1.1双虎清肝颗粒在体内对鸭乙肝病毒感染的治疗作用

1 1.1双虎清肝颗粒在体内对鸭乙肝病毒感染的治疗作用 摘 要：本试验用一日龄北京鸭，静脉注射乙型肝炎病毒，7天后开始给药，共给10天，观察双虎清颗粒对DHBV感染鸭血清DHBV-DNA的作用，三次试验结果表明：双虎清肝颗粒5、7.5g/kg剂量能抑制鸭血清中DHBV-DNA的复制，与给药前比较差异显著(P<0.05)，抑制率可达59-94%，其抑制作用优于乙肝清热解毒冲剂。 关键词：双虎清肝颗粒 鸭乙型肝炎病毒 材料和方法： 1、​ 药物：双虎清肝颗粒，提取浸膏，每克含生药4克，中国中医研究院产品，批号880701。乙肝清热解毒冲剂，本溪第三制药厂产品，每克冲剂含生药0.8克。 2、 病毒： 鸭乙型肝炎病毒(DHBV)，鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)，强阳性血清，采自上海麻鸭，-70℃保存。 1、​ 动物： 一日龄北京鸭，购自北京禽蛋养鸭场。 2、​ 试剂 a-32P-dCTP购自北京福瑞生物技术工程公司，进口翻译药盒，购自普洛麦格公司(PromegaCo.).SephadesG-50，Ficoll PVP购自瑞典Pharmacia公司，SDS西德Merck公司产品，鱼精DNA，牛血清白蛋白为中国科学院生物物理研究所产品，硝酸纤维素膜0.45um，Amersham公司产品。 5、分组与给药剂量： 试剂分三个组：1)阴性对照阴，即病毒感染对照组，给生理盐水：2)阳性对照组，给乙肝清热解毒冲剂，剂量为5和7.5g/kg(生药)。 6、​ 试验方法：试验共做了三批，每批试验分三个组，即阴性对照组，阳性对照组及双虎清肝颗粒对照组，每组5只鸭子。 一日龄北京鸭，经腿胫静脉注射DHBV-DBA阳性血清0.2ml/只，在感染后7天分三个组，按上述剂量灌胃给药或生理盐水治疗，共10天，第一、第二批试验阳性对照药乙肝清热冲剂和双虎清肝颗粒给药剂量均为5g/kg(2.5g/次，2次/日)，第三批试验各给7.5g/kg(2.5g/k)/次，3次/日)，阴性对照组给同何种生理盐水。 在感染后第7天即给药前(T0)、给药后第4天(T4)、7天(T7)、10天(T10)和停药后3天(P3)，自鸭腿静脉取血，分离血清，-70℃保存待检测。 检测方法：取上述待检鸭血清，每批同时点膜，测定鸭血清中DHBV-DNA水平的动态。按进口试剂翻译盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标检测仪测定OD值作为标本DHBV-DNA水平值。 7、药效计算： 1)计算每组鸭不同时间(T0、T4、T7 、T10 、P3)血清DNA的OD值均值(±SD)，并将每组鸭用药后不同时间与同组给药前(T0)比较，经T检验分析差异的显著性。 2)按下式计算每组鸭用治疗后不同时间血清DHBV-DNA抑制率(%)。 给药前(T0)DNA的OD值-给药后DNA的OD值 DNA的抑制率(%)= X100% 给药前DNA的OD值 结 果 三批试验结果见表1、2、3。 表1 双虎清肝颗粒对DHBV-DNA感染鸭的治疗作用(1)(n=5) 剂量 组别 (g/kg) 血清DHBV-DNA水平 T0 OD值 T4 OD值 抑制率(%) T7 OD值 抑制率(%) 阴性对照 2.8±1.1 3.2±1.3 -14.3 3.0±0.7 -1.7 阳性对照 5 4.0±0 2.2±1.1※ 45 3.2±1.3 20 双虎清肝颗粒 5 3.8±0.5 2.4±1.5 36.8 1.8±1.3※ 52.6 血清DHBV-DNA水平 剂量 组别 (g/kg) T10 OD值 抑制率(%) P3 OD值 抑制率(%) 阴性对照 3.8±0.5 -35.7 2.8±0 0 阳性对照 5 2.5±1.5 37.5 2.8±1.3 30.0 双虎清肝颗粒 5 1.6±1.5※ 57.9 1.8±2.1 52.6 注：※P<0.05 表2 双虎清肝颗粒对DHBV-DNA感染鸭的治疗作用(2) (n=5) 血清DHBV-DNA水平 剂量 组别 g/kg T0 T4 T7 T10 OD值 OD值 抑制率(%) OD值 抑制率(%) OD值 抑制率(%) 阴性对照 4.0±0.0 3.6±0.9 10.0 3.6±10.0 10.0 3.2±0.5 20.0 阳性对照 5 3.0±1.2 2.8±1.1 6.7 3.8±0.4 -26.7 3.4±0.9 13.3 双虎清肝颗粒 5 3.4±0.9 2.3±1.1※ 32.4 2.1±1.4※ 38.2 1.6±1.5※ 52.9 注：※P<0.05 表3 双虎清肝颗粒对DHBV-DNA感染鸭的治疗作用(3) (n=5) 血清DHBV-DNA水平 剂量 组别 g/kg T0 T4 T7 T10 OD值 OD值 抑制率(%) OD值 抑制率(%) OD值 抑制率(%) 阴性对照 2.2±1.3 1.8±0.8 18.2 1.9±1.1 13.6 1.3±0.7 40.9 阳性对照 7.5 1.4±0.5 1.4±1.1 0 1.3±1.0 7.1 1.2±1.0 14.3 双虎清肝颗粒 7.5 1.7±1.0 0.5±1.4※ 76.5 0.2±0.3※ 88.2 0.1±0.2※※ 94.1 注：※P<0.05 ※※P<0.01 结 论 本试验用DHBV-DNA感染鸭后，以5、7.5g/kg/的剂量口服给双虎清肝颗粒治疗10天，观察该药对鸭体内感染的乙肝病毒的作用，三批试验结果表明，该药能抑制鸭体内感染的DHBV-DNA，与给药前比较差异显著（P<0.05）,当剂量增加到7.5g/kg/日时，其抑制效应更加明显，其作用明显优于阳性对照药。