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低频超声开放大鼠血脑屏障的研究

2011-05-30 3页 pdf 161KB 31阅读

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低频超声开放大鼠血脑屏障的研究 解剖科学进展 Progress of Anatomical Sciences 2007.1 3(4):343~345 低频超声开放大鼠血脑屏障的研究 张 震 ,夏春义 ,薛一雪3,刘云会 (中国医科大学1.一院急诊科;2.二院神经外科;3.神经生物学教研室,辽宁 沈阳 110004) 【摘要】目的 探讨1MHz低频超声在不同功率、不同照射时间对大鼠脑细胞及血脑屏障的影响,寻求开放血 脑屏障的最佳条件。方法 l19只Wistar大鼠颅顶右前方开窗后超声照射,采用伊文思蓝 (EB)法检测血脑屏障通 透性的变化 ...
低频超声开放大鼠血脑屏障的研究
解剖科学进展 Progress of Anatomical Sciences 2007.1 3(4):343~345 低频超声开放大鼠血脑屏障的研究 张 震 ,夏春义 ,薛一雪3,刘云会 (中国医科大学1.一院急诊科;2.二院神经外科;3.神经生物学教研室,辽宁 沈阳 110004) 【摘要】目的 探讨1MHz低频超声在不同功率、不同照射时间对大鼠脑细胞及血脑屏障的影响,寻求开放血 脑屏障的最佳条件。方法 l19只Wistar大鼠颅顶右前方开窗后超声照射,采用伊文思蓝 (EB)法血脑屏障通 透性的变化 ;应用透射电镜观察内皮细胞紧密连接的变化。结果 1MHz、12 mw照射20s或30s,照射后3 hrs,血 脑屏障通透性均显著高于对照组(P<0.05),电镜下微血管内皮紧密连接呈开放状态,照射时间30s时,可见部分神经 元核膜变形;照射后12 hrs,与对照组相比血脑屏障通透性无明显差异(P<0.05),且部分神经元核膜的变形无明显恢 复。1MHz、8 mW照射的各组与对照组比较血脑屏障通透性无明显差异(P<0.05)。结论 1MHz、12 mw、照射时间 20s可能是可逆性地开放血脑屏障的适宜条件。 【关键词】低频超声;血脑屏障;通透性 【中图分类号】Q189·R338 【文献标识码】A 【文章编号】1006—2947(2007)04—0343—03 The Effect of Low Frequency Ultrasound on Opening Blood——brain Barrier in Rat ZhANG Zhen ,XIA Chun—yi ,XUE Yi—xue ,LIU Yun—hui (1.Department of Emergency,the First Affiliated Hospital;2.Department of Neurosurgery,the Second Affiliated Hospital; 3.Department of Neurobiology,Basic Medical College,China Medical University,Liaoning Shenyang 1 10001 China) 【Abstract】0bjective To investigate the effect of low frequency ultrasound at l MHz with different power and illumination time on the blood—brain barrier fBBB)and the eortic neurons of rats to seek the optimum sonication condition to open BBB.Method The ultrasonic illumination was performed through the window on the anterior right part of the cranium in l19 Wistar rats,the BBB perm eability was measured by Evans blue assay and the state of the interendothelilal tight iunction of capillaries was observed with transmission electron microscope fTEM1.Results Compared with the normal control,BBB permeability increased and interendothelilal tight junction of capillaries opened 3 hours after illumination with the power of 1 2mW for 20s or 30s.but the abnorm alities of nucleo—membrane of neurons was seen while the illumination time was 30s. However,there was no obvious difference for BBB perm eability and no recovery for the abnorm al nueleo-membrane 1 2hrs after illumination,compared with the control(P
。本研究采用频率为1MHz的低频超声探头,对适宜 功率和作用时间等实验条件及机制进行初探。 维普资讯 http://www.cqvip.com · 344· 解 剖科学 进展 2007年第1 3卷第4期 1 材料与方法 1.1实验动物及分组 选用健康成熟Wistar大鼠1 19只,体重200±20g。 低频超声照射组试验用功率从低到高选择:为8mw和 12mW。照射时间分别设为lOs,15s,2Os及30s。观察 时间分别为超声照射后3 hrs和12 hrs。取颅顶右前方 开窗无超声照射组作为对照组。每组7只大鼠。 照射组动物经10%水合氯醛0.3ml/100g大鼠腹腔 注射麻醉,将大鼠头部固定于立体定位仪上,以大 鼠头部冠状缝上中线右侧旁开3mm为中心右侧移去 一 块颅骨 (3×3mm),作为超声照射窗。德力凯公 司EMS一9型脑超仪器。选用的频率为1 MHz探头,探 头直径2cm,照射深度设定为5mm。 1.2超微结构观察 大鼠麻醉后,低频超声处理,每只用lOOml生理 盐水及4%多聚甲醛200ml灌流,取1×1×lmm 脑组 织用2.5%的戊二醛浸泡固定,2%四氧化锇后固定, 梯度酒精脱水,环氧树I~618包埋,超薄切片经醋酸 铀、枸椽酸铅双重染色后,在80KV条件下用JEM一 1200EX型透射电镜观察。 1.3血脑屏障通透性的测定 通透性的测定采用EB的渗出量定量估计。EB溶 液的浓度为0.2%。大鼠麻醉后,低频超声处理, 以 0.2ml/100g将EB经右股静脉注入大鼠体内,2小时后 生理盐水灌流、取脑后称重。将局部蓝染的脑组织 湿重按lOml/g浸入甲酰胺溶液,在60℃恒温水浴箱 中抽提24 his,甲酰胺溶液呈现深浅不同的蓝色,脑 组织呈现无色透明状,然后在UV300紫外 一可见光 分光光度计下620nm波长处定量EB在 甲酰胺中的 OD值,定量样本脑组织中EB的含量。纯甲酰胺 溶液设为空白对照。 Eb曲线:校零标准品为50%TCA按1:3加入 无水乙醇。使用校零标准品配制不同浓度 (50—1 000 ng·ml一1)的EB测定其0D值 ,以绘制出标准曲线 (v=1 1x-0.06)。依据所测得浓度计算血脑屏障对 EB的通透率,以每克湿重脑组织内所含EB的量 ( g,g)示。 统计分析:采用SPSS13.0统计软件进行分析, EB值采用均值±标准差来表示,各组数据之间比较 用t检验。P
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