1．3双虎清肝颗粒在体外对流感病毒和单纯疱疹病毒的作用

1 1．3双虎清肝颗粒在体外对流感病毒和单纯疱疹病毒的作用 中国医学科学院生物技术研究所 陈鸿珊 郭巨涛 滕立 摘 要：本文用空斑形成抑制试验的方法观察双虎清肝颗粒对狗肾细胞（MDCK）和非洲绿猴肾细胞（Vero）中传代的流感病毒和单纯疱疹病毒的作用。结果表明，1.25mg/ml浓度的双虎清肝颗粒完全抑制流感病毒甲型和乙型、5mg/ml浓度的双虎清肝颗粒完全抑制单纯疱疹病毒I型，能抑制II型92.0%，其作用优于乙肝清热解毒冲剂。 关键词：双虎清肝颗粒 流感病毒 单纯疱疹病毒 材料和方法： 1．​ 药物：双虎清肝颗粒和乙肝清热解毒冲剂同实验1.2 2．​ 病毒： 1）​ 流感病毒：甲型H3N2京防75—39株，购自中国预防医科院病毒所；乙型天津8413株，自天津防疫站引进，-70℃保存，用时感染鸡胚传代，收集尿囊液，-70℃保存备用。 2）单纯疱疹病毒：I型Sm44株，购自中国药品生物制品检定所；II型333株，为中国预防医科院病毒所惠赠，Vero细胞传代，-70℃保存备用。 3．​ 细胞： 1）​ 狗肾传代细胞（MDCK）系瑞典Astra药厂惠赠，本室传代，液氮保存，为培养流感病毒用。 2）​ 非洲绿猴肾细胞（Vero）为中国预防科学院病毒所惠赠，本室传代液氮保存，为培养单纯疱疹病毒用。 4．​ 空斑形成试验： MDCK细胞和Vero细胞在24孔培养板中长成单层后，MDCK细胞分别加入流感病毒甲型京防75-39和乙型津防8413，Vero细胞分别加入HSV-1（Sm44）和HSV-2（333），置37℃吸附一小时，洗去病毒，加入含不同浓度的双虎清肝颗粒和乙肝清热解毒冲剂的琼脂糖上层或甲基纤维素上层，置37℃、5%CO2培养，检镜，病毒对照组出现空斑时倾去培养上层，加1%结晶紫染色计空斑，计算空斑抑制率并观察毒性。 结论 结果（见表5、表6）。 表5 双虎清肝颗粒对流感病毒的作用 组别 浓度（mg/ml） 细胞 毒性 甲型 乙型 空斑数 抑制率（%） 空斑数 抑制率（%） 双虎清 肝颗粒 10 + + + 5 + + + 2.5 + 0 100 0 100 1.25 - 0 100 0 100 乙肝清热 解毒冲剂 10 + + + 5 + + + 2.5 + 0 100 0 100 1.25 - 0 100 0 100 阳性对照组 0 12 13.5 注：细胞病毒指药物对MDCK传代细胞的毒性作用，“+ + +”“+ +”表示毒性强度。两种药对MDCK细胞最大无毒浓度为1.25mg/ml。 表6 双虎清肝颗粒对单纯疱疹病毒的作用 组别 浓度 （mg/ml） 细胞 毒性 甲型 乙型 空斑数 抑制率（%） 空斑数 抑制率（%） 双虎清 肝颗粒 10 + + + 5 - 0 100 11 92.0 2.5 - 31.5 31.11 47.75 30.55 乙肝清热 解毒冲剂 13 + + + 10 + 0 100 0 100 5 - 22.75 50.27 35.25 48.73 2.5 - 37.75 17.49 59.755 13.09 阳性对照组 0 45.75 68.75 注：细胞毒性指药物对Vero传代细胞的毒性作用，“+ + +”“+ +”表示毒性强度。两种药对Vero细胞最大无毒浓度为5mg/ml。 小 结 本文用空斑形成抑制试验的方法，观察双虎清肝颗粒对流感病毒甲、乙型和单纯疱疹病毒I、II型的作用。试验结果表明，双虎清肝颗粒和阳性对照药乙肝清热解毒冲剂对MDCK和Vero细胞的最大无毒浓度分别为1.25和5mg/ml（生药）。在最大无毒浓度时，双虎清肝颗粒完全抑制流感病毒甲、乙型和单纯疱疹病毒I型、抑制II型92%，优于乙肝清热解毒冲剂。 参考文献 1．病毒唑对流感病毒的作用，病毒唑鉴定材料（内部资料） 2．无环鸟苷对单纯疱疹的作用，1983年无环鸟苷鉴定资料（内部资料）