作者单位_1广东省江门市皮肤病性病防治研究所

·论著· 作者单位 :1 广东省江门市皮肤病性病防治研究所 ,529000 2 第一军医大学南方医院 Vidas CHL 法在女性宫颈和尿液标本中 检测沙眼衣原体的应用 程文海1 　谢礼豪1 　谭仲楷2 　黄澍杰1 　吴志周1 [摘要 ] 　目的 : 　为研究能否用 Vidas衣原体试验 (CHL)检测女性尿液中沙眼衣原体。 : 　采用 Vidas CHL 法检测 126 例有症状和 220 例无症状女性患者宫颈拭子及尿沉渣中沙眼衣原体。结果 : 　与宫颈拭 子沙眼衣原体细胞培养相比 ,Vidas CHL 法检测有症状女性患者宫颈拭子、尿沉渣中沙眼衣原体敏感性分 别为95. 8 %( P > 0. 05) 、87. 5 %( P > 0. 05) ,特异性分别为 98. 0 %( P > 0. 05) 、99. 0 %( P > 0. 05) ;检测无症状 女性患者宫颈拭子、尿沉渣中沙眼衣原体敏感性分别为 92. 9 %( P > 0. 05) 、50. 0 %( P < 0. 05) ,特异性分别 为97. 9 %( P > 0. 05) 、99. 0 %( P > 0. 05) 。结论 : 　Vidas CHL 法具有高度敏感性和特异性 ,可用来检测有症 状女性患者尿沉渣中沙眼衣原体 ,但不能用来检测无症状女性患者尿沉渣中沙眼衣原体。 [关键词 ] 　沙眼衣原体 ; 　酶联免疫荧光反应 ; 　组织培养 Detection of Chlamydia trachomatis in female urine by Vidas CHL assay Cheng Wenhai , Xie Lihao , Tan Zhongkai , et al . Jiangmen Institute of Dermatology and Venerology . Jiangmen , 529000 [ Abstract ] 　Objective :To determine the usage of CHL assay in detection of Chlamydia trachomatis in female urine. Methods : The cervical swabs and first voided urine sediments (VUS) from 126 symptomatic and 220 asymptomatic fe2 males were measured. Results : Compared with Chlamydia trachomatis cell culture of cervical swabs , the sensitivity and specificity of CHL in cervical swabs and VUS from symptomatic females were 95. 8 %( P > 0. 05) and 98. 0 %( P > 0. 05) , 87. 5 %( P > 0. 05) and 99. 0 %( P > 0. 05) , respectively. The sensitivity and specificity of CHL from asymptomatic females were 92. 9 %( P > 0. 05) and 50. 0 %( P < 0. 05) , 97. 9 %( P > 0. 05) and 99. 0 % ( P > 0. 05) respectively. Conclusion : VUS from symptomatic females can be used for C trachomatis detection by CHL , but the test using VUS from asymptomatic females is not sensitive and specific enough for C trachomatis detection. [ Key words] 　 Chlamydia trachomatis ; enzyme immunofluorescenfassay ; cell culture 　　沙眼衣原体 (chlamydia trachomatis ,Ct) 是引起性传 播疾病的常见病原体之一。女性泌尿生殖道沙眼衣原 体感染的好发部位是宫颈或 (和)尿道 ,临床上 Ct 感染 实验室诊断一般取宫颈拭子标本 ,采取宫颈拭子标本 时 ,需要用窥器暴露宫颈 ,操作比较麻烦。近十年来 , 国内外学者用不同方法检测女性尿液标本中的 Ct ,取 得了较好效果[1 - 3] ,近年来 ,欧美广泛应用 Vidas CHL 法检测尿沉渣中 Ct 抗原[4 ] ,但在我国尚未见报道。我 们用Vidas CHL 法检测了 346 例女性尿沉渣中 Ct 抗原 , 现将结果报道如下。 1 　临床资料与方法 1. 1 　病例　346 例女性患者皆来自本所性病门诊均符 合下列条件 : (1)有非婚性接触史或性伴有性病史 ; (2) 就诊前 2 周内未用过抗生素 ; (3)非妊娠期妇女。其中 有尿道刺激症状、尿道口红肿、尿道口分泌物、白带增 多等 126 例 ,无上述症状者 220 例。 1. 2 　取材方法 　取宫颈拭子 3 支 ,分别插入宫颈 1. 0 cm、1. 5 cm、2. 0 cm深处 ,停留 1 分钟 ,轻轻旋转后取出。 取晨尿或至少间隔 2 h 以上未排尿的首段尿 20 ml。所 有标本在 4 ℃保存且不超过 7 天。 1. 3 　Ct McCoy 细胞培养 　按常规方法进行[6 ] 。McCoy 细胞由中山医科大学微生物学教研室提供。 1. 4 　Vidas CHL 法检测 Ct 抗原　①宫颈拭子处理 :将 2 ml 标本处理液加入装有宫颈拭子 Vidas CHL 标本管 中 ,在室温孵育 15 分钟后 ,旋涡振荡标本管 30 秒 ,弃去 拭子 ,加盖置 100 ℃水浴 15 分钟 ; ②首段尿标本处理 : 尿液混匀后取 12 ml 置于一带盖圆底无菌离心管中 , 3000 gΠ分离心 15 分钟 ,去掉上清液 ,用 2 ml 标本处理液 悬浮尿沉渣 ,加盖 ,置 100 ℃水浴 15 分钟。③测试 :吸 取经处理的标本或质控物 350μl 至 Vidas CHL 试条的 标本杯中 ,该试条包含全部反应所需物质。将 Vidas CHL 试条及与之配置的固相吸管放到 Vidas 仪器上 (试 条及仪器均由法国 bio Merieux Litd 提供) ,该仪器将自 89 China J Lepr Skin Dis. Jun 2002 ,Vol. 18 ,No. 2 © 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 动控制温度及各测试步骤 ;包括吸样至各个反应孔进 行孵育和洗涤等。该试验使用一种鼠抗衣原体脂多糖 抗原的单克隆抗体 ,一种标记有硷性磷酸酶的免疫球 蛋白 G和荧光底物。该仪器的光学扫描仪能自动测定 荧光密度 ,约 1. 5 h 后完成该操作 ,测出每份标本的相 对荧光值 (RFV) 和试验值 ( TV) ,并自动打印出结果。 RFV ≥80 为阳性 ,80 > RFV ≥60 为可疑 , < 60 为阴性。 仪器每隔 14 天用试剂盒内置标准物定标一次。每次 测试设阴阳性对照各一个。 1. 5 　Vidas CHL 阻抑试验 (CHB) 　所有阳性和可疑的 CHL 标本 ,均做阻抑试验。每份标本需做 2 条试 剂条 ,分别加入 350μl 经处理的标本 ,然后在第 1 条试 条中加入抗衣原体血清 ,第 2 条试条中加入对照血清 , 置 Vidas 上按 CHB 程序运行。如果标本的 RFV 值≥30 且阻抑 RFV 值比没阻抑 < 50 % ,即为阳性。 2 　结果 2. 1 　宫颈拭子细胞培养法和 Vidas CHL 法检测有症状 女性患者 ,结果分别为 24 例阳性 ,26 例阳性。Vidas CHL 法检测有症状女性患者尿沉渣 Ct 结果为 22 例阳 性。细胞培养法和 Vidas CHL 法检测无症状女性患者 宫颈拭子 Ct 结果分别为 28 例阳性 ,30 例阳性 ,Vidas CHL 法检测无症状女性患者尿沉渣 Ct 结果为 16 例阳 性。以宫颈拭子 Ct 培养阳性为金标准 ,Vidas CHL 法检 测有症状女性患者宫颈拭子、尿沉渣和无症状女性患 者宫颈拭子、尿沉渣中的 Ct 敏感性特异性见 1。 表 1 　宫颈拭子和尿沉渣标本 Vidas CHL 法检测有 症状和无症状者 Ct 的敏感性和特异性 3 标本 敏感性 ( %) 特异性 P 值 有症状者宫颈拭子 95. 8(23Π24) 98. 0(100 - 102) > 0. 05 尿沉渣　　　　　 87. 5(21Π24) 99. 0(101Π102) > 0. 05 无症状者宫颈拭子 92. 9(26Π28) 97. 9(188Π192) > 0. 05 尿沉渣　　　　　 50. 0(14Π28) 99. 0(190Π192) < 0. 05 　　3 宫颈拭子培养法为金标准 2. 2 　Vidas CHL 法检测有症状女性患者宫颈拭子尿沉 渣 Ct 结果比较见表 2。 表 2 　Vidas CHL 法检测有症状女性患者 宫颈拭子Π尿沉渣 Ct 结果比较 　　　　　宫颈拭子　　　　　 + - 合计 尿沉渣 + 21 1 22 - 5 99 104 合计 26 100 126 　　经配对计数资料χ2 检验 ,χ2 = 1. 5 , P > 0. 05 2. 3 　Vidas CHL 法检测无症状女性患者宫颈拭子Π尿沉 渣 Ct 结果比较见表 3。 3 　讨论 Vidas CHL 法是一种检测 Ct 抗原的自动酶联免疫 荧光试验 ,使用一种抗 Ct 脂多糖 (LPS) 的鼠单克隆抗 体。它以酶联免疫荧光技术 ( ELFA) 为检测原理 ,把 EIA 与荧光检测技术结合起来 ,并采用碱性磷酸酶和 42 MUP 作讯号放大物质 ,灵敏度达到放免水平 ,因而具有 高度敏感性 ;Vidas CHL 法的每人份试剂均独立包装在 试剂条内 ,反应在固相容器 (SPR) 中自动进行 ,排除了 污染可能。另外 ,阳性或可疑阳性的 CHL 标本可用阻 抑试验 (Vidas CHB) 证实 ,因此同时具有高度特异性。 欧美等国家已开始广泛应用 ,并取得了满意效果 ,特别 是用来检测大量标本时 ,非常方便[4 ] 。 表 3 　Vidas CHL 法检测无症状女性患者 宫颈拭子Π尿沉渣 Ct 结果比较 　　　　　宫颈拭子　　　　　 + - 合计 尿沉渣 + 13 3 16 - 17 187 204 合计 30 190 220 　　经配对计数资料χ2 检验 ,χ2 = 8. 45 , P < 0. 05 　　本组 126 例有症状女性患者中 ,以宫颈拭子 Ct 细 胞培养为金标准 ,Vidas CHL 法检测宫颈拭子、尿沉渣 中 Ct 敏感性分别为 95. 8 %、87. 5 % , P > 0. 05 ,差异无显 著性 ,特异性分别为 98. 0 %、99. 0 % , P > 0. 05 ,差异无 显著性。本组 220 例无症状女性患者中 ,以宫颈拭子 Ct 细胞培养为金标准 ,Vidas CHL 法检测宫颈拭子中 Ct 敏感性为 92. 9 % , P > 0. 05 ,差异无显著性 ,检测尿沉渣 中 Ct 敏感性为 50 % , P < 0. 05 ,差异有显著性。本次研 究结果表明 Vidas CHL 法检测不论是有症状还是无症 状女性患者宫颈拭子中 Ct 时都有高度敏感性和特异 性。Vidas CHL 法检测有症状女性患者尿沉渣中 Ct 时 亦具有高度敏感性和特异性可以用尿沉渣代替宫颈拭 子作检测 ,而 Vidas CHL 法检测无症状女性患者尿沉渣 中 Ct 时敏感性较低 ,即不能用尿沉渣代替宫颈拭子作 标本进行 Ct 检测。出现这种现象原因可能是由于宫颈 拭子并不总是含有感染尿道的微生物 ,而女性尿液可 能由于宫颈—阴道分泌物污染的缘故 ,可同时含有尿 道和宫颈中的病原体 ,有症状女性患者宫颈—阴道分 必物中含有沙眼衣原体量多、尿液中沙眼衣原体含量 也较高 ,加上 Vidas CHL 法又具有高度敏感性 ,故可以 用尿液作标本进行 Ct 检测。无症状女性患者宫颈— 阴道分泌物中含有衣原体量本来就不多 ,尿液中沙眼 衣原体含量就更少 ,即使 Vidas CHL 法具有高度敏感 性 ,也难以检测 ,故不可以用尿液作标本进行 Ct 检测。 参 考 文 献 1 Kimberly A , Crotchel T , Laura E , et al. Detection of Neisseria gon2 orrhoeae and Chlamydia trachomatis in genitourinary speciments from men and women by a coamplification PCR assay. J Clin Microbiol , 99中国麻风皮肤病杂志　2002 年 6 月第 18 卷第 2 期 © 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved. 1997 ,35 :1536 2 Pasternack R , Vuorinen P , Pitkdiarvi T , et al. comparison of manual amplicor PCR , cobas amplicor PCR , and LCX assays for detection of chlamydia trachomatis Infection in women by using urine specimens. J Clin Microbiol ,1997 ,35 :402 3程文海 ,谢礼豪 ,黄澍杰 ,等. 检测女性尿沉渣中沙眼衣原体. 中华皮肤科杂志 ,2000 ,33 :186 4 Schachter J , Jomes RB , Butler RC , et al. Evaluation of the Vidas Chlamydia test to detect and verify chlamydia trachomatis in urogenital specimens. J Clin Microbiol ,1997 ,35 :2102 5 Tong CY, Valenine C , Arya OP. Comparison of an automated enzyme immunoassay with a direct fluovescent antibody test and polymerase chain reaction for the diagnostic specimens from male patients. Eur J Clin Microbio Infect Dis ,1996 ,15 :336 6 叶顺章 ,张木友.性传播疾病实验室诊断手册. 广州 :广东科技 出版社 ,1991. 46 (收稿 :2001 - 03 - 19 　修回 :2001 - 09 - 05) ·经验交流· 酮康唑洗剂两种方法治疗花斑癣临床疗效观察 成瑞兰1 　欧阳世华2 　　我们用两种不同的使用方法对 2 %酮 康唑洗剂 (商品名采乐 ,西安杨森制药有限 公司生产) 治疗花斑癣的临床疗效进行了 比较 ,现将结果报告如下。 临床资料　所有病例均为皮肤科门诊 患者 ,且能遵医嘱按时复诊。男 53 例 ,女 27 例 ,年龄 11～47 岁 ,平均 25. 6 岁 ,病程 2 周～3 年 ,平均 3. 6 月。该病的诊断依据 为 : (1) 皮损发生在胸、背、臂、颈部等皮脂 分布丰富部位 ,皮损特点为白色或淡褐色 花斑状斑疹 ,其上有极薄的糠秕状鳞屑 ; (2)皮损处真菌直接镜检可见短粗、两头钝 圆、微弯的菌丝。所有患者未经治疗或观 作者单位 : 1 湖南省娄底市职业病防治医院 , 417000 2 湖南省娄底市皮肤病性病防治所 察前 2 周内未全身及局部应用抗真菌药和 糖皮质激素。合并有糠秕马拉色菌毛囊 炎、体股癣或其他皮肤病者予以剔除。入 选患者依就诊顺序随机分为两组。 治疗方法　两组患者均使用 2 %酮康 唑洗剂。治疗组在临睡前将药液涂在患 处 ,略超过皮损 ,每天 1 次 ;对照组洗澡时 取 5～10 ml 药液涂在皮肤上 ,按摩 5～10 min ,然后用清水冲净 ,每天 1 次 ,用药 2 周 后停药 1 周观察疗效。 疗效判定标准　治愈为临床症状及皮 损完全消退 ,或仅留少量色素减退斑 ,真菌 直接镜检阴性 ;未愈为连续用药后皮疹无 明显改变或部分消退和Π或真菌直接镜检 阳性。 结果　两组治疗结果见表 1。 从表 1 可以看出 ,治疗组疗效明显高 于对照组 (χ2 = 4. 27 , P < 0. 05) ,两组患者 在治疗过程中未见明显不良反应。 表 1 　2 %酮康唑洗剂不同使用 方法治疗花斑癣疗效比较 组别 例数 痊愈 未愈 治愈率 ( %) 治疗组 40 34 6 85. 00 对照组 40 26 14 65. 00 　　讨论　酮康唑为广谱抗真菌药 ,是最 有效的抗糠秕马拉色菌制剂之一 ,我们应 用的结果支持直接用该药搽患处治疗花斑 癣疗效更理想 ,可能与直接在皮损处用药 时药物浓度高 ,保留时间长 ,能有效地杀灭 糠秕马拉色菌有关。同时寒冬季节用药方 便 ,节省用药量 ,减轻患者的经济负担。 (收稿 :2001 - 01 - 08) 男性尿道内硬下疳 1 例 王　钺　崔成军　周　　 3 　蒋　玲 3 　　患者 ,男 ,24 岁 ,主诉阴茎远端肿胀 15 天。患者于 15 天前发现龟头包皮不明原 因出现水肿 ,无明显自觉症状 ,数天后两侧 腹股沟各出现一蚕豆大小肿块 ,无疼痛感 , 就诊前 3 天见尿道口有少许分泌物并发现 尿道内侧有一小溃疡 ,曾自行外用红霉素 软膏 ,症状未见减轻 ,故来本科就诊。患者 既往无性传播疾病史 ,发病前无用药史 ,否 认有冶游史 ,但其女友为发廊女 ,近 2 月 作者单位 : 江苏省锡山市人民医院皮肤科 , 214011 　3 进修医师 内有多次性接触。体检 :龟头、包皮远端充血性水肿 ,以尿道口最为明显 ,分开尿道口见尿道左侧内壁有一浅在性溃疡 ,有少许渗出物 ,疮面平坦 ,表面见有淡黄色坏死物粘着 ,用盐水棉签不易擦去 ,无明显触痛 ,龟头部呈软骨样硬度 ,两侧腹股沟各有一蚕豆大小淋巴结 ,表面光滑 ,可活动 ,质硬 ,无压痛。实验室检查 : 尿常规 : 白细胞( + ) ,其余指标正常 ;分泌物涂片 :未见 G-双球菌 ;暗视野梅毒螺旋体检查 ( + ) ;支原体、衣原体检查 ( - ) ;梅毒快速血浆反应试验 (RPR) 1 :8( + ) ;血清梅毒螺旋体血凝试 验 (TPHA) ( - ) 。诊断 : I 期梅毒 (尿道内硬下疳) ,给予苄星青霉素 G 240 万 U ,两侧臀部肌肉注射。1 周后复诊 :龟头部水肿及硬结明显消退 ,尿道内溃疡愈合 ,两侧腹股沟淋巴结肿大不明显。苄星青霉素续用 2周。复诊时其女友同时作梅毒血清检查 :RPR 1 :16( + ) ,TPHA( + ) ,询问病史承认有性乱史 ,诊断为早期潜伏梅毒 ,治疗同其男友。治疗 1 月后复诊 ,男性患者 RPR 1 :1( + ) ,TPHA ( + ) 。嘱定期复查 ,目前仍在随访之中。 (收稿 :2001 - 01 - 02) 001 China J Lepr Skin Dis. Jun 2002 ,Vol. 18 ,No. 2 © 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.