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤 ,病理类型 主要为低分化鳞癌 ,以放射治疗为主。但单纯放疗 存在肿瘤的辐射抗性和大剂量射线对正常组织严重 损伤两个难以解决的问题。长期以来 ,虽然放疗、化 疗技术有了很大发展 ,但均未能明显提高鼻咽癌的 临床疗效。近年来随着肿瘤生物治疗学的发展 ,将 基因治疗和放射治疗结合已成为恶性肿瘤治疗的新 策略。为探索提高鼻咽癌综合疗效的方法 ,我校唐 瑶云等[1 ] 已构建了 pcDNA3. 1 ( - ) CMVe ·Egr2 1yCDglyT K质粒表达载体 ,我们利用该质粒表达载 体进行鼻咽癌基因2放射治疗研究 ,以进一步明确 ·27· 　　　　　 第 11 卷第 2 期 2005 年 4 月 　　　　　　　　　　　　　　 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 Chinese Journal of Otorhinolaryngology - Skull Base Surgery 　　　　　　　　　　　　 Vol. 11 No. 2 　Apr. 2005 © 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. yCDglyT K融合自杀基因前药系统对鼻咽癌 CN E22 细胞生长的影响及其放射增敏特性。 1 　和方法 1 . 1 　细胞系和培养条件 人鼻咽癌 CN E22 细胞购自中山医科大学细胞 培养中心 ,培养在含 10 %小牛血清 RPM I21640 培 养基中 ,37 ℃、5 % CO2 开放式培养。小牛血清购自 杭州四季青生物工程材料有限公司。RPM I21640 购自美国 GiBCOBRL 公司。 1 . 2 　质粒、引物和裸鼠 pcDNA3. 1 ( - ) CMVe·Egr21yCDglyT K为本校 唐瑶云等构建 ,pcDNA3. 1 ( - )质粒由本校医学遗传 学国家重点实验室提供。 RT2PCR 扩增的引物 : 上游引物 : 5′2GGGA2 GA TTA GA GGGCAAA GTGGTC23′下游引物 : 5′2 ACGGCGTCGGTCACGGCA TAA23′ BALB/ C 裸鼠 (年龄 4～6 周 ,20 g ,雌性) ,购自 上海试验动物中心。中南大学实验动物学部提供饲 养条件。 1 . 3 　主要仪器设备及试剂 PE29600PCR 仪 (美国 perking2Elmer 公司) ,各 型高速低温离心机 (德国 BECKMAN 公司) ,酶标仪 由BioRad 公司提供 ,Co60治疗仪中南大学湘雅医院 放射科提供。G418 : Gibco 公司 ,52FC、52FU :Sigma 公 司 ,MTT : Sigma 公司 ,AMV 逆转录试剂盒 : Promega 公司 ,Trizol 试剂 : Gibco 公司 ,鼠 TK单抗 :QED 公司 , 免疫试剂盒 :北京中山 SP9002 Mouse SP Kit、ZL I2 9032 DAB Kit。其余试剂均为国产纯。 1 . 4 　细胞转染 将 pcDNA3. 1 ( - ) CMVe·Egr21yCDglyT K 和 pcDNA3. 1 ( - )质粒各 20μg ,经电穿孔法转染鼻咽 癌 CN E22 细胞。电转参数 :电压 2 KV、电容 25μF。经 600μg/ ml G418 筛选 10 d ,待抗性克隆 出现时 ,扩大培养 ,并用 300μg/ ml G418 维持培养 , 建立稳定表达 yCDglyT K的转染细胞系。 1 . 5 　RT2PCR 细胞中 yCDglyT K基因的转录 取电转后筛选出来的 yCDglyT K阳性克隆细胞 约1. 0 ×107 ,抽提总 RNA ,进行 RT2PCR 扩增 ,获得 预期片段 ,鉴定 yCDglyT K 基因在 mRNA 水平的 表达。 1 . 6 　免疫组化法测定γ射线照射前后转染细胞中 yCDglyT K基因在蛋白水平的表达 将 T25 培养瓶内对数生长期的转染 pcDNA3. 1 ( - ) CMVe·Egr21yCDglyT K和转染 pcDNA3. 1 ( - ) 质粒的 CN E22 细胞用0. 25 %胰酶消化 ,用 10 ml 新 鲜培养基稀释 ,吸管吹散后取0. 5 ml滴于酸洗灭菌 后的载玻片上 ,置于 15 cm 培养皿中于细胞培养箱 内培养 4 h ,待细胞贴壁后再注入 20 ml 新鲜培养基 继续培养 24 h ,分别给予 0 Gy、8 Gyγ射线照射 ,继 续培养 12 h 后 - 20 ℃甲醇固定细胞 , Triton X2100 破膜后进行免疫组化染色 ,比较γ射线照射前后 yCDglyT K融合蛋白质的表达水平 ,方法按试剂盒 说明进行。 1 . 7 　高效液相色谱法测定γ射线干预对前药 52FC 转换效率的影响 将 yCDglyT K 阳性克隆细胞和野生型 CN E22 细胞以 1 ×105/ 孔的数量各移植到 2 个 12 孔板中 , 待细胞汇合度达 90 %左右时 ,弃原培养基 ,每孔中 加入含 200μg/ ml 52FC 的培养液 2 ml ,30 min 后每 种细胞 2 个 12 孔板分别给予 0 Gy ,8 Gy 的放射剂 量后继续培养 5 d ,每块板各随机选择 3 个孔 ,分别 用高效液相色谱法 ( HPLC) 测定细胞上清中 52FU 的含量 ,取其平均值 ,计算前药转换效率。 1 . 8 　γ射线及前药干预对不同细胞的杀伤作用 将对数生长期的野生型 CN E22 细胞、pcDNA3. 1 ( - )空载体细胞、yCDglyT K基因阳性克隆细胞以 每孔 3 ×103 个细胞的数目植入同一块 96 孔板 ,共 备3 块 ,每种细胞各种植 16 个孔 ,另取一孔单独加 培养基 ,作为空白对照 ,24 h 后 ,每种细胞分别加前 药 52FC 0、50、200、400μg/ ml 4 个浓度梯度 ,每块板 每种细胞每个浓度梯度 4 个重复。加药后 30 min 3 块板分别予 0 Gy、8 Gy、16 Gyγ射线照射。5 d 后 ,所有 96 孔板各细胞培养孔及空白对照孔中各加 入20μl M TT (5 mg/ mL) ,继续培养 4 h 后吸弃上 清 ,加 200μl/ 孔 DMSO ,37 ℃振荡 10 min ,使色素沉 淀充分溶解后 ,将 96 孔板放入酶标仪 ,490 nm 波长 读数 ,以加培养基的空白孔调零 ,以未加前药及未行 放射治疗为对照组 ,结果以相对存活率表示。 相对存活率 = 实验组光密度 A/ 对照组光密度 A ×100 % 1 . 9 　克隆增殖实验法测定 yCDglyT K 融合自杀基 因前药系统对 CN E22 细胞的放射增敏效应 1. 9. 1 　接种细胞 　用0. 25 %胰蛋白酶消化对数生 长期培养细胞 ,用全培养基配成单个细胞悬液。采 用梯度稀释法 ,在 6cm 培养皿中分别接种合适数量 (各剂量组接种细胞数见表 1) 的对数生长期野生型 ·37· 　　　　　　　　　张俊毅 ,等 :yCDglyTK融合自杀基因前药系统对鼻咽癌 CNE22 细胞株放射增敏作用的研究　　　　　　　第 2 期 © 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. CN E22 细胞和 yCDglyT K 基因阳性克隆细胞 ,每种 细胞每放射剂量点接种 3 个皿。 1. 9. 2 　前药及放射处理 　待细胞贴壁 12 h 后 ,野 生型 CN E22 细胞不加前药 ,分别照射0 Gy、1 Gy、 2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy和10 Gy , yCDglyT K 基因阳 性克隆细胞中加入52FC 50μg/ ml ,30 min 后分别照 射1 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy和10 Gy ,照射后所 有细胞在培养箱中继续培养14 d后 ,用甲醇固定 ,加 姬姆萨应用液染色 30 min ,流水洗净 ,计数细胞数 ≥50 的克隆个数 ,以野生 CN E22 0 Gy 组为对照组。 克隆形成率 PE = (对照组克隆数/ 接种细胞 数) ×100 % , 存 活 分 数 = 克 隆 数/ ( 接 种 细 胞 数 ×PE) ,按多靶单击模型拟合绘制细胞存活曲线 , 并计算 D0 值 (一次照射能杀灭 63 %的细胞的剂 量) 、准阈剂量 Dq 值。放射增敏比 SER = 对照组 D0/ 自杀基因前药组 D0。 表 1 　克隆增殖实验细胞接种数 放射剂量 ( Gy) 0 1 2 4 6 8 10 野生 CNE22 细胞 100 150 150 400 1000 4000 20000 yCDTK阳性克隆细胞 (52FC 50μg/ ml) 500 600 1200 3000 12000 60000 1 . 10 　统计分析 统计分析采用 SPSS 10. 0软件进行单因素方差 分析 (one way ANOVA) ,多重比较采用 SN K过程。 P < 0. 05表示有统计学意义。 2 　结果 2 . 1 　RT2PCR 扩增产物的电泳图 (图 1) 由图 1 可见 yCDglyTK阳性克隆细胞中yCDglyTK 基因 cDNA 扩出了 707 bp 预期片段 ,而对照的 CNE22 细胞则无目标条带出现 ,证实了yCDglyTK基因在阳性 克隆细胞中 mRNA 水平的表达。 图 1 　RT2PCR 产物0. 8 %琼脂糖凝胶电泳分析 　　泳道 1 为 DNA 分子量 (2 kb) ;泳道 2、3 为 yCDglyTK阳性 克隆细胞中 yCDglyTK基因 cDNA 扩出的 707 bp 预期片段 ;泳道 4 为 CNE22 细胞 ;泳道 5 为 DNA 分子量标准 (2 kb) 。 2 . 2 　细胞免疫组化染色显示 转染 pcDNA3. 1 ( - ) 空载体的 CN E22 细胞 yCDglyT K 基因表达阴性 , 而转染 yCDglyT K 的 CN E22 细胞则表达阳性 ,并显示照射处理 8 Gy 后 基因蛋白表达强度明显提高 (图 2～5) 。 图 2 　转染 pcDNA3. 1 ( - )空载体的 CN E22 细胞免疫组化染 色阴性 (SP 法 ×400) 图 3 　转染 pcDNA3. 1 ( - ) 空载体的 CN E22 细胞经 8 Gy 照 射后免疫组化染色阴性 (SP 法 ×400) ·47· 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中国耳鼻咽喉颅底外科杂志　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 11 卷 © 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 图 4 　转染 yCDglyT K 的 CN E22 细胞免疫组化染色阳性 (SP 法 ×400) 图 5 　转染 yCDglyT K的 CN E22 细胞经 8 Gy 照射后免疫组 化染色强阳性 (SP 法 ×400) 2 . 3 　高效液相色谱实验结果显示 培养基中加入 200μg/ ml 52FC 5 d 后 ,野生型 CNE22 细胞照射处理前后细胞上清液中均未能测出 52FU ,即 52FC向 52FU 的转换效率为 0 ;而未经照射 处理的转染 yCDglyTK基因的 CNE22 细胞上清液中 52FU 的平均含量是 168μg/ ml ,52FC 向52FU转化的 效率是 84 %;8 Gy 照射处理的细胞上清中 52FU 平均 含量是 198μg/ ml (图 6) ,52FC 向52FU转化的效率是 99 % ,转化效率提高了 15 % ,经 Student2Neuman2Keuls ( SN K ) 检 验 表 明 , 两 者 差 别 有 统 计 学 意 义 ( P < 0. 05) 。说明 yCDglyTK/ 52FC自杀基因系统在 Egr21 启动子调控下前药转换效率明显提高 ,这也是 放射2基因治疗产生协同抑瘤作用的主要原因之一。 2 . 4 　前药干预及γ射线照射对三种细胞的杀伤 效应 2. 4. 1 　前体药物干预对野生型 CN E22 细胞、pcD2 NA3. 1 ( - ) 空载体细胞、yCDglyT K 基因阳性克隆 细胞的杀伤效应 (表 2) 。由表 2 可见 ,在未行放射 时 ,随着 52FC 浓度的增加 (50、200、400μg/ ml) ,三 种细胞的相对存活率逐渐下降 ,以 yCDglyT K 基因 阳性组尤为明显 ,经 Student2Neuman2Keuls ( SN K) 检验表明 ,在各前药浓度点 ,yCDglyT K基因阳性细 胞组细胞相对存活率与其他两组相比差异均有统计 学意义 ( P < 0. 01) ,而野生型 CN E22 组和空载体 组差异无统计学意义 ( P > 0. 05) ,说明 52FC 对三 种细胞均有杀伤作用 ,尤其对 yCDglyT K 基因阳性 细胞有强大的杀伤作用。 图 6 　经8 Gy照射后的转染 yCDgly T K基因的 CN E22 细胞 上清液中 52FC 和 52FU 的色谱图 表 2 　未经照射的不同前体药物浓度下不同细胞平均相对 存活率 52FC 浓度 (μg/ ml) 细胞种类 CNE22 pcDNA3.1( - ) yCDglyTK 0 100 % 100 % 100 % 50 94. 5 % 97. 9 % 37. 6 % 200 86. 3 % 86. 8 % 14. 0 % 400 73. 1 % 75. 8 % 8. 1 % 2. 4. 2 　不同浓度前药及不同剂量γ射线照射对三 种细胞的杀伤效应 (表 3) 。由表 3 可见 ,随前药浓 度增加及放射剂量加大 (8 Gy、16 Gy)三种细胞的相 对存活率明显下降 ,以 yCDglyT K组明显 ,说明放射 治疗能明显增加 52FC 对三种细胞的杀伤作用 ,尤 其对 yCDglyT K 阳性细胞的杀伤作用增加最为明 显。经 Student2Neuman2Keuls ( SN K) 检验表明 ,在 未加前药给予相同放射剂量时三组细胞相对存活率 无显著差别 ( P > 0. 05) ,说明未加前药时射线对三 者的杀伤作用基本相同。而在加有前药时 (50、200、 400 ug/ ml ) , 随放射剂量增大 ( 8 Gy、16 Gy ) , yCDglyT K组相对存活率下降程度较其他两组下降 更为显著 ( P < 0. 01) 。 ·57· 　　　　　　　　　张俊毅 ,等 :yCDglyTK融合自杀基因前药系统对鼻咽癌 CNE22 细胞株放射增敏作用的研究　　　　　　　第 2 期 © 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 表 3 　不同浓度前药及不同剂量照射下不同细胞相对存活率 52FC 浓度 (μg/ ml) 细胞种类 CNE22 8 Gy 16 G pcDNA3. 1 ( - ) 8 Gy 16 G yCDglyTK 8 Gy 16 G 0 67. 3 % 53. 5 % 64. 2 % 55. 4 % 62. 1 % 54. 9 % 50 64. 9 % 47. 5 % 68. 2 % 53. 3 % 21. 4 % 11. 2 % 200 53. 3 % 38. 8 % 57. 7 % 43. 8 % 10. 3 % 6. 7 % 400 46. 3 % 35. 7 % 48. 9 % 36. 4 % 5. 3 % 2. 2 % 2 . 5 　克隆增殖实验 将照射不同剂量 ,不同处理的细胞培养 14 d 后 计数克隆 ,以 CN E22 0 Gy 组存活分数作为 1 ,计算 各组细胞存活分数 ,绘制细胞存活曲线 (图 7) 。根 据多靶单击模型拟合数据 ,计算出 CN E22 组及 yCDglyT K自杀基因前药组 D0 值分别为 2. 11和 0. 39 ,Dq 值分别为1. 49和0. 14 ,放射增敏比 SER 为 5. 41 ,yCDglyT K 自杀基因前药处理明显增加了 CN E22 的放射敏感性。 图 7 　yCDglyT K融合自杀基因前药系统对 CN E22 细胞放射 敏感性的影响 3 　讨论 　　鼻咽癌是一种低分化高转移的恶性肿瘤 ,由于病 变部位隐匿 ,病人就诊时 60 %以上有颈淋巴结转移 或 20 %～30 %脑神经受累 ,目前鼻咽癌主要采取放射 治疗 ,但单纯放疗亦存在肿瘤的辐射抗性和大剂量射 线对正常组织严重损伤两个难以解决的问题 ,尽管目 前放疗技术有了很大进步 ,鼻咽癌的5 年生存率仍徘 徊在 50 %～60 %。因此 ,如何进一步提高鼻咽癌的放 疗疗效 ,和/ 或同时结合有效的化疗手段 ,并减少二者 的毒副作用就成为了一个急待解决的临床课题。 肿瘤自杀基因治疗是近年来随着分子生物学及 基因工程技术发展起来的一种治疗方法 ,其本质上 是一种瘤内化疗 ,通过将特定基因 (自杀基因) 转染 肿瘤细胞后 ,使无毒的前药在细胞内转化为细胞毒 性药物 ,从而直接或通过旁侧者效应杀伤肿瘤细胞。 在所研究的众多自杀基因中 ,CDglyTK融合自杀基因 前药系统是目前研究较为深入的一个系统 ,其作用是 将 52FC及 GCV 两种无毒前药转换为细胞毒性药物 从而达到杀伤肿瘤细胞的目的。CD 基因的产物胞嘧 啶脱氨酶将 52FC(52氟胞嘧啶)转化为有毒的 52Fu(52 氟尿嘧啶) ,随后形成 52FuTP 或 52FduTP (5′2磷酸25 氟22 脱氧尿嘧啶) ,前者可以整合到 RNA ,干扰 RNA 合成 ;后者抑制腺苷酸合成酶 ,干扰 DNA 的合成 ,导 细胞死亡。TK基因的产物能将 GCV (丙氧鸟苷) 单 磷酸化 ,继而在细胞激酶的作用下形成三磷酸 GCV , 后者能整合到细胞 DNA 中 ,抑制 DNA 合成酶 ,导致 细胞死亡。文献显示 ,该自杀基因前药系统不仅能直 接杀伤肿瘤细胞 ,还能够明显增强肿瘤细胞对电离辐 射的敏感性 ,即具有放射增敏性。 Niranjan 等[2 ]在进行自杀基因联合γ2射线治疗 恶性胶质瘤的研究中发现 ,γ射线与自杀基因在体 内具有协同作用。Rogulski 等[3 ] 研究发现 , CD 和 T K基因转导的肿瘤细胞在前药治疗后有辐射增敏 作用 ,并发现转导两种基因的 9L 细胞行 GCV/ 52FC 双前药治疗 ,其放射增敏指数 SER 达2. 44。Ueno 等[4 ]设计了一个综合治疗策略 ,用自杀基因结合放 射 ,以提高自杀基因表达的肿瘤特异性和放射敏感 性 ,取得了很好的效果。 在本研究中 ,我们应用免疫组化、高效液相色 谱、细胞存活率测定 ( M TT 法) 及克隆增殖实验对 yCDglyT K融合自杀基因前药系统的放射增敏作用 进行了研究 ,结果发现γ射线照射可有效诱导增强 yCDglyT K基因在 CN E22 细胞内的表达。当在相 应前药存在的条件下 ,可明显提高前药的转换效率 并增强肿瘤细胞对放射的敏感性 ,M TT 实验及克隆 形成实验显示 ,自杀基因前药系统对 CN E22 细胞具 有明显放射增敏作用 ,当 52FC 浓度为 50μg/ ml 时 , 放射增敏比 SER 达5. 41 ,明显高于 Rogulski 等[3 ]的 ·67· 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中国耳鼻咽喉颅底外科杂志　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 11 卷 © 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 2. 44 ,考虑是由于我们使用的酵母 CD (yCD) 作用强 于他们实验中所使用的细菌 CD (bCD) [5 ] ,并且两种 细胞的放射敏感性也不一致的原因。并且在此前药 浓度下 ,对野生型 CN E22 细胞的生长无明显影响。 该结果提示 ,利用放射诱导调控 yCDglyT K 融合自 杀基因的表达进行鼻咽癌的放射2基因治疗 ,是一种 安全、有效的途径。 目前自杀基因前药系统放射增敏性的具体机制 尚不清楚 ,可能有以下几点 :细胞内自杀基因表达产 物增加了放射线效应 ,导致肿瘤细胞的死亡 ;电离辐 射可以激活特异性的放射诱导启动子如 Egr21 ,从 而增强下游自杀基因的表达 ;放射线可以激活许多 种细胞激酶[6 ] ,有利于前药如 GCV 等的磷酸化 ;辐 射诱导的肿瘤细胞凋亡可以提高旁侧者效应并加强 机体的肿瘤免疫[7 ] ;辐射还可显著提高目的基因靶 向转移效率 ,延长转移基因的表达时间[8 ] 。 放射既作为调控自杀基因肿瘤靶向表达的手 段 ,同时其本身又直接发挥抗肿瘤作用 ,达到将放射 与肿瘤瘤内化疗有机结合起来的目的。如能进一步 提高肿瘤的瘤内转染效率 ,增加基因转染的靶向性 , 如采用病毒载体、纳米粒原位转染及肿瘤特异性启 动子如 EB 病毒编码的潜伏膜蛋白 1 的调控序列来 调节自杀基因的肿瘤特异性表达[9 ,10 ] ,进行鼻咽癌 放射2基因治疗 ,可望有更好的临床应用前景 ,这也 是我们下一步将要进行的工作。 参考文献 : [ 1 ] 　唐瑶云 ,肖健云 ,赵素萍 ,等 1 靶向性质粒表达载体 pcDNA3. 1 ( - ) CMV·Egr21CDglyTK的构建及转染研究[J ]1 中国耳鼻咽 喉颅底外科杂志 ,2003 , 2 (1) : 34 - 37. [ 2 ] 　Niranjan A , Moriuchi S , Lunsford LD , et al. 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