大豆磷脂维生素E脂质体的制备(1)

万方数据 三艺技采 本实验采用的是粉状混合磷脂，没有准确的相 变点，赦本实验采取选择溺～处方霞定其谴缓分黪 比例和条件不变，只改变温度制备维生素E脂质体， 测定其包封率。梭测不同温度下制备的脂质体包封 率魄大小寒确定合成§蓦蒺豁黪湿度。缀据文歙网，剃 备了42、44、46、48、50℃时5组脂质体并测定其包封 率，包封率结果见圈1。 80 70 一60 邕50 瓣40 蔷；： 10 O 42 44 46 48 50 温度(℃) 图1不同温度对包封率的影响 从蘸l孛可敬看出，溪定其它条辩不变的。隧况 下，维生素E脂质体的包圭寸率与温度Ⅲ肇现曲线的关 系，当温度为46℃时，维生索E脂质体的包封率最 高，为7l+90％，交戴礁定46℃是最佳、懑发。 2．2磷脂含置对包封率的影响 固定其他组分的比例不变(维生素E质量0．1g、胆 固醇O．29、湿度46℃、溶剂120mL)，只敬变维生索E 和粉状混合磷脂的比例，制备维生素E脂质体，包封 率结果她图2。 80 70 一60 邕50 蝌40 蚕；： lO O 1：5 l：lO l：15 l：20 l：25 l：30 l：35 药貉毙(似：试) 图2粉状磷脂含量对包封率的影响 从图2中可以看出，随饕粉状磷艨的增热，维生 素E脂质体的包瓣率增大，但药脂比(维生素E与粉 状磷脂的质量比)大于1：20时包封率趋于稳定，综合 实验结聚帮实际愤浇，在后灏的单因素实验中，确定 粉状混合磷脂的旗量为2．59，郎维生褰E对磷脂的 质量比为1：25。 2。3胆阑醇含量对包封率的影晌 考察了莠萎圊器蓼含量对维生素E脂质体包封率酶 影响，选择同一处方固定其他组分(1．5{；!；粉状混合磷 脂，维生素E0．1冀，溶剂120mL)，只改变胆固醇的含 量裁备宝毽生素E疆质体。霞封率坌鑫栗觅匿3。 从网3中可以看出，随着胆固醇的增加，维生索E i，01．28，A’o．05，2007 一薰 登50 鳃 1： O．i：O，25O．1：O．20O．1：0．15O．1：O．100．1：O．t)5 维生豢E囊董：疆瓣簿覆量 图3不同胆嘲醇含量对包封率的影响 月黯质体的包挝率增大，但维生素E与胆固醇的质量比 为l：2时包瓣率达到最大，为68．0l％。敖警维生素E 与胆固醇在脂质体中质量比是l：2．0时，包挝率最大。 2．4溶剂量对包封率的影响 有祝漆髑对脂凑豁酶作矮跫霹溶熬§舞壤薅中的 磷脂成分。为了明溶剂量对包封率的影响，选择同 一处方，固怒其他组分的比例不变(维生豢E质量 O．19、胆固酶O。159、粉状混合磷脂l，59、瀑度46℃)， 只改变体积比为2／l的三氯甲烷／甲醇混合溶剂量， 制备维生索E脂质体。包封率结果见图4。 80 70 一60 登50 篓40 釜30 20 10 0 l∞ 120 l∞ 80 鳓 溶荆含量(mL) 图4溶剂含量对包封率的影响 从图4中可以奏惑，在一定条律下，隧着溶剡含 最的增加，维生素E脂质体的包封率增大，当溶剂含 墩为120mL时，包封率达到最大，为68．01％，19维生 豢E对应1200mL体积比为2：l的三氯甲烧／甲醇混 合有枧溶剂，继续加入，包封率逐渐减少。 2．5正交设计确定维生素E脂质体配方 2．5。l正交实验制备维生素E脂凄体的初步实验 分析，影响维生素E脂旋体包封率的主要因素仃：温 度、包封体系中胆固醇的含量、粉状混合磷脂的含量 以及有机溶剂加入量。因此，用k(34)表藏交实验设 计法进行实验，礁定维生素E嚣羚质体的配方篦镶冤 裘l。 表1歪交实验设计 万方数据 Scie札ce帆a1ech托ot090FooaI札dustq 按照表l正交实验设计确定的配方，进行正交 设计，以维生素E包封率为指标，结果见表2。 表2维生素E脂质体正交设计结果 从表2的K值分析可看出，A：B：C2D，为最优工 艺条件，然而依此条件所得出的维生素E包封率不 如实验4的包封率高，因此，在选定的范围内用复乳 法获得维生素E脂质体的最佳制备工艺条件为 A：B-C。D，，即从室温升到46℃，粉状混合磷脂加入量 为2．59(维生素E对磷脂的质量比为1：25)，胆固醇 量为O．259(维生素E与胆固醇的质量比为l：2．0)，体 积比为2：1的三氯甲烷／甲醇混合有机溶剂为80mL (19维生素E对应1200mL体积比为2：1的三氯甲 烷／甲醇混合有机溶剂)；对包封率的影响因素贡献依 次为：A>C>D>B。 三艺技jfc 2．5．2验证实验用A：B，C：D3的条件做了三次平行实 验，以验证实际是否与正交实验相符，证明正交实验 结果是否可信。三次平行实验其包封率分别为 75．72％，75．76％，75．74％，结果与正交实验基本相符， 证明正交实验结果是可信的。 3结论 本文复乳法制备维生素E脂质体，并通过正交实 验确定了最佳制备条件为：温度46℃，粉状混合磷脂 加入量为2．59(维生素E对磷脂的质量比为l：25)， 胆固醇量为O．259(维生素E与胆固醇的质量比为1： 2．0)，体积比为2：1的三氯甲烷／甲醇混合有机溶剂 为80mL(19维生素E对应1200mL体积比为2：1的 三氯甲烷／甲醇混合有机溶剂)。在此条件下，大豆混 合磷脂对维生素E的包封率为75．74％。 参考文献： [1】林强，刘国川．维生素E脂质体的制备与性能研究【J]．日用 化学品科学，2006，29(1)：22． [2】梁玉增．包埋Ve和Vc卵磷脂脂质体的合成[J]．日用化学 工业，1994，40：7． [3]吕洛，魏少敏．脂质体载药系统经皮给药的研究进展[J]．日 用化学工业，2002，32(5)：51． [4】李国锋，周日红，曾抗，等．维生素E脂质体的制备【J]．中国 应用药学，1997，14(4)：18． 【5】中华人民共和国卫生部药典委员会．中国药典一部[M]．北 京：化学工业出版社，1995：附录． 【6] DavidH．Liposomepreparationandmaterialencapsulation method[P】．UnitedStatesPatent，6，355，267March12，2002． ·—。卜*’‘_卜。—+-“—卜”—。卜-+-+一十”‘’_卜”—●一-—。卜一+一+-—+一-—_卜”—．卜*—’卜”—。卜一—。●一*+-十一+-+*+-+-·+*+-+-+-+-+”+-+-+-+-+一+-+”+”+-+一+一+-+一+一+ (上接第139页) 表2燕麦油脂肪酸分析结果 [2】王肇慈．粮油食品品质分析[M]．北京：中国轻工业出版社， 2005．50—51． [3]WalkerTH，eta1．Supercriticalcarbondioxideextractionof lipidsf而mpythiumirTegulare【J]．JAm0ilChemSoc，1999，76 (5)：617～621． [4]孙冀平，计咏燕，等．超临界COz萃取菜籽油初步研究【J]． 粮食与油脂，2002(5)：2—4． [5]沈立荣，任玉翠，等．超临界C02萃取鼎突多刺蚁蚁油的正 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方法:实验于2002-06/2003-09在武汉大学医学院病理生理实验室完成.实验大鼠40只,单纯心肌缺血组10只、大豆磷脂脂质体保护组10只、携硒和锌及维 生素E的大豆磷脂脂质体保护组10只,皮下注射异丙基肾上腺素30 mg/kg,连续3 d,制成心肌缺血模型;正常对照组10只不造模,注射等量的生理盐水.造模 前大豆磷脂脂质体保护组灌服大豆磷脂脂质体(150 mg/kg),携硒和锌及维生素E的大豆磷脂脂质体保护组大鼠灌服携硒、锌、维生素E的大豆磷脂脂质体 20 d,灌胃量为10 μL/g,正常对照组、单纯心肌缺血组则灌服等量的生理盐水.检测大鼠血浆磷酸肌酸激酶活性采用生化法,检测心肌细胞凋亡率应用脱 氧核糖核苷末端转移酶标记法,检测细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达应用免疫组织化学法. 结果:进入结果分析实验大鼠40只.①血浆磷酸肌酸激酶活性:单纯心肌缺血组比正常对照组显著增强[(4.4±0.8),(2.2±0.4)μkat/L,P＜0.01].大豆磷 脂脂质体保护组较单纯心肌缺血组明显降低[(3.2±1.3)μkat/L,P＜0.01],而携硒和锌及维生素E的大豆磷脂脂质体保护组也较单纯心肌缺血组显著降低 [(2.4±0.5)μkat/L,P＜0.01],但两处理组之间无差异.②心肌细胞凋亡率:单纯心肌缺血组明显高于正常对照组 [(31.81±5.63)%,(3.59±1.35)%,P＜0.01],大豆磷脂脂质体保护组及携硒和锌及维生素E的大豆磷脂脂质体保护组明显低于单纯心肌缺血组 [(19.91±4.03)%,(13.33±2.79)%,P＜0.01],且后者减少缺血心肌细胞凋亡的效应明显高于单纯大豆磷脂脂质体处理组(P＜0.05).③心肌组织Bcl-2及 Bax表达(吸光度值)的比较:单纯心肌缺血组均比正常对照组表达明显增多(0.302±0.017和0.281±0.011,0.304±0.013和0.253±0.011,P＜0.01或 0.05);大豆磷脂脂质体保护组较单纯心肌缺血组Bax蛋白表达明显减少(0.286±0.010,P＜0.01),Bcl-2蛋白表达则明显增多(0.319±0.017,P＜0.01);携 硒和锌及维生素E的大豆磷脂脂质体保护组较大豆磷脂脂质体保护组Bcl-2蛋白表达明显增多(0.321±0.018,P＜0.01),Bax表达明显减少 (0.263±0.009,P＜0.01). 结论:口服携硒、锌、维生素E大豆磷脂脂质体可通过保护细胞生物膜的作用,抑制心肌细胞凋亡而发挥保护心肌缺血损伤的效应. 2.学位论文 易华 携硒、锌、VitE大豆磷脂脂质体抗大鼠心肌缺血的研究 2003 目的:探讨口服携硒、锌、维生素E大豆磷脂脂质体对大鼠心肌缺血性损伤的保护效应及机制.方法:采用生化法、TUNEL法及免疫组化法等技术,分别 对单纯心肌缺血组(Ⅱ组),大豆磷脂脂质体保护组(Ⅲ组),携硒、锌、维生素E大豆磷脂脂质体保护组(Ⅳ组)等三组异丙基肾上腺素所复制的心肌缺血性损 伤模型大鼠及正常对照组(Ⅰ组)大鼠的血浆肌酸磷酸激酶(CPK)、血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性,心肌丙二醛 (MDA)含量、细胞凋亡及相关基因bcl-2、bax、caspase-3蛋白的表达进行检测和组间比较.结论:口服携硒、锌、维生素E大豆磷脂脂质体可通过减轻心肌 组织的病理损伤、减少缺血时心肌酶漏出、拮抗氧自由基脂质过氧化反应及抑制细胞凋亡等机制而发挥保护心肌缺血性损伤的效应,为抗心肌缺血的实际 应用提供了新的实验依据. 3.期刊论文 穆筱梅.钟振声.Mu Xiaomei.Zhong Zaensheng 维生素E、维生素C和BHT对大豆磷脂脂质体的抗氧化作 用 -大豆科学2006,25(4) 用共轭二烯法和硫代巴比妥酸法,研究了维生素E对大豆磷脂脂质体的抗氧化作用,以及维生素C和BHT对维生素E抗氧化作用的影响.结果表明,维生素 E可抑制大豆磷脂脂质体的氧化,其抑制作用随着加入量的增加而增强.维生素C和BHT对维生素E的抗氧化作用具有明显的协同作用,BHT的协同作用强于维 生素C.因此以大豆磷脂为原料制备脂质体的最佳抗氧化剂是维生素E和BHT,最佳用量是x(维生素E)=5%,x(BHT)=4%. 4.期刊论文 易华.刘爱军 携硒、锌、VitE大豆磷脂脂质体对大鼠心肌Caspase-3表达的影响 -中外健康文摘 2010,7(24) 目的 携硒、锌、维生素E大豆磷脂脂质体可通过抑制caspase-3表达发挥保护心肌缺血损伤的效应. 5.期刊论文 易华.孙军.董传仁 携硒、锌、维生素E的大豆磷脂脂质体对心肌缺血大鼠治疗作用的探讨 -山东医药 2005,45(11) 研究表明,静注大豆磷脂脂质体(SPL)对缺血_再灌注心肌膜损伤具有明显的保护作用.其口服制剂是否仍具有相同的效应尚未展开研究.2002年4月至 2003年7月,我们以异丙肾上腺素(ISO)复制大鼠心肌缺血模型,以SPL包裹硒、锌、维生素E制成口服液(下称SPL混合液)灌服,以探讨其对实验性心肌缺血 的保护效应及机制,为临床研究应用提供实验依据. 6.学位论文 刘亚文 化妆品天然乳化剂的研究 2007 本课题主要完成了大豆磷脂的分离提纯、酶水解改性及其改性产物性能测定以及使用大豆磷脂制备维生素C脂质体的研究。 采用浓缩大豆磷脂为原料，探索了以乙醇、乙酸乙酯、异丙醇作为溶剂以及使用无机盐沉淀方法提取大豆磷脂主要乳化成分磷脂酰胆碱的工艺条件 。最终确定以乙醇作为提取溶剂，提取温度为45(±1)℃，料液比为1：4，提取次数为6次，磷脂酰胆碱在提取物中的百分含量达到45％以上，提取率在 80％以上。 使用提纯后的产物进行酶水解改性的研究，其最优条件是：反应温度为38(±1)℃、反应时间为7h、酶的用量为100IU/mL、钙离子的浓度为 0.025M/L、缓冲液的pH值为8.50、底物浓度为10.0％。在最佳水解反应条件下所测得的酸价为55.03mgKOH/g，水解率在87.6％-94.0％。 经硅胶柱层析分离可以得到不同极性的三类磷脂，担体与待分离物的比例为100：1。采用梯度洗脱方式进行分离，洗脱剂的条件是氯仿与甲醇的比 例由1：1改变至1：2到1：4，直至用甲醇洗脱。分别得到未知组分磷脂、卵磷脂以及溶血磷脂的浓缩液。未知组分磷脂的高效液相色谱峰面积经归一化 计算后达到96.32％，溶血磷脂的含量达到了67.52％。 采用R.K.Gupta法测定溶血磷脂的HLB值为9，与水解前的磷脂相比提高50％，乳化稳定性与市售非离子乳化剂乳化效果相似。 采用薄膜分散-超声乳化法制备，以包封率为考察指标，经正交优化选择，确定脂质体的最佳配方：卵磷脂/胆固醇/维生素E的摩尔比为 4：2：0.34；维生素C的浓度为3.3mg/mL；PBS缓冲液的pH值为7.93；成膜时所用氯仿的量为25mL，此时包封率可达58.32％。用扫描电子显微镜观察脂质 体的结构，平均粒径为310nm。经脂质体包裹以后，维生素C的稳定性增强。 7.期刊论文 汪长华.梅运清.胡国胜.刘治晏.董传仁 大豆磷脂和维生素E延长出血性休克家兔存活时间 -中国病理 生理杂志2000,16(10) 目的:包括细胞膜等在内的生物膜损伤在休克的发生、发展过程中起着重要作用,磷脂被证实对多种生物膜损伤所致的疾病均有一定程度的保护作用 ,维生素E则具抗氧化作用. 8.期刊论文 陈润杰.莫凤奎.许琼明.陈春在 反胶束体系中猪胰脂酶水解维生素E醋酸酯的研究 -中国药物化学杂志 2002,12(1) 目的探索反胶束体系中维生素E醋酸酯酶促水解规律.方法以Fe 2+引发的大豆磷脂-庚烷反胶束体系的脂质过氧化为间接检测手段,考察温度、含水量 、猪胰脂酶浓度及反应时间等对维生素E醋酸酯酶促水解的影响.结果在Triton X-100/环己烷反胶束体系中,猪胰脂酶对维生素E醋酸酯具有水解活性.结 论发挥水解活性的最佳温度为35℃,最佳含水量W0为12 8,且随着猪胰脂酶浓度的增大,维生素E醋酸酯水解程度增大. 9.期刊论文 吴竞.霍明 大豆磷脂在动物生产中的应用 -养殖技术顾问2010,""(9) 大豆磷脂产品的主要成分有油脂、磷脂、胆碱、不饱和脂肪酸和维生素E等.磷脂是生物膜的重要组成部分,是动物脑、神经组织、骨髓和内脏中不可 缺少的组成部分,对幼龄动物的生长发育非常重要.大部分磷脂以脂蛋白复合体的形式存在于细胞壁基质、细胞膜、髓鞘、线粒体和微粒体中,其作用是使 非极性物质具有很高的通透性.现将大豆磷脂在动物生产中的应用介绍如下. 10.期刊论文 张伟光.梁继宏.肖英慧.安红.邸凯.ZHANG Weiguang.LIANG Jihong.XIAO Yinghui.AN Hong.DI Kai 大豆磷脂阿奇霉素阳离子脂质体的制备及性质研究 -中国酿造2009,""(4) 利用大豆粉状磷脂,采用薄膜法结合冻融法制备阿奇霉素阳离子脂质体,以高效液相色谱法为分析手段,采用反透析法测定阿奇霉素脂质体的包封率 .研究了阿奇霉素脂质体配方中不同成分的比例.阿奇霉素脂质体的最佳制备条件为:水浴温度为40℃,m(阿奇霉素):m(磷脂)=1:25,m(阿奇霉素):m(维生素 E)=40:1,m(阿奇霉素):m(十八胺)=2.5:1,加入10%的麦芽糖水溶液为20mL,在此条件下,阿奇霉素阳离子脂质体的包封率为76.07%.从形态、粒径、体外释 药特性等方而对阿奇霉素脂质体进行了质量评价,并研究在小鼠体内的分布. 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_spgykj200705038.aspx 授权使用：洛阳理工学院(lylg)，授权号：1f28410b-c5bd-49ff-b28b-9e5400b1f002 下载时间：2010年12月22日